Molecular studies reveal a concordant KEL genotyping between patients with hemoglobinopathies and blood donors in São Paulo City, Brazil

Universidade Federal de São Paulo, Discipline Hematol & Transfus Med, BR-04023092 São Paulo, BrazilUniversidade Federal de São Paulo, Discipline Hematol & Transfus Med, BR-04023092 São Paulo, BrazilWeb of Scienc

Human neutrophil alloantigens systems

Neutrophil alloantigens are involved in a variety of clinical conditions including immune neutropenias, transfusion-related acute lung injury (TRALI), refractoriness to granulocyte transfusions and febrile transfusion reactions. In the last decade, considerable progress has been made in the characterization of the implicated antigens. Currently, seven antigens are assigned to five human neutrophil antigen (HNA) systems. The HNA-1a, HNA-1b and HNA-1c antigens have been identified as polymorphic forms of the neutrophil Fcγ receptor IIIb (CD16b), encoded by three alleles. Recently, the primary structure of the HNA-2a antigen was elucidated and the HNA-2a-bearing glycoprotein was identified as a member of the Ly-6/uPAR superfamily, which has been clustered as CD177. The HNA-3a antigen is located on a 70-95 kDa glycoprotein; however, its molecular basis is still unknown. Finally, the HNA-4a and HNA-5a antigens were found to be caused by single nucleotide mutations in the αM (CD11b) and αL (CD11a) subunits of the leucocyte adhesion molecules (β2 integrins). Molecular and biochemical characterization of neutrophil antigenshave expanded our diagnostic tools by the introduction of genotyping techniques and immunoassays for antibody identification. Further studies in the field of neutrophil immunology will facilitate the prevention and management of transfusion reactions and immune diseases caused by neutrophil antibodies.Os aloantígenos de neutrófilos estão associados a várias condições clínicas como neutropenias imunes, insuficiência pulmonar relacionada à transfusão (TRALI), refratariedade à transfusão de granulócitos, e reações transfusionais febris. Na última década, foi observado considerável progresso na caracterização dos aloantígenos envolvidos nestas condições clínicas. Atualmente sete antígenos estão incluídos em cinco sistemas de antígenos de neutrófilo humano (HNA). Os antígenos HNA-1a, HNA-1b e HNA-1c foram identificados como formas polimórficas do receptor Fcγ RIIIb (CD16b), codificados por três alelos. Recentemente, a estrutura primária do antígeno HNA-2a foi elucidada e a glicoproteína carreadora do antígeno foi identificada como um membro da superfamília Ly-6/uPARe designada como CD177. O antígeno HNA-3a está localizadoem uma glicoproteína de 70-90 kDa, entretanto sua base molecular ainda é desconhecida. Finalmente, os antígenos HNA-4ae HNA-5a são resultantes de mutações de um único nucleotídeo nas subunidades αM (CD11b) and αL (CD11a) das moléculas de adesão de leucócitos (β2 integrinas). A caracterização molecular e bioquímica dos antígenos neutrofílicos permitiu a expansão das ferramentas diagnósticas pela introdução de técnicas de genotipagem e imunoensaios para a identificação de anticorpos. Novos estudos envolvendo a imunologia de granulócitos serão de grande valor para a prevenção e tratamento de reações transfusionais e doenças imunes causadas por aloanticorpos de neutrófilos.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)UNIFESPSciEL

Determination of genotipic frenquence of platelet antigen in blood donners and south american indians

A frequencia de alo-antigenos piaquetarios tem sido descrita em varias populacoes devido a sua importancia clinica e associacao a sindromes trombocitopenicas tais como, a purpura trombocitopenica aloimune neonatal (PTAN), a purpura pos-transfusional (PPT), e a refratariedade a transfusao de plaquetas. O diagnostico correto e o tratamento precoce sao determinantes para evitar sequelas neurologicas ou mortalidade fetal. O presente estudo, teve por objetivo determinar a frequencia de alo-antigenos piaquetarios na nossa populacao uma vez que, as frequencias genotipicas podem antigeno piaquetario HPA-la e o antigeno mais implicado na PTAN, enquanto que nos asiaticos e o alo-antigeno HPA-4a. Foram estudados 95 indios da tribo Xikrin e 79 doadores de sangue mesticos do Hemocentro da UNIFESP/EPM - Hospital São Paulo utilizando a tecnica de PCR-SSP para os sistema HPA-1, -2, -3 e -5 e seus respectivos alelos. As amostras de sangue foram coletadas em anticoagulante EDTA ou heparina e congeladas, apos o descongelamento lisou-se as hemacias e a seguir os leucocitos. Extraiu-se o DNA com fenol-cloroformio e precipitou-se com etanol absoluto. O DNA extraido foi amplificado por PCR-SSP utilizando-se o kit de Taq DNA polimerase, dNTP, e iniciadores especificos para cada aleio com as concentracoes e condicoes de reacoes padronizadas. Alem disso, foi usado o iniciador de HCH como controle interno da reacao. Os produtos amplificados foram eletroforeticamente separados em gel de agarose com brometo de etidio e visualizados em luz ultravioleta. As amostras analisadas apresentam dois fragmentos quando a reacao e positiva, sendo um fragmento com 429 pb (HCH) e um outro fragmento com peso molecular menor que corresponde ao alelo em estudo (HPA-1 = 244 pb; HPA-2 = 244 pb; HPA-3 = 251 pb; e HPA-5 = 246 pb). Se a reacao e negativa apresenta somente um fragmento de 429pb. Para a analise dos resultados foram aplicados o teste do qui-quadrado com um 2 grau de liberdade( X2 lgl ) e metodo exato para o calculo de intervalo de confianca (IC) de 95 por cento para cada proporcao obtida (p). O nivel de significancia estatistica foi de 5 por cento . As frequencias genicas dos grupos estudados foram: HPA -la -lb -2a -2b -3a -3b -5a -Sb indios 1,00 O,OOO O,963 O,037 O,708 O,292 O,963 O,037 Doadores O,918 O,082 O,816 O,139 O,640 O,360 O,825 O,175 valor p < O.001 p = O,001 p = O,193 p < O.001 Comparando-se ...(au)BV UNIFESP: Teses e dissertaçõe

Reducao da exposicao a doadores de sangue em prematuros submetidos a transfusoes de hemaciascom uso de bolsas de transferencia pediatricas

OBJECTIVE:In preterm newborn infants transfused with erythrocytes stored up to 28 days, to compare the reduction of blood donor exposure in two groups of infants classified according to birth weight.METHODS:A prospective study was conducted with preterm infants with birth weight <1000g (Group 1) and 1000-1499g (Group 2), born between April, 2008 and December, 2009. Neonates submitted to exchange transfusions, emergency erythrocyte transfusion, or those who died in the first 24 hours of life were excluded. Transfusions were indicated according to the local guideline using pediatric transfusion satellite bags. Demographic and clinical data, besides number of transfusions and donors were assessed. . Logistic regression analysis was performed to determine factors associated with multiple transfusions.RESULTS:30 and 48 neonates were included in Groups 1 and 2, respectively. The percentage of newborns with more than one erythrocyte transfusion (90 versus 11%), the median number of transfusions (3 versus 1) and the median of blood donors (2 versus 1) were higher in Group 1 (p<0.001), compared to Group 2. Among those with multiple transfusions, 14 (82%) and one (50%) presented 50% reduction in the number of blood donors, respectively in Groups 1 and 2. Factors associated with multiple transfusions were: birth weight <1000g (OR 11.91; 95%CI 2.14-66.27) and presence of arterial umbilical catheter (OR 8.59; 95%CI 1.94-38.13), adjusted for confounders.CONCLUSIONS:The efficacy of pediatrics satellites bags on blood donor reduction was higher in preterm infants with birth weight <1000g.OBJETIVOEn prematuros transfundidos con hematíes preservados por hasta 28 días, comparar la reducción de exposición a donantes en dos grupos de pacientes, según el peso al nacer.MÉTODOSe trata de un estudio prospectivo con prematuros con peso al nacer <1000g (Grupo 1) y de 1000-1499g (Grupo 2), nacidos entre abr/2008 a dic/2009. Se excluyeron recién-nacidos sometidos a exsanguineotransfusión, transfusión de emergencia u óbito antes de 24 horas de vida. Las transfusiones fueron indicadas según la rutina del servicio, utilizando bolsas de transferencia pediátrica. Se analizaron datos demográficos, clínicos y número de transfusiones y donantes. Variables categóricas fueron comparadas por la prueba de chi-cuadrado y numéricas por la prueba t o Mann-Whitney. Se utilizó regresión logística para análisis de factores asociados a las múltiples transfusiones.RESULTADOS:Se incluyeron 30 prematuros en el Grupo 1 y 48 en el Grupo 2. El porcentaje de prematuros que recibió más de una transfusión de hematíes (89,5 versus 10,5%), la mediana del número de transfusiones (3 versus 1) y la mediana de donantes (2 versus 1) fue mayor en el Grupo 1, comparado al Grupo 2 (p<0,001). Entre aquellos con transfusiones múltiples, 14 (82,4%) y 1 (50,0%) prematuros presentaron reducción de 50% de donantes respectivamente en los Grupos 1 y 2. Los factores asociados a múltiples transfusiones fueron peso al nacer <1000g (OR 11,91; IC95% 2,14-66,27) y presencia de catéter arterial umbilical (8,59; 1,94-38,13), controlados para variables de confusión.CONCLUSIONESLa eficacia de las bolsas de transferencia pediátricas para reducir la exposición a donantes de sangre fue mayor en prematuros con peso al nacer <1000g.OBJETIVOEm prematuros transfundidos com hemácias preservadas por até 28 dias, comparar a redução de exposição a doadores em dois grupos de pacientes, de acordo com o peso ao nascer.MÉTODOSEstudo prospectivo de prematuros com peso ao nascer <1000g (Grupo 1) e de 1000-1499g (Grupo 2), nascidos entre abril de 2008 e dezembro de 2009. Excluíram-se os recém-nascidos submetidos a exsanguineotransfusão, transfusão de emergência ou óbito antes de 24 horas de vida. As transfusões foram indicadas conforme rotina do serviço, utilizando-se bolsas de transferência pediátricas. Analisaram-se dados demográficos, clínicos e número de transfusões e doadores. Utilizou-se regressão logística para análise de fatores associados às múltiplas transfusões.RESULTADOSIncluíram-se 30 prematuros no Grupo 1 e 48 no Grupo 2. A porcentagem de prematuros que receberam mais de uma transfusão de hemácias (90 versus 11%), a mediana do número de transfusões (3 versus 1) e mediana de doadores (2 versus 1) foram maiores no Grupo 1, comparado ao Grupo 2 (p<0,001). Entre aqueles com transfusões múltiplas, 14 (82%) e um (50%) prematuros apresentaram redução de 50% de doadores respectivamente nos Grupos 1 e 2. Os fatores associados a múltiplas transfusões foram peso ao nascer <1000g (OR 11,91; IC95% 2,14-66,27) e presença de cateter arterial umbilical (OR 8,59; IC95% 1,94-38,13), controlados para variáveis de confusão.CONCLUSÕESA eficácia das bolsas de transferência pediátricas para reduzir a exposição a doadores de sangue foi maior em prematuros com peso ao nascer <1000g.Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), Escola Paulista de Medicina (EPM)UNIFESP, EPMSciEL

HNA-3 gene frequencies in Brazilians and a new polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism method for HNA-3a/3b genotyping

Background HNA-3 antigens are the result of a rs2288904 single-nucleotide polymorphism (SNP) in the CTL2, and the HNA-3a and HNA-3b variants are encoded by a guanine and adenine at Nucleotide Position 461. Anti-HNA-3 are involved in severe transfusion-related acute lung injury reactions and in neonatal alloimmune neutropenia. Since the distribution of the HNA-3 system was unknown in South Americans, in this study we determined the frequency of the HNA-3 alleles in Brazilians. Study Design and Methods DNA of 500 blood donors, 120 Xikrin Amerindians, 74 Japanese individuals, and 124 African Brazilians were genotyped for rs2288904 by a polymerase chain reaction (PCR)-restriction fragment length polymorphism assay. the PCR product was digested with enzyme Taq1, specific to nucleotide guanine (HNA-3a). Results the results showed that the frequencies of the HNA-3a/HNA-3b alleles were 0.81/0.19 in blood donors, 1.00/0.00 in Amerindians, 0.63/0.37 in Japanese, and 0.85/0.15 in African Brazilians. All 81 individuals genotyped as HNA-3a/a did not present the SNP c.457T by molecular sequencing. Conclusion the frequencies of HNA-3 genotypes in Brazilian blood donors is similar to that described in Caucasians; however, all Amerindians were HNA-3a/a, African Brazilians showed a lower frequency of HNA-3b/b, and Japanese had a higher prevalence of HNA-3b/b, suggesting that they may be at risk for developing anti-HNA-3a alloantibodies.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)Universidade Federal de São Paulo, São Paulo, BrazilFac Med Marilia FAMEMA, Marilia, BrazilUniversidade Federal de São Paulo, São Paulo, BrazilCNPq: 142825/2009-3Web of Scienc