Effect of Bovine leukemia virus on bovine mammary epithelial cells

Bovine leukemia virus (BLV) is a retrovirus that infects cattle and is associated with an increase in secondary infections. The objective of this study was to analyze the effect of BLV infection on cell viability, apoptosis and morphology of a bovine mammary epithelial cell line (MAC-T), as well as Toll like receptors (TLR) and cytokine mRNA expression. Our findings show that BLV infection causes late syncytium formation, a decrease in cell viability, downregulation of the anti-apoptotic gene Bcl-2, and an increase in TLR9 mRNA expression. Moreover, we analyzed how this stably infected cell line respond to the exposure to Staphylococcus aureus (S. aureus), a pathogen known to cause chronic mastitis. In the presence of S. aureus, MAC-T BLV cells had decreased viability and decreased Bcl-2 and TLR2 mRNA expression. The results suggest that mammary epithelial cells infected with BLV have altered the apoptotic and immune pathways, probably affecting their response to bacteria and favoring the development of mastitis.Fil: Martinez Cuesta, Lucia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentina. Kansas State University. College of Veterinary Medicine. Department of Diagnostic Medicine and Pathobiology; Estados UnidosFil: Nieto Farías, María Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; ArgentinaFil: Lendez, Pamela Anahí. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; ArgentinaFil: Rowland, Raymond R. R.. Kansas State University. College of Veterinary Medicine. Department of Diagnostic Medicine and Pathobiology; Estados UnidosFil: Sheahan, Maureen A.. Kansas State University. College of Veterinary Medicine. Department of Diagnostic Medicine and Pathobiology; Estados UnidosFil: Cheuquepán Valenzuela, Felipe Andrés. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Agencia de Extensión Rural Balcarce; ArgentinaFil: Marin, Maia Solange. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Agencia de Extensión Rural Balcarce; ArgentinaFil: Dolcini, Guillermina Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; ArgentinaFil: Ceriani, Maria Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentin

MANα1-2MAN decorated liposomes enhance the immunogenicity induced by a DNA vaccine against BoHV-1

New technologies in the field of vaccinology arise as a necessity for the treatment and control of many diseases. Whole virus inactivated vaccines and modified live virus ones used against Bovine Herpesvirus-1 (BoHV-1) infection have several disadvantages. Previous works on DNA vaccines against BoHV-1 have demonstrated the capability to induce humoral and cellular immune responses. Nevertheless, ‘naked’ DNA induces low immunogenic response. Thus, loading of antigen encoding DNA sequences in liposomal formulations targeting dendritic cell receptors could be a promising strategy to better activate these antigen-presenting cells (APC). In this work, a DNA-based vaccine encoding the truncated version of BoHV-1 glycoprotein D (pCIgD) was evaluated alone and encapsulated in a liposomal formulation containing LPS and decorated with MANα1-2MAN-PEG-DOPE (pCIgD-Man-L). The vaccinations were performed in mice and bovines. The results showed that the use of pCIgD-Man-L enhanced the immune response in both animal models. For humoral immunity, significant differences were achieved when total antibody titres and isotypes were assayed in sera. Regarding cellular immunity, a significant increase in the proliferative response against BoHV-1 was detected in animals vaccinated with pCIgD-Man-L when compared to the response induced in animals vaccinated with pCIgD. In addition, upregulation of CD40 molecules on the surface of bovine dendritic cells (DCs) was observed when cells were stimulated and activated with the vaccine formulations. When viral challenge was performed, bovines vaccinated with MANα1-2MAN-PEG-DOPE elicited better protection which was evidenced by a lower viral excretion. These results demonstrate that the dendritic cell targeting using MANα1-2MAN decorated liposomes can boost the immunogenicity resulting in a long-lasting immunity. Liposomes decorated with MANα1-2MAN-PEG-DOPE were tested for the first time as a DNA vaccine nanovehicle in cattle as a preventive treatment against BoHV-1. These results open new perspectives for the design of vaccines for the control of bovine rhinotracheitis.Fil: Kornuta, Claudia Alejandra. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Pque. Centenario. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas; ArgentinaFil: Bidart, Juan Esteban. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Pque. Centenario. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas; ArgentinaFil: Soria, Ivana. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Pque. Centenario. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas; ArgentinaFil: Gammella, Mariela Vanesa. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Pque. Centenario. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas; ArgentinaFil: Quattrocchi, Valeria. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Pque. Centenario. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas; ArgentinaFil: Pappalardo, Juan Sebastian. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Patagonia Norte. Estación Experimental Agropecuaria San Carlos de Bariloche. Instituto de Investigaciones Forestales y Agropecuarias Bariloche. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Patagonia Norte. Instituto de Investigaciones Forestales y Agropecuarias Bariloche; ArgentinaFil: Salmaso, Stefano. Università di Padova; ItaliaFil: Torchilin, Vladimir P. Northeastern University; Estados UnidosFil: Cheuquepán Valenzuela, Felipe Andrés. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; ArgentinaFil: Hecker, Yanina Paola. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; ArgentinaFil: Moore, Dadin Prando. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; ArgentinaFil: Zamorano, Patricia Ines. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Pque. Centenario. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas; ArgentinaFil: Langellotti, Cecilia Ana. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Pque. Centenario. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas; Argentin

Transplacental infection by bovine alphaherpesvirus type 1 induces protein expression of COX-2, iNOS and inflammatory cytokines in fetal lungs and placentas

Bovine alphaherpesvirus type 1 (BoAHV-1) is associated with respiratory and reproductive syndromes. Until present the immunologic mechanisms involved in BoAHV-1 abortion are partially known. We studied key elements of the innate immune response in the placentas and fetal lungs from cattle experimentally-inoculated with BoAHV-1. These tissues were analyzed by histopathology. Furthermore, virus identification was performed by qPCR and the expression of the inflammatory cytokines such as tumor necrosis factor-alpha, interleukin 1-alpha and inflammatory mediators like inducible nitric oxide synthase and cyclooxeganse-2 was evaluated by immunohistochemistry. The viral transplacental infection was confirmed by the detection of BoAHV-1 by qPCR in the placenta and fetal organs, which revealed mild inflammatory lesions. Inducible nitric oxide synthase immunolabelling was high in the lungs of infected fetuses and placentas, as well as for tumor necrosis factor-alpha in the pulmonary parenchyma and cyclooxeganse-2 in fetal annexes. However, the expression of interleukin 1-alpha was weak in these organs. To our knowledge, this is the first study that provides strong evidence of an early immune response to BoAHV-1 infection in the conceptus. Advances in the knowledge of the complex immunological interactions at the feto-maternal unit during BoAHV-1 infection are needed to clarify the pathogenesis of abortion.Fil: Burucúa, Mercedes María. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; ArgentinaFil: Risalde, María A.. Universidad de Córdoba; EspañaFil: Cheuquepán Valenzuela, Felipe Andrés. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; ArgentinaFil: Quintana, Silvina. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones en Sanidad Producción y Ambiente. - Comisión de Investigaciones Científicas de la Provincia de Buenos Aires. Instituto de Investigaciones en Sanidad Producción y Ambiente; ArgentinaFil: Perez, Sandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; ArgentinaFil: Canton, German. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; ArgentinaFil: Moore, Dadin Prando. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; ArgentinaFil: Odeón, Anselmo C.. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Cs.agrarias. Departamento de Producción Animal; ArgentinaFil: Agulló Ros, Irene. Universidad de Córdoba; EspañaFil: Scioli, Maria Valeria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; ArgentinaFil: Barbeito, Claudio Gustavo. Universidad Nacional de la Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Laboratorio de Histología y Embriología Descriptiva, Experimental y Comparada; . Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata; ArgentinaFil: Morrell, Eleonora Lidia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; ArgentinaFil: Marin, Maia Solange. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; Argentin

A plasmid encoding the extracellular domain of CD40 ligand and Montanide™ GEL01 as adjuvants enhance the immunogenicity and the protection induced by a DNA vaccine against BoHV-1

DNA vaccines are capable of inducing humoral and cellular immunity, and are important to control bovine herpesvirus 1 (BoHV-1), an agent of the bovine respiratory disease complex. In previous work, a DNA plasmid that encodes a secreted form of BoHV-1 glycoprotein D (pCIgD) together with commercial adjuvants provided partial protection against viral challenge of bovines. In this work, we evaluate new molecules that could potentiate the DNA vaccine. We show that a plasmid encoding a soluble CD40 ligand (CD40L) and the adjuvant Montanide™ GEL01 (GEL01) activate in vitro bovine afferent lymph dendritic cells (ALDCs). CD40L is a co-stimulating molecule, expressed transiently on activated CD4+ T cells and, to a lesser extent, on activated B cells and platelets. The interaction with its receptor, CD40, exerts effects on the presenting cells, triggering responses in the immune system. GEL01 was designed to improve transfection of DNA vaccines. We vaccinated cattle with: pCIgD; pCIgD-GEL01; pCIgD with GEL01 and CD40L plasmid (named pCIgD-CD40L-GEL01) or with pCIneo vaccines. The results show that CD40L plasmid with GEL01 improved the pCIgD DNA vaccine, increasing anti-BoHV-1 total IgGs, IgG1, IgG2 subclasses, and neutralizing antibodies in serum. After viral challenge, bovines vaccinated with pCIgD-GEL01-CD40L showed a significant decrease in viral excretion and clinical score. On the other hand, 80% of animals in group pCIgD-GEL01-CD40L presented specific anti-BoHV-1 IgG1 antibodies in nasal swabs. In addition, PBMCs from pCIgD-CD40L-GEL01 had the highest percentage of animals with a positive lymphoproliferative response against the virus and significant differences in the secretion of IFNγ and IL-4 by mononuclear cells, indicating the stimulation of the cellular immune response. Overall, the results demonstrate that a plasmid expressing CD40L associated with the adjuvant GEL01 improves the efficacy of a DNA vaccine against BoHV-1.Fil: Kornuta, Claudia Alejandra. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Pque. Centenario. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas; ArgentinaFil: Langellotti, Cecilia Ana. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Pque. Centenario. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas; ArgentinaFil: Bidart, Juan Esteban. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Pque. Centenario. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas; ArgentinaFil: Soria, Ivana. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Pque. Centenario. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas; ArgentinaFil: Quattrocchi, Valeria. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Pque. Centenario. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas; ArgentinaFil: Gammella, Mariela Vanesa. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Pque. Centenario. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas; ArgentinaFil: Cheuquepán Valenzuela, Felipe Andrés. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; ArgentinaFil: Mignaqui, Ana Clara. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Patagonia Norte. Estación Experimental Agropecuaria San Carlos de Bariloche. Instituto de Investigaciones Forestales y Agropecuarias Bariloche. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Patagonia Norte. Instituto de Investigaciones Forestales y Agropecuarias Bariloche; ArgentinaFil: Ferraris, Sergio Raúl. Universidad Maimónides; ArgentinaFil: Charleston, Bryan. Pirbright Institute; Reino UnidoFil: Hecker, Yanina Paola. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; ArgentinaFil: Moore, Dadin Prando. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; ArgentinaFil: Zamorano, Patricia Ines. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Pque. Centenario. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas; Argentin