La vitrificación de ovocitos por método de mínimo volumen, método potencial para la criopreservación de la gameta femenina en bovinos

La producción de ganado vacuno es una de las explotaciones más importantes de nuestro país, siendo la de mayor relevancia en la producción pecuaria. Las biotecnologías asociadas a la reproducción permiten obtener mayores progresos genéticos y disminuir la incidencia de enfermedades de transmisión sexual, entre otras aplicaciones. La vitrificación es una biotecnología que permite la criopreservación de ovocitos y embriones. Consiste en el enfriamiento ultra rápido utilizando soluciones con alta concentración de sustancias crioprotectoras que evita la formación de cristales de hielo. Sin embargo, estas altas concentraciones de crioprotectores producen daño celular principalmente por su toxicidad y su efecto osmótico. Esta biotecnología está siendo utilizada ampliamente con éxito para la criopreservación de ovocitos y embriones humanos en las clínicas de fertilidad, habiendo desplazado en la práctica al congelamiento lento. En el bovino todavía no es utilizada de forma rutinaria, a pesar de que se ha demostrado que mejora la sobrevida embrionaria luego de la criopreservación respecto al congelamiento lento tradicional.Fil: Gutnisky, Cynthia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; ArgentinaFil: Morado, Sergio Adrián. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; ArgentinaFil: Gadze, Tomás. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; ArgentinaFil: Donato, Antonella María. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; ArgentinaFil: Cetica, Pablo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; Argentin

Modulation of glycolisis and the pentose phosphate pathway influences porcine oocyte in vitro maturation

Glycolytic and pentose phosphate pathway (PPP) activities were modulated in porcine cumulus-oocyte complexes (COCs) during in vitro maturation (IVM) by the addition of inhibitors or stimulators of key enzymes of the pathways to elucidate their relative participation in oocyte maturation. The activities of glycolysis and PPP were evaluated by lactate production per COC and by the brilliant cresyl blue test, respectively. Glucose uptake per COC and the oocyte maturation rate were also evaluated. Lactate production, glucose uptake and the percentage of oocytes reaching metaphase II decreased in a dose-dependent manner in the presence of the pharmacological (NaF) or the physiological (ATP) inhibitors of glycolysis (p < 0.05). The addition of the physiological stimulator of glycolysis (AMP) caused no effect on lactate production, glucose uptake or the meiotic maturation rate. The pharmacological (6-AN) and the physiological (NADPH) inhibitors of PPP induced a dose-dependent decrease in the percentage of oocytes with high PPP activity and in the nuclear maturation rate (p < 0.05). The physiological stimulator of PPP (NADP) caused no effect on the percentage of oocytes with high PPP activity. The glycolytic and PPP activities of porcine COCs and maturational competence of oocytes seem to be closely related events. This study shows for the first time the regulatory effect of ATP and NADPH as physiological inhibitors of glycolysis and PPP in porcine COCs, respectively. Besides, these pathways seem to reach their maximum activities in porcine COCs during IVM because no further increases were achieved by the presence of AMP or NADP.Fil: Alvarez, Gabriel Martín. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; ArgentinaFil: Ferretti, E. L.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Gutnisky, Cynthia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Dalvit, Gabriel Carlos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Cetica, Pablo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentin

Efficient cryopreserved bovine sperm selection using glass wool filtration

La criopreservación del semen es ampliamente utilizada en el manejo reproductivo bovino y permite la distribución y comercialización del material genético de esta especie. Sin embargo, los protocolos de congelación/descongelación afectan negativamente la calidad espermática, originando una alta proporción (más del 50%) de espermatozoides muertos y criocapacitados, no aptos para la fecundación. Para obtener espermatozoides funcionales es necesario realizar procedimientos de selección espermática. Recientemente hemos publicado un trabajo en la revista Theriogenology (2012; 78:201-209) que describe el uso de la filtración por columnas de lana de vidrio para la selección de espermatozoides funcionales a partir de semen bovino previamente congelado. El método es rápido, sencillo y económico, y permite seleccionar un alto porcentaje de espermatozoides vivos (94±3%), con motilidad progresiva (89±4%), no capacitados (80±10%), con el acrosoma intacto (98±1%) y que presentan alta capacidad de fecundar ovocitos in vitro. La técnica de filtración permite obtener un rendimiento del 67±19 %, ~4 veces mayor que el del método de Swim up. En conclusión, la filtración por columnas de lana de vidrio es una alternativa válida para las biotecnologías reproductivas bovinas, así como para otros animales domésticos y de granja y para especies en peligro de extinción.Frozen bull semen is worldwide distributed and utilized in several assisted reproductive technologies. However, semen cryopreservation negatively affects sperm quality, rendering a high proportion (over 50%) of dead and cryocapacitated spermatozoa with low fertilizing potential. To obtain a population of functional spermatozoa, a selection procedure must be applied. Our group recently reported in the Theriogenology journal (2012; 78:201-209) a comprehensive study that demonstrates the effectiveness of the glass wool filtration procedure to select functional spermatozoa from frowen-thawed semen samples in a fast, low-cost and simple fashion. High percentages of live spermatozoa (94±3%), with progressive motility (89±4%), mainly non- capacitated (80±10%), with intact acrosomes (98±1%), and capable to fertilize oocytes in vitro were recovered in the filtrate. The glass wool sperm filtration procedure rendered a yield of 67±19%, ~4 times higher than the Swim up. In conclusion, sperm filtration through glass wool columns is a valid alternative to be incorporated in the bull reproductive technologies, and may be suitable for other domestic and farm animals as well as to endangered species.Fil: Vazquez, Monica Hebe. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Marin Briggiler, Clara Isabel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Cetica, Pablo Daniel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Dalvit, Gabriel Carlos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Caballero, J. N.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Arzondo, Maria Matilde. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentin

Sperm morphology and morphometry of Burmeister's porpoise (Phocoena Spinipinnis)

Knowledge of sperm morphology and morphometry in mammals may contribute to the understanding of their phylogeny and evolution of reproductive systems. The evolution of features such as sperm shape and sperm number is probably the result of two major selective forces: female reproductive physiology and sperm competition (Roldan et ale 1992). Characterization of the sperm shape and size has been utilized as a taxonomic tool (Rouse and Robson 1986, Harding et al. 1987), and in some analyses sperm abnormalities have been related to inbreeding (Wildt et al. 1987). Morphornetric data on the sperm of some cetacean species have been previously reported (Matano et al. 1976, Fleming et al. 1981, Cummins and Woodall 1985).Fil: Beilis, Adela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Biología Celular e Histología. Centro de Investigación en Reproducción; ArgentinaFil: Cetica, Pablo Daniel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Biología Celular e Histología. Centro de Investigación en Reproducción; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Merani, Maria Susana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Biología Celular e Histología. Centro de Investigación en Reproducción; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Capacitation inducers act through diverse intracellular mechanisms in cryopreserved bovine sperm

The effect of various capacitation inducers, i.e. heparin, superoxide anion, bicarbonate, adenosine, and caffeine, and their role in intracellular mechanisms involved in capacitation, were studied in cryopreserved bovine sperm. Capacitation was determined by epifluorescence chlortetracycline, protein tyrosine phosphorylation, and the ability of capacitated sperm to undergo an acrosome reaction and fertilize in vitro matured oocytes. Participation of membrane adenylate cyclase and protein kinases (protein kinase A, protein kinase C, and protein tyrosine kinase) was evaluated indirectly (with specific inhibitors). Involvement of reactive oxygen species (ROS) was determined with scavengers of superoxide anion, hydrogen peroxide, or nitric oxide. Percentages of capacitated (27–29%) and acrosome-reacted sperm (23–26%) did not differ (P > 0.05) among various capacitation inducers. Significantly higher rates of IVF were obtained with heparin (43%) or bicarbonate plus caffeine (45%), when compared with control samples (17%). Adding the membrane adenylate cyclase inhibitor diminished capacitation rates with heparin (8%) or adenosine (10%). There was differential protein kinase participation in response to inducers; protein kinase inhibitors diminished cleavage rates in heparin-capacitated sperm relative to controls. There were differences between and within the studied inducers in protein tyrosine phosphorylation patterns. We inferred that capacitation in cryopreserved bovine sperm was promoted through diverse pathways. Mechanisms triggered by heparin, or caffeine plus bicarbonate-induced capacitation, involved activation of intracellular pathways to optimize fertilizing capability of cryopreserved bovine sperm.Fil: Breininger, Elizabeth. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Cetica, Pablo Daniel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Beconi, M. T.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentin

Influence of the cumulus and gonadotropins on the metabolic profile of porcine cumulus-oocyte complexes during in vitro maturation

The aim of this work was to examine the influence of the cumulus and gonadotropins on the metabolic profile of porcine cumulus oocyte complexes (COCs) during in vitro maturation. Immature COCs were assigned to morphological classes A1 (with a dense cumulus), A2 (with a translucent cumulus), B1 (with the corona radiata), B2 (with only some remaining cumulus cells) and matured with or without gonadotropins. Glycolysis and ammonia production were higher in the A class COCs; gonadotropins increased both, especially in the A1 COCs (p<0.05). The A class COCs had the highest initial protein contents and at the end of in vitro maturation. Furthermore, hormonal stimulation induced a similar increase in protein contents of both A classes (p<0.05). The neutral lipid content and reactive oxygen species (ROS) levels were similar in the immature oocytes of the COCs of all classes. A reduction was seen in both these variables when maturation proceeded either in the presence or absence of gonadotropins. The cumulus type surrounding the oocyte is related to the metabolism of carbohydrates and amino acids by the COC during in vitro maturation under gonadotropic stimulation. Oocyte lipolytic activity and ROS production appear to be independent of the surrounding cumulus and the presence of gonadotropins.Fil: Alvarez, Gabriel Martín. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Dalvit, Gabriel Carlos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Cetica, Pablo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentin

Relation between respiratory activity and sperm parameters in boar spermatozoa cryopreserved with alpha-tocopherol and selected by Sephadex

Our aim was to evaluate the effect of Sephadex filtration on respiratory activity of porcine spermatozoa and its relation with quality and functional sperm parameters. Samples were evaluated regarding oxygen uptake and sperm parameters: motility, plasma and acrosome membrane integrity, capacitation and acrosome reaction induction in vitro, plasma membrane functionality, determined by the hypo-osmotic swelling test (HOST), and lipid peroxidation assessed by thiobarbituric acid assay. Sephadex filtration improved all routine quality parameters (motility, plasma and acrosome membrane integrity) and functional parameters (HOST, in vitro capacitation and true acrosome reaction levels) and produced a significant decrease in cryocapacitation and lipid peroxidation. Oxygen uptake increased in Sephadex samples (41 ± 7%) respect to single washing. Oxygen addition of carbonyl-cyanide-m-chlorophenylhydrazone (CCCP) confirmed mitochondrial coupling in washed and Sephadex samples; showing an increase of 2.6 and 4.2 times for oxygen consumption in single washing and Sephadex ones, respectively. The increase in oxygen uptake with succinate addition with respect to basal oxygen uptake was significantly lower in Sephadex samples (63 ± 25%) than in the washed ones (183 ± 35%). Sephadex samples showed higher mitochondrial activity measured by oxygen consumption and improved quality and functional parameters. Our study recommends this protocol due to the fact that this filtration method removes dead or damaged spermatozoa allowing to obtain cryopreserved boar spermatozoa with optimized fertilizing capacity.Fil: Satorre, María Mercedes. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; ArgentinaFil: Breininger, Elizabeth. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; ArgentinaFil: Cetica, Pablo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; ArgentinaFil: Córdoba, M.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; Argentin

Relationship between porcine cumulus-oocyte complex energy charge and glycolysis during in vitro maturation

The aim of the present work was to evaluate the relationship between COC energy and glycolysis in the porcine species. COCs were individually matured in IVM media supplemented with Gonadotropins, Gonadotropins + 0,1 mM ATP and Gonadotropins + 1 mM ATP and without supplementation (control) to modulate glycolytic activity. Glucose uptake and lactate production per COC were enhanced by the presence of FSH and LH in maturation medium, even in the presence of 0.1 mM ATP. However, 1 mM ATP was effective to inhibit gonadotropin stimulation on glucose consumption, lactate production and nuclear maturation (p < 0.05). Endogenous ATP concentration was similar in immature COCs and those matured in absence of FSH + LH. However, endogenous ATP concentration, increased after 48 h of culture in the presence of gonadotropins (p < 0.05). According to these results, we determined if glycolytic activity is inhibited by a rise in the COC energy charge. Glucose uptake and lactate production increased from 24 to 48 h of culture (p < 0.05), but no difference in these parameters were observed between 48 and 72 h of in vitro culture. This study confirmed the stimulation of glycolysis by gonadotropins in porcine COCs, and the inhibition of this pathway by the addition of exogenous ATP. We demonstrated the relationship between the gonadotropic stimulation of glycolytic activity and the increase in ATP content in porcine COC during IVM. However, the endogenous ATP content reached in the matured COC seems to not decrease glycolytic activity in the COC.Fil: Alvarez, Gabriel Martín. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; ArgentinaFil: Gutnisky, Cynthia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; ArgentinaFil: Paz, Matías. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Cetica, Pablo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; Argentin

Regulation of key enzymes of glucose metabolism in bovine COCs

The aim of this work was to study the regulation of PFK 1 and G6PDH, two key enzymes involved in glucose metabolism in cumulus oocyte-complexes (COCs), and its relationship with the oocyte maturation process. It was observed that the activity of PFK 1 in the presence of ATP was inhibited whereas the addition of AMP increased the activity (P < 0.05). To verify the effect of the physiological modulators on the COC glycolytic pathway, the lactate production during IVM and the maturation rate were evaluated. In accordance with the enzymatic activity, the glycolytic activity evaluated by lactate production and the maturation rate diminished (P < 0.05) with the addition of ATP. While the AMP had a dose response effect on the lactate production, the maturation rate remained unaltered. It was observed that NADPH inhibited the activity of the G6PDH and the addition of NADP increased the activity of the enzyme (P < 0.05). To verify the effect of the physiological modulators on the COC pentose phosphate pathway (PPP), the proportion of colourless oocytes evaluated by brilliant cresyl blue (BCB) and the maturation rate were carried out. In presence of NADPH an inhibition (P < 0.05) on PPP and maturation rate was observed. On the other hand, NADP had no effect on PPP activity and maturation rate. The present study shows that the regulation of key enzymes of glucose metabolism in bovine COCs are regulated mainly by the energetic charge and the redox status. We also reported a tight relation between the activity of the PFK 1 and G6PDH enzymes, glycolytic and PPP activities and the oocyte maturation process.Fil: Gutnisky, Cynthia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Breininger, Elizabeth. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Dalvit, Gabriel Carlos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Cetica, Pablo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentin

Hyaluronic acid capacitation induces intracellular signals modulated by membrane-associated adenylate cyclase and tyrosine kinase involved in bovine in vitro fertilization

Heparin is the most commonly used in vitro capacitation inducer in the bovine. However, hyaluronic acid (HA) has been recently used for capacitation induction as well as for other reproductive biotechnologies, such as sperm selection and in vitro fertilization (IVF). Our aim was to induce sperm capacitation with heparin or HA in order to study mAC and TK intracellular signals and their relation with cleavage and blastocyst rates after IVF as well as with the oxidative status of the potential bovine embryos. 2,5-dideoxyadenosine and genistein were used as mAC and TK inhibitors, respectively. Sperm capacitation was analyzed using CTC technique, sperm plasma membrane and acrosome integrity were determined using trypan blue stain and differential interference contrast, and mitochondrial activity was evaluated using fluorochrome JC-1. Cleavage rate was analyzed 48h and blastocyst production 7–8 days after IVF, while cytosolic oxidative activity was determined using RedoxSensor Red CC-1 fluorochrome 7h after IVF. When mAC and TK inhibitors were added to sperm samples, only capacitation decreased significantly both in HA and heparin treated samples (P 0.05). Sperm mitochondrial membrane potential only decreased in heparin treated samples in the presence of both inhibitors (P < 0.05). Oocytes activated with HA sperm treated samples with the addition of 2,5-dideoxyadenosine and genistein presented a lower cytosolic oxidative status than those activated with sperm treated with HA alone (P < 0.05). On the other hand, oocytes activated with heparin treated sperm samples presented a lower cytosolic oxidative status only in the presence of 2,5-dideoxyadenosine (P < 0.05). Therefore, mAC and TK present a differential participation in heparin and HA sperm induced capacitation and mitochondrial function as well as in IVF.Fil: Fernández, S.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Morado, Sergio Adrián. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Cetica, Pablo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; ArgentinaFil: Córdoba, M.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; Argentin