AVALIAÇÃO DE MÉTODOS DE DESCONTAMINAÇÃO PARA OBTENÇÃO DE CULTURAS PURAS DE LEPTOSPIRAS A PARTIR DE AMOSTRAS MISTAS COM Spirillum spp.

It is challenging to obtain pure cultures of Leptospira from environmental samples, mainly due to the presence of accompanying microbiota that can contaminate cultures, highlighting bacteria of the genus Spirillum that have characteristics similar to leptospires. Thus, cannot be eliminated by the most common decontamination techniques during leptospires isolation process. The purpose of this study was to evaluate five decontamination methods to obtain pure cultures of Leptospira from mixed samples with Spirillum spp. We collected ten samples from untreated domestic sewage dumped of to streets in Macapá city – Brazilian Amazon, and submitted to bacteriological culture for Leptospira isolation. The presence of leptospires was confirmed by visualization under dark-field microscopy and by 16S PCR. In the samples in which Spirillum was observed, five methods of decontamination were tested: 1 – Membrane filtration (0.20 μm and 0.22 μm); 2- Culture in selective medium for Leptospira spp.; 3- Centrifugation; 4- Serial dilution and 5- Plating on solid EMJH medium. Out of all 10 samples, five were positive for leptospires and in three there was the simultaneous detection of leptospires and Spirillum. Plating on solid EMJH medium (5) was the most efficient method, decontaminating all three mixed cultures. Only one culture was decontaminated by the technique of culture in selective medium for Leptospira spp. (2), and the other methods were ineffective. In conclusion, plating on solid EMJH medium method can be used to obtain pure cultures of Leptospira spp. from environmental samples containing Spirillum spp.Keywords: Leptospira; decontamination; mixed cultures; Spirillum.É um desafio obter culturas puras de Leptospira a partir de amostras ambientais, principalmente devido à presença de microbiota acompanhante que pode contaminar culturas, destacando bactérias do gênero Spirillum que possuem características semelhantes às leptospiras. Assim, não pode ser eliminado pelas técnicas mais comuns de descontaminação durante o processo de isolamento das leptospiras. O objetivo deste estudo foi avaliar cinco métodos de descontaminação para obter culturas puras de Leptospira a partir de amostras mistas com Spirillum spp. Foram coletadas dez amostras de esgoto doméstico não tratado descartado nas ruas da cidade de Macapá - Amazônia Brasileira, e submetidas à cultura bacteriológica para isolamento de Leptospira. A presença de leptospiras foi confirmada por visualização em microscopia de campo escuro e por 16S PCR. Nas amostras em que Spirillum foi observado, foram testados cinco métodos de descontaminação: 1 - Filtragem por membrana (0,20 μm e 0,22 μm); 2- Cultura em meio seletivo para Leptospira spp.; 3- Centrifugação; 4- Diluição em série e 5- Plaqueamento em meio sólido EMJH. Das 10 amostras, cinco foram positivas para leptospiras e em três houve a detecção simultânea de leptospiras e Spirillum. Plaqueamento em meio sólido EMJH (5) foi o método mais eficiente, descontaminando as três culturas mistas. Apenas uma cultura foi descontaminada pela técnica de cultura em meio seletivo para Leptospira spp. (2), e os outros métodos foram ineficazes. Em conclusão, o método de plaqueamento em meio sólido EMJH pode ser usado para obter culturas puras de Leptospira spp. de amostras ambientais contendo Spirillum spp.Palavras-chave: Leptospira, descontaminação, culturas mistas, Spirillum

Seroepidemiology of leptospirosis in capybaras in anthropogenic and non-anthropogenic environments

Tendo em vista a importância das capivaras como reservatórios para Leptospira e a expansão das populações desta espécie especialmente em áreas antropizadas, torna-se de extrema importância a avaliação de sorogrupos predominantes a fim de elucidar a cadeia epidemiológica da doença e permitir a adoção de medidas de controle efetivo. Sendo assim, o presente estudo teve como objetivo avaliar a sorologia de capivaras capturadas no Pantanal (regiões de paisagens naturais PN’s) e em São Paulo (regiões de paisagens modificadas pelo homem PMH’s) através da análise de titulação dos diferentes sorogrupos de Leptospira nos animais reativos, bem como a variação na titulação em animais recapturados. Para isso, foram utilizadas 382 amostras de soro sanguíneo de capivaras capturadas entre os anos de 2015 e 2019 em sete municípios do estado de São Paulo e em regiões de paisagens naturais. Foi realizado o teste de soroaglutinação microscópica e os dados foram analisados por medidas descritivas com cálculo de frequência e foi realizada a comparação descritiva entre os dois tipos de paisagem. Os resultados da captura demonstraram 29% de frequência total de soros reagentes, sendo o sorogrupo Australis o mais frequente. O mesmo padrão foi observado para os resultados de PMH’s considerando que a maior parte dos soros eram provenientes do estado de SP, porém nas PN’s os sorogrupos mais frequentes foram Ballum, seguido de Australis e Hebdomadis. A região de Ribeirão Preto apresentou a maior frequência entre as PMH’s, enquanto o Pantanal Norte apresentou maior frequência dentre as PN’s. No ranking geral, o sorogrupo mais provável foi o Australis, o qual apresentou reação nos animais de todas as regiões estudadas, exceto Avaré. A seguir, foram observadas frequências elevadas dos sorogrupos Grippotyphosa e Icterohaemorrhagiae, especialmente na região do Horto Florestal. Por último, destacaram-se os sorogrupos Serjoe e Hebdomadis, com frequências elevadas especialmente em Ribeirão Preto. Portanto, considerando a ausência de hospedeiro natural para os principais sorogrupos encontrados, como os suínos para o sorogrupo Australis, o presente levantamento sorológico indica que as capivaras são capazes de manter esses sorogrupos no ambiente, confirmando que capivaras que vivem em área urbana podem representar um fator de risco para leptospirose para a população humana eventualmente exposta.Considering the importance of capybaras as reservoirs for Leptospira and the expansion of their populations, especially in anthropogenic areas, it is extremely important to evaluate the predominant serogroups to elucidate the epidemiological chain of the disease and to allow the adoption of measures to effectively control the disease. Therefore, the present study aimed to evaluate the serology of capybaras captured in Pantanal (regions of natural landscapes NL’s) and São Paulo (regions of anthropogenic landscapes AL’s) by analyzing the titer of different Leptospira serogroups in reactive animals, as well as the titer variation in recaptured animals. For this, 382 blood serum samples from capybaras captured between 2015 and 2019 in seven municipalities in the state of São Paulo and regions of natural landscapes. The microscopic agglutination test was performed, and the data were analyzed by descriptive measures with frequency calculation and a descriptive comparison between the two types of landscape. The capture results showed 29% frequency of total reactive serum, with the Australis serogroup being the most frequent. The same pattern was observed for the results of AL’s considering that most of the sera came from the state of SP, but in the NL’s the most frequent serogroups were Ballum, followed by Australis and Hebdomadis. The region of Ribeirão Preto presented the highest frequency among the AL’s, while the Pantanal Norte presented the highest frequency among the NL’s. In the general ranking, the most likely serogroup was Australis, which showed a reaction in animals from all regions studied, except for Avaré. Next, high frequencies of the Grippotyphosa and Icterohaemorrhagiae serogroups were observed, especially in the Horto Florestal region. Finally, the Serjoe and Hebdomadis serogroups stood out, with high frequencies, especially in Ribeirão Preto. Therefore, considering the absence of a natural host for the main serogroups found, the present serological survey indicates that capybaras can maintain these serogroups in the environment, confirming that capybaras that live in urban areas may represent a risk factor for leptospirosis for the human population eventually exposed