Padrão de metilação do gene P16INK4A e de infecções por HPV de alto risco acompanham a evolução de lesões cervicais

SUMMARY High-risk human papillomavirus (hr-HPV) infection is necessary but not sufficient for cervical cancer development. Recently, P16INK4A gene silencing through hypermethylation has been proposed as an important cofactor in cervical carcinogenesis due to its tumor suppressor function. We aimed to investigate P16INK4A methylation status in normal and neoplastic epithelia and evaluate an association with HPV infection and genotype. This cross-sectional study was performed with 141 cervical samples from patients attending Hospital Moncorvo Filho, Rio de Janeiro. HPV detection and genotyping were performed through PCR and P16INK4A methylation by nested-methylation specific PCR (MSP). HPV frequency was 62.4% (88/141). The most common HPV were HPV16 (37%), HPV18 (16.3%) and HPV33/45(15.2%). An upward trend was observed concerning P16INK4A methylation and lesion degree: normal epithelia (10.7%), low grade lesions (22.9%), high grade (57.1%) and carcinoma (93.1%) (p < 0.0001). A multivariate analysis was performed to evaluate an association between methylation, age, tobacco exposure, HPV infection and genotyping. A correlation was found concerning methylation with HPV infection (p < 0.0001), hr-HPV (p = 0.01), HSIL (p < 0.0007) and malignant lesions (p < 0.0001). Since viral infection and epigenetic alterations are related to cervical carcinoma, we suggest that P16INK4A methylation profile maybe thoroughly investigated as a biomarker to identify patients at risk of cancer.RESUMO É reconhecido que infecções por papilomavírus humanos de alto risco (HPV) são causa necessária, mas não suficiente para o desenvolvimento do câncer cervical. Recentemente, estudos de silenciamento gênico apontaram que a hipermetilação do gene p16INK4A é importante co-fator para a carcinogênese cervical, eliminando a função supressora de tumor da proteína p16 em lesões malignas. Entretanto poucos estudos avaliaram a relação da metilação com a progressão da doença. Nosso objetivo foi investigar o padrão de metilação do gene P16INK4A em diferentes graus de lesão cervical e sua associação com a infecção por diferentes tipos de HPV. Nosso estudo de corte transversal avaliou 141 amostras cervicais de pacientes atendidas no Hospital Moncorvo Filho, Rio de Janeiro. A detecção e tipagem do HPV foi realizada pela técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR), e a metilação do gene P16INK4A pela PCR-metilação específica em formato nested (MSP). A frequência de HPV foi de 62,4% (88/141). O tipo mais prevalente foi o HPV16 (37%), seguido pelo HPV18 (16,3%) e HPV33/45 (15,2%). Curva ascendente foi observada quanto ao padrão de metilação do gene P16INK4A e o grau da lesão: a metilação foi identificada em somente 10,7% das amostras de epitélio normal, em 22,9% das lesões de baixo grau, em 57,1% das lesões de alto grau e em 93,1% dos carcinomas (p < 0,0001). Foram feitas análises univariada e multivariada a fim de correlacionar metilação, idade, exposição ao tabaco, infecção e genótipo de HPV. Foi encontrada correlação da metilação com a infecção pelo HPV (p < 0,0001), genótipos de alto risco (p = 0,01), lesões de alto grau (p < 0,0007) e câncer (p < 0,0001). Uma vez que infecções pelo HPV e alterações epigenéticas mostraram forte associação estatística com o carcinoma cervical, sugerimos que estes padrões de metilação possam ser avaliados como potenciais biomarcadores, combinados à detecção dos HPV oncogênicos para identificação de pacientes em risco de câncer

Bowenoid Papulosis in a Patient with AIDS Treated with Imiquimod: Case Report

A 53-year-old male patient with acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) was treated with topical immunomodulator imiquimod for bowenoid papular. Clinically the lesions presented as condilomatous and papulous changes with color varying from skin color to gray ish. The lesions were located in the glans and in the dorsum of the penis. Clinical diagnosis was confirmed by histopathological examination, and the polymerase chain reaction (PCR) demonstrated the presence of human papilloma virus (HPV) 16. It was decided to apply a topical treatment with imiquimod 5% cream three times a week for 16 weeks. Al most complete regression was obtained; the residual lesions were treated with a combined chemical cauterization by using 50% trichloroacetic acid followed by 25% podophylin. Although it is not a definitive treatment, the use of topical immunomodulator is one more therapeutic option in the selected HPV cases

Diagnosis of human herpesvirus 6B primary infection by polymerase chain reaction in young children with exanthematic disease

INTRODUCTION: Exanthem subitum is a classical rash disease of early childhood caused by human herpesvirus 6B (HHV-6B). However, the rash is frequently misdiagnosed as that of either measles or rubella. METHODS: In this study, a nested multiplex polymerase chain reaction (PCR) was used to diagnose HHV-6B primary infection, differentiate it from infections caused by HHV-6A and compare it to antibody avidity tests. The samples were separated into case group and control group according to the results of the indirect immunofluorescence assay (IFA) technique. RESULTS: From the saliva samples analyzed, HHV-6A DNA was detected in 3.2% of the case group and in 2.6% of the control group. Regarding HHV-6B, PCR detected viral DNA in 4.8% of the case group and in 1.3% of the control group. Among the serum samples studied, a frequency of 1.7% was determined for HHV-6A in the case group and 1.2% in the control group. PCR did not detect HHV-6B DNA in serum samples. The sensitivity and specificity of the PCR technique ranged from 0% to 4.8% and 97.5% to 100%, respectively, compared to IFA. CONCLUSIONS: The PCR technique was not suitable for diagnosing primary infection by HHV-6B in children with exanthematic disease and should not substitute the IFA

Diagnosis of human herpesvirus 6B primary infection by polymerase chain reaction in young children with exanthematic disease Diagnóstico de infecção primária pelo herpesvírus humano tipo 6B através da técnica de reação em cadeia da polimerase em crianças com doença exantemática

INTRODUCTION: Exanthem subitum is a classical rash disease of early childhood caused by human herpesvirus 6B (HHV-6B). However, the rash is frequently misdiagnosed as that of either measles or rubella. METHODS: In this study, a nested multiplex polymerase chain reaction (PCR) was used to diagnose HHV-6B primary infection, differentiate it from infections caused by HHV-6A and compare it to antibody avidity tests. The samples were separated into case group and control group according to the results of the indirect immunofluorescence assay (IFA) technique. RESULTS: From the saliva samples analyzed, HHV-6A DNA was detected in 3.2% of the case group and in 2.6% of the control group. Regarding HHV-6B, PCR detected viral DNA in 4.8% of the case group and in 1.3% of the control group. Among the serum samples studied, a frequency of 1.7% was determined for HHV-6A in the case group and 1.2% in the control group. PCR did not detect HHV-6B DNA in serum samples. The sensitivity and specificity of the PCR technique ranged from 0% to 4.8% and 97.5% to 100%, respectively, compared to IFA. CONCLUSIONS: The PCR technique was not suitable for diagnosing primary infection by HHV-6B in children with exanthematic disease and should not substitute the IFA.INTRODUÇÃO: O exantema súbito é uma doença comum durante a infância e pode ser causada pela infecção por herpesvirus humano tipo 6B (HHV-6B). No entanto, a erupção cutânea característica dessa doença, é frequentemente confundida com outras viroses como sarampo ou rubéola. MÉTODOS: Foi utilizada a técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) no formato nested multiplex para o diagnóstico de infecção primária por HHV-6B, diferenciação entre as infecções causadas pelo HHV-6A e comparação com testes de avidez de anticorpos. As amostras foram separadas em grupo caso e grupo controle, de acordo com os resultados do teste de imunofluorescência indireta (IFA). RESULTADOS: Nas amostras de saliva analisadas, o DNA do HHV-6A foi detectado em 3,2% no grupo caso e em 2,6% das amostras do grupo controle. Em relação ao HHV-6B, o DNA viral foi observado em 4,8% no grupo caso e em 1,3% no grupo controle. Após a realização da PCR nas amostras de soro, o DNA do HHV-6A foi detectado em 1,7% no grupo caso e em 1,2% no grupo controle, enquanto o DNA do HHV-6B não foi detectado. A sensibilidade e a especificidade da técnica de PCR variaram de 0% a 4,8% e de 97,5% a 100%, respectivamente, quando comparado com a IFA. CONCLUSÕES: A técnica de PCR não se mostrou adequada para o diagnóstico de infecção primária pelo HHV-6B em crianças com doença exantemática e não deve substituir a IFA