Effect of Pressing and Combination of Three Storage Temperatures and Times on Chemical Composition and Fatty Acid Profile of Canola Expellers

This experiment investigated the effects of combinations of three temperatures and storage times on chemical composition, fatty acid profile, and oxidative stability of canola expellers obtained from the cold-pressing extraction of oil. Canola seeds were single-crushed at moderate temperatures (60°C) during 3 pressing sessions. Nine samples (100±1 g) of each session were collected, inserted into sealed bags, stored at three temperatures (12, 24, 36°C) over 3 periods of time (10, 20, 30 d). Then, samples (100±1 g) of canola seeds collected before each pressing session and canola expellers collected before and after each storage time were analyzed for chemical composition, fatty acid profile, peroxide number and Kreis test. Before storage, the fatty acid profile of canola seeds and expellers differed significantly, except for myristic (P=0.18), palmitic (P=0.57), oleic (P=0.07), and α-linolenic acids (P=0.45). Compared to canola seeds, expellers showed greater content of saturated, poly-unsaturated, and n-6 fatty acids (P<0.01), but a lower content of mono-unsaturated fatty acids (P<0.01). Peroxide values were definitely (P<0.01) greater for expellers and averaged 4.22 and 4.11 mEq/kg fat before and after storage, respectively. The Kreis test was negative for all samples. Under different temperatures and times of storage, canola expellers showed to maintain a good oxidative stability, as highlighted by low peroxide values (<10 mEq/kg fat) and negative response for Kreis test. Canola expellers obtained by on-farm cold extraction, despite great oil residual (from 17 to 19% ether extracts on dry matter basis), can be stored at farm without significant chemical and nutritional changes

Rumen in vitro Gas Production of Combinations Between Slowly and Rapidly Fermentable Fibre Sources

An in vitro rumen fermentation was performed, where two sources of slowly fermentable fibre (milk thistle, MT; pure cellulose, CE) and three of rapidly fermentable fibre (tomato peels without seeds, TP; citrus pulp, CI; pectin, PE) were incubated alone or as 75:25 or 25:75 mixtures (MT:TP, MT:CI, MT:PE, CE:TP, CE:CI, CE: PE ), to detect associative effects among substrates. Substrates or mixtures (0.5 g) were incubated with 75 ml of buffered rumen fluid into individual bottles at 39°C for 96 h. Differences among measured and expected GP were analysed by ANOVA. In mixtures containing MT, positive associative effects were detected within first 24 h. Only the combination of 75% MT and 25% TP showed negative interactions. In the mixtures of MT:CI and MT:PE positive associative effects were detected respectively at 24 and 12 h (P<0.01). Mixtures containing CE showed positive interactions only at later phases (from 48 h) of incubation. When 75% CE was added to 25% TP and CI, associative effects were greater compared to mixtures containing a lower proportion of CE (25%). In conclusion, three sources of rapidly fermentable fibre enhanced GP provided by MT and CE, even if magnitude of these effects differed among mixtures

Methodological factors affecting gas and methane production during in vitro rumen fermentation evaluated by meta-analysis approach

Effects of some methodological factors on in vitro measures of gas production (GP, mL/g DM), CH4 production (mL/g DM) and proportion (% CH4 on total GP) were investigated by meta-analysis. These factors were considered: pressure in the GP equipment (0 = constant; 1 = increasing), incubation time (0 = 24; 1 = 65 48 h), time of rumen fluid collection (0 = before feeding; 1 = after feeding of donor animals), donor species of rumen fluid (0 = sheep; 1 = bovine), presence of N in the buffer solution (0 = presence; 1 = absence), and ratio between amount of buffered rumen fluid and feed sample (BRF/FS; 0 = 64 130 mL/g DM; 1 = 130\u2013140 mL/g DM; 2 = 65 140 mL/g DM). The NDF content of feed sample incubated (NDF) was considered as a continuous variable. From an initial database of 105 papers, 58 were discarded because one of the above-mentioned factors was not stated. After discarding 17 papers, the final dataset comprised 30 papers (339 observations). A preliminary mixed model analysis was carried out on experimental data considering the study as random factor. Variables adjusted for study effect were analyzed using a backward stepwise analysis including the above-mentioned variables. The analysis showed that the extension of incubation time and reduction of NDF increased GP and CH4 values. Values of GP and CH4 also increased when rumen fluid was collected after feeding compared to before feeding (+26.4 and +9.0 mL/g DM, for GP and CH4), from bovine compared to sheep (+32.8 and +5.2 mL/g DM, for GP and CH4), and when the buffer solution did not contain N (+24.7 and +6.7 mL/g DM for GP and CH4). The increase of BRF/FS ratio enhanced GP and CH4 production (+7.7 and +3.3 mL/g DM per each class of increase, respectively). In vitro techniques for measuring GP and CH4 production are mostly used as screening methods, thus a full standardization of such techniques is not feasible. However, a greater harmonization of analytical procedures (i.e., a reduction in the number of available protocols) would be useful to facilitate comparison between results of different experiments

a simplified approach to calculate slurry production of growing pigs at farm level

A simplified approach to predict the amount of slurry produced by growing pigs at farm level is proposed. The inputs are initial (LWi) and final (LWf) live weights, production (t) and empty (empty) periods, feed consumption (FC), dry matter (DMD), N digestibilities and farm water consumption per pig (FWC). Estimates of the amount of water required (or arisen) per kg of feed for the various physiological functions were estimated by running a published mathematical model using data representing the ordinary conditions of rearing. Water excretion was estimated in two ways depending on: 1) free access (ad lib) to water; 2) restricted access (forced). In the first case, the proportion of water consumed (wiad lib) and those excreted with the urine (wuad lib) and the faeces (wfec) were quantified to be 2.9, 1.72 and 0.33 kg per kg of feed, respectively. From the urinary excretions of N and minerals, obtained as the difference between the digestible nutrient intakes and the retentions, the model predicted a urinary DM content of 2.1% (by weight). In the second case, for pigs receiving drinking water in forced ratio with the feed (wiforced), the urinary production was calculated as wuforced=(wiforced+wf+wo)-(wd+ws+wg+wfec+we), where wf=water content in feed (0.12 kg/kg), wo=water arising from nutrient oxidation (0.25 kg/kg), wd=water required for digestion (0.08 kg/kg), ws=water demand for protein and lipid synthesis (0.06 kg/kg), wg=water retained in body tissues (0.14 kg/kg) and we=water lost through evaporation (0.96 kg/kg). Estimates of fresh slurry production (faeces+urine) were regressed against the values resulting from empirical literature equations and referred to pigs fed water:feed ratios of 2.5:1, 2.9:1 and 4:1. The resulting regression (R2=0.97), with a slope close to unity (1.05), indicated that the approach can be extended to predict the farm fresh slurry production with pigs having free access to water or kept on different water:feed ratios. In agreement with international literature, but not with the current Italian national standards, estimates of mature slurry productions ranged from 1.5 to 2.9 ton/pig/year with DM contents ranging from 8.3 to 3.7%. At farm level the use water meters is recommended as from FWC minus the estimated water consumption (FWCexp) the farmer can evaluate the extra wastage and adjust the predicted mature slurry production

Relationships among Gas Production, End Products of Rumen Fermentation and Microbial N Produced in vitro at Two Incubation Times

This experiment compared linear relationships among end-products of rumen fermentation measured at the time (t.) at which a feed produces half of its asymptotic gas production) or at 48 h. Meadow hay and corn grain were incubated for t. (16 and 9 h, respectively) or for 48 h into glass bottles. Each bottle (310 ml) was filled with feed sample (0.5 g) and 75 ml of buffered rumen fluid, and incubated at 39.0°C. Gas production (GP) was measured using the ANKOMRF System, and gas accumulated in headspace of bottles was released at 3.4 kPa. At t. or 48 h, fermentation fluids were analysed for ammonia N (N-NH3), volatile fatty acids (VFA), residual NDF and N bound to residual NDF (N-NDF). Values of GP were also predicted from VFA. Microbial N (MN) was computed as the difference between N present at the beginning and at the end of incubation. At 48 h, the relationship between GP measured and predicted from VFA was weak (R2 = 0.67; equation not shown), whereas the linear relationship was better at t. (R2 = 0.94). At t., the relationship between N-NH3 and measured GP was strong (R2 = 0.84), as well as that between MN and measured GP (R2 = 0.92). Conversely, these variables were not well related at 48 h. At t., the valerate content in rumen fluid was negligible. However, relatively large amounts of valerate were measured after 48 h, probably the result of microbial lysis. Results suggest that relationships among end-products of rumen fermentation can be more accurately evaluated at a substrate-specific incubation time (t.) rather than at 48 h

Influence of main dietary chemical constituents on the in vitro gas and methane production in diets for dairy cows

BACKGROUND: Modification of chemical composition of diets fed to dairy cows might be a good strategy to reduce methane (CH(4)) production in the rumen. Notable reductions of CH(4) production compared to conventional high-roughages rations were more frequently observed for very concentrated diets or when fat supplements were used. In these cases, the reduction in the gas emission was mainly a consequence of an overall impairment of rumen function with a reduction of fiber digestibility. These strategies do not always comply with feeding standards used in intensive dairy farms and they are usually not applied owing to the risks of negative health and economic consequences. Thus, the present study evaluated the effects of seven commercial diets with contents of neutral detergent fiber (NDF), protein and lipids ranging 325 to 435 g/kg DM, 115 to 194 g/kg DM, and 26 to 61 g/kg DM, respectively, on in vitro degradability, gas (GP), and CH(4) production. RESULTS: In this experiment, changes in the dietary content of NDF, crude protein (CP) and lipids were always obtained at the expense or in favor of starch. A decreased of the dietary NDF content increased NDF (NDFd) and true DM (TDMd) degradability, and increased CH(4) production per g of incubated DM (P < 0.001), but not that per g of TDMd. An increase of the dietary CP level did not change in vitro NDFd and TDMd, decreased GP per g of incubated DM (P < 0.001), but CH(4) production per g of TDMd was not affected. An increased dietary lipid content reduced NDFd, TDMd, and GP per g of incubated DM, but it had no consequence on CH(4) production per g of TDMd. CONCLUSIONS: It was concluded that, under commercial conditions, changes in dietary composition would produce small or negligible alterations of CH(4) production per unit of TDMd, but greater differences in GP and CH(4) production would be expected when these amounts are expressed per unit of DM intake. The use of TDMd as a standardizing parameter is proposed to account for possible difference in DM intake and productivity

Rumen in vitro Gas Production of Combinations Between Slowly and Rapidly Fermentable Fibre Sources

An in vitro rumen fermentation was performed, where two sources of slowly fermentable fibre (milk thistle, MT; pure cellulose, CE) and three of rapidly fermentable fibre (tomato peels without seeds, TP; citrus pulp, CI; pectin, PE) were incubated alone or as 75:25 or 25:75 mixtures (MT:TP, MT:CI, MT:PE, CE:TP, CE:CI, CE: PE ), to detect associative effects among substrates. Substrates or mixtures (0.5 g) were incubated with 75 ml of buffered rumen fluid into individual bottles at 39°C for 96 h. Differences among measured and expected GP were analysed by ANOVA. In mixtures containing MT, positive associative effects were detected within first 24 h. Only the combination of 75% MT and 25% TP showed negative interactions. In the mixtures of MT:CI and MT:PE positive associative effects were detected respectively at 24 and 12 h (P<0.01). Mixtures containing CE showed positive interactions only at later phases (from 48 h) of incubation. When 75% CE was added to 25% TP and CI, associative effects were greater compared to mixtures containing a lower proportion of CE (25%). In conclusion, three sources of rapidly fermentable fibre enhanced GP provided by MT and CE, even if magnitude of these effects differed among mixtures

In situ and in vitro techniques for studying rumen fermentations: methodology and applications

Abstract The general aim of this thesis was to study rumen fermentation processes using in situ and in vitro digestibility and in vitro gas production techniques. The thesis includes the results of five experiments. The first experiment investigated the validity to reduce the amount of feed sample incubated in filter bags with DaisyII (from 0.50 to 0.25 g feed/bag). This hypothesis was verified by considering the results of two separate trials (conducted on 4 and 7 feeds, respectively) in which the digestibility values provided by DaisyII were compared with those achieved using a conventional batch culture. Results evidenced that, by using the lower sample size (0.25 g feed/bag), digestibility values provided by DaisyII resulted more similar, less variable and better correlated with those achieved with the batch culture. The second experiment was conducted on 11 feeds and compared the digestibility values achieved: i) in situ and in vitro using two different kinds of bag (nylon and filter) with a different pore size (40 and 25 µm); ii) in situ, placing the bags in the rumen environment, and in vitro using rumen fluid collected from intact cows by a suction technique. Results of the experiment showed that the use of filter bags induced a systematic, but predictable, underestimation of digestibility values compared to the nylon bags. Rumen fluid collected from intact cows provided digestibility values directly proportional to those obtained in situ. This latter result is relevant, as the validity of using rumen fluid collected from intact cows can be of interest for many research centers, in order to overcome ethical and public concerns related to the use of surgically treated animals. The third experiment was conducted on the same feeds analysed in the second experiment and it was aimed to compare the energy value of feeds estimated using three different equations: i) one equation based on feed chemical composition and in situ digestible NDF at 48 h of incubation (MENRC); ii and iii) two equations based on feed chemical composition and in vitro gas production at 24 h of incubation (MEMenke and MEUCD). A further aim was to evaluate the validity of reducing the in situ incubation time from 48 to 24 h. Results of the trial evidenced that, when MENRC estimates were taken as reference, MEUCD equation provided feed energy estimates more accurate and precise compared to MEMenke. However, the accuracy and precision of MEMenke estimates increased when four feeds rich in protein (CP > 16% DM) were excluded from the analysis. As the in situ digestibility values achieved at 24 and 48 h were highly correlated and showed a comparable reproducibility, the reduction of in situ incubation time from 48 to 24 h seems can be proposed for reducing the cost of the tests. The fourth experiment was aimed to compare the effects of two different systems of gas release (venting at fixed times or at fixed pressure) on gas production (GP) kinetics provided by two feeds with a different degradability (meadow hay and corn meal), using an innovative GP system. Results of the experiment showed that the venting system exerted significant effects on GP kinetics. The effects were particularly accentuated for corn meal and for venting at fixed times. Therefore, when venting at fixed times is applied, the headspace volume of GP system, the venting frequency and the amount of fermentable matter incubated must be carefully balanced to avoid the generation of high pressures, which could alter GP kinetics. However, venting at fixed pressure is preferable to that at fixed times, as it can strongly reduce these shortcomings. The fifth experiment aimed to evaluate the effects of increasing dosages of two antioxidants (BHT and a red chicory extract) on some in vitro rumen parameters, when they are incubated with meadow hay and corn meal. Results of the experiment showed that the two antioxidants exerted only small effects on rumen degradability, GP kinetics and volatile fatty acids profile. At the highest dosage, the red chicory extract showed to improve the efficiency of nitrogen utilization in the rumen, by increasing the amount of nitrogen captured by rumen microbes and utilized for microbial protein synthesisRiassunto Lo scopo generale del presente lavoro di tesi è stato quello di studiare le fermentazioni ruminali mediante la tecnica in situ, e le più moderne tecniche in vitro che valutano la digeribilità e la produzione di gas degli alimenti zootecnici. La tesi comprende i risultati di 5 diverse prove sperimentali. L’obiettivo della prima prova è stato quello di valutare la possibilità di ridurre la quantità di campione alimentare incubato all’interno dei filter bags previsti dal sistema DaisyII (da 0,50 a 0,25 g di alimento/filter bag). La suddetta ipotesi è stata verificata analizzando i risultati ottenuti in due differenti prove sperimentali, condotte rispettivamente su 4 e 7 alimenti, il cui comune obiettivo era il confronto dei valori di digeribilità forniti dal DaisyII e da un sistema in vitro tradizionale. I risultati ottenuti hanno dimostrato che, con l’incubazione di 0,25 g di alimento/filter bag, i valori di digeribilità forniti dal DaisyII risultavano complessivamente meno variabili, meglio correlati e comparabili con quelli forniti dal sistema in vitro tradizionale. La seconda prova sperimentale è stata condotta su 11 alimenti e si poneva l’obiettivo di confrontare i valori di digeribilità ottenuti: i) in situ, attraverso l’impiego di due diversi tipi di sacchetto (nylon e filter bags) caratterizzati da una differente porosità (40 e 25 µm); in situ, incubando i campioni alimentari direttamente nel rumine dell’animale, ed in vitro, incubando i campioni alimentari con liquido ruminale prelevato mediante sonda esofagea da bovine non fistolate. I risultati della prova hanno evidenziato che l’utilizzo dei filter bags, in sostituzione dei nylon bags, induceva una sottostima sistematica, ma comunque stimabile, dei valori di digeribilità degli alimenti. I campioni alimentari incubati in vitro con liquido ruminale prelevato da bovine non fistolate hanno fornito valori di digeribilità direttamente proporzionali a quelli incubati in situ. Un tale risultato è sicuramente soddisfacente: la possibilità di utilizzare liquido ruminale prelevato da bovine non fistolate può rappresentare infatti un’importante opportunità per molti centri di ricerca, consentendo di superare le problematiche di natura etica legate all’impiego di bovine sottoposte ad operazione chirurgica per l’applicazione di fistole ruminali permanenti. La terza prova sperimentale è stata condotta sugli stessi alimenti impiegati nel secondo contributo e si poneva l’obiettivo di determinare il valore energetico degli alimenti applicando tre differenti equazioni: i) un’equazione basata sulla composizione chimica dell’alimento e sul valore di digeribilità della fibra misurato in situ dopo 48 h di incubazione (MENRC); ii e iii) due equazioni basate sulla composizione chimica dell’alimento e sulla produzione di gas misurata in vitro dopo 24 h di incubazione (MEMenke e MEUCD). Un secondo scopo era quello di valutare la possibilità di ridurre il tempo di incubazione in situ da 48 a 24 h. I risultati della prova hanno dimostrato che, prendendo come riferimento le stime di valore energetico ottenute applicando l’equazione MENRC, l’equazione MEUCD forniva stime più accurate e precise rispetto all’equazione MEMenke. Tuttavia, il livello di accuratezza e di precisione dell’equazione MEMenke è migliorato notevolmente escludendo i quattro alimenti proteici (PG > 16% SS) dall’analisi. Poiché i valori di digeribilità ottenuti in situ a 24 e a 48 h sono risultati fortemente correlati e hanno evidenziato una riproducibilità comparabile, la riduzione del tempo di incubazione in situ da 48 a 24 h può rappresentare una valida soluzione al fine di contenere i costi di analisi. La quarta prova sperimentale ha valutato gli effetti di due diverse modalità di rilascio del gas (a tempi fissi oppure a pressione fissa) sulle cinetiche di produzione di gas fornite da due alimenti caratterizzati da un differente livello di degradabilità ruminale (un fieno di graminacee e una farina di mais). Ai fini della prova è stato utilizzato un sistema innovativo per la misurazione del gas prodotto dalla fermentazione di matrici alimentari. I risultati della prova hanno evidenziato che la modalità di rilascio del gas ha condizionato significativamente le produzioni di gas fornite dai due alimenti. Tali effetti sono risultati particolarmente rilevanti nel caso della farina di mais e nel caso del rilascio a tempi fissi. Alla luce di questi risultati, quando si adotta la modalità di rilascio a tempi fissi, lo spazio di testa del sistema, la frequenza di rilascio del gas e la quantità di campione alimentare incubato dovrebbero essere opportunamente bilanciati per evitare lo sviluppo di pressioni molto elevate all’interno del sistema, le quali potrebbero alterare le normali cinetiche di produzione del gas. Comunque, al fine di ridurre tali rischi, l’impiego di sistemi che rilasciano il gas a pressione fissa è da ritenersi preferibile. La quinta prova sperimentale ha valutato gli effetti di due sostanze antiossidanti (il BHT ed un estratto di radicchio) dosate a due livelli differenti ed incubate con farina di mais e fieno di graminacee, sui principali parametri ruminali. I risultati della prova hanno evidenziato che i due antiossidanti hanno esercitato effetti poco rilevanti sulla degradabilità ruminale, sulle produzioni di gas e sui profili acidici forniti dai due alimenti. Al dosaggio più elevato, l’estratto di radicchio ha tuttavia migliorato il bilancio azotato ruminale, favorendo un aumento significativo della quota di azoto impiegato dai microorganismi ruminali per la sintesi di proteina batteric

In situ and in vitro techniques for studying rumen fermentations: methodology and applications

Lo scopo generale del presente lavoro di tesi è stato quello di studiare le fermentazioni ruminali mediante la tecnica in situ, e le più moderne tecniche in vitro che valutano la digeribilità e la produzione di gas degli alimenti zootecnici. La tesi comprende i risultati di 5 diverse prove sperimentali. L’obiettivo della prima prova è stato quello di valutare la possibilità di ridurre la quantità di campione alimentare incubato all’interno dei filter bags previsti dal sistema DaisyII (da 0,50 a 0,25 g di alimento/filter bag). La suddetta ipotesi è stata verificata analizzando i risultati ottenuti in due differenti prove sperimentali, condotte rispettivamente su 4 e 7 alimenti, il cui comune obiettivo era il confronto dei valori di digeribilità forniti dal DaisyII e da un sistema in vitro tradizionale. I risultati ottenuti hanno dimostrato che, con l’incubazione di 0,25 g di alimento/filter bag, i valori di digeribilità forniti dal DaisyII risultavano complessivamente meno variabili, meglio correlati e comparabili con quelli forniti dal sistema in vitro tradizionale. La seconda prova sperimentale è stata condotta su 11 alimenti e si poneva l’obiettivo di confrontare i valori di digeribilità ottenuti: i) in situ, attraverso l’impiego di due diversi tipi di sacchetto (nylon e filter bags) caratterizzati da una differente porosità (40 e 25 µm); in situ, incubando i campioni alimentari direttamente nel rumine dell’animale, ed in vitro, incubando i campioni alimentari con liquido ruminale prelevato mediante sonda esofagea da bovine non fistolate. I risultati della prova hanno evidenziato che l’utilizzo dei filter bags, in sostituzione dei nylon bags, induceva una sottostima sistematica, ma comunque stimabile, dei valori di digeribilità degli alimenti. I campioni alimentari incubati in vitro con liquido ruminale prelevato da bovine non fistolate hanno fornito valori di digeribilità direttamente proporzionali a quelli incubati in situ. Un tale risultato è sicuramente soddisfacente: la possibilità di utilizzare liquido ruminale prelevato da bovine non fistolate può rappresentare infatti un’importante opportunità per molti centri di ricerca, consentendo di superare le problematiche di natura etica legate all’impiego di bovine sottoposte ad operazione chirurgica per l’applicazione di fistole ruminali permanenti. La terza prova sperimentale è stata condotta sugli stessi alimenti impiegati nel secondo contributo e si poneva l’obiettivo di determinare il valore energetico degli alimenti applicando tre differenti equazioni: i) un’equazione basata sulla composizione chimica dell’alimento e sul valore di digeribilità della fibra misurato in situ dopo 48 h di incubazione (MENRC); ii e iii) due equazioni basate sulla composizione chimica dell’alimento e sulla produzione di gas misurata in vitro dopo 24 h di incubazione (MEMenke e MEUCD). Un secondo scopo era quello di valutare la possibilità di ridurre il tempo di incubazione in situ da 48 a 24 h. I risultati della prova hanno dimostrato che, prendendo come riferimento le stime di valore energetico ottenute applicando l’equazione MENRC, l’equazione MEUCD forniva stime più accurate e precise rispetto all’equazione MEMenke. Tuttavia, il livello di accuratezza e di precisione dell’equazione MEMenke è migliorato notevolmente escludendo i quattro alimenti proteici (PG > 16% SS) dall’analisi. Poiché i valori di digeribilità ottenuti in situ a 24 e a 48 h sono risultati fortemente correlati e hanno evidenziato una riproducibilità comparabile, la riduzione del tempo di incubazione in situ da 48 a 24 h può rappresentare una valida soluzione al fine di contenere i costi di analisi. La quarta prova sperimentale ha valutato gli effetti di due diverse modalità di rilascio del gas (a tempi fissi oppure a pressione fissa) sulle cinetiche di produzione di gas fornite da due alimenti caratterizzati da un differente livello di degradabilità ruminale (un fieno di graminacee e una farina di mais). Ai fini della prova è stato utilizzato un sistema innovativo per la misurazione del gas prodotto dalla fermentazione di matrici alimentari. I risultati della prova hanno evidenziato che la modalità di rilascio del gas ha condizionato significativamente le produzioni di gas fornite dai due alimenti. Tali effetti sono risultati particolarmente rilevanti nel caso della farina di mais e nel caso del rilascio a tempi fissi. Alla luce di questi risultati, quando si adotta la modalità di rilascio a tempi fissi, lo spazio di testa del sistema, la frequenza di rilascio del gas e la quantità di campione alimentare incubato dovrebbero essere opportunamente bilanciati per evitare lo sviluppo di pressioni molto elevate all’interno del sistema, le quali potrebbero alterare le normali cinetiche di produzione del gas. Comunque, al fine di ridurre tali rischi, l’impiego di sistemi che rilasciano il gas a pressione fissa è da ritenersi preferibile. La quinta prova sperimentale ha valutato gli effetti di due sostanze antiossidanti (il BHT ed un estratto di radicchio) dosate a due livelli differenti ed incubate con farina di mais e fieno di graminacee, sui principali parametri ruminali. I risultati della prova hanno evidenziato che i due antiossidanti hanno esercitato effetti poco rilevanti sulla degradabilità ruminale, sulle produzioni di gas e sui profili acidici forniti dai due alimenti. Al dosaggio più elevato, l’estratto di radicchio ha tuttavia migliorato il bilancio azotato ruminale, favorendo un aumento significativo della quota di azoto impiegato dai microorganismi ruminali per la sintesi di proteina batterica