Implication de l'interleukine-8 et du monoxyde d'azote dans la caractéristique inflammatoire de la mucoviscidose

La mucoviscidose est une maladie héréditaire à caractère récessif touchant environ un enfant caucasien sur deux mille. Le phénotype principal de cette tare est caractérisé par une accumulation de mucus anormalement sec et épais dans les voies respiratoires. Cet état de fait favorise donc la colonisation des sujets atteints par la bactérie Pseudomonas aeruginosa entraînant une infiltration massive des neutrophiles dans les poumons. Il en découle une réponse immunitaire excessive qui est à l'origine d'une inflammation aiguë caractérisée par une production importante de cytokines et de radicaux libres. Les objectifs de la recherche on donc été, dans un premier temps, de quantifier la production des marqueurs d'inflammation soit l'interleukine-S (IL-8), le monoxyde d'azote (NO) et ses dérivés stables par les cellules épithéliales soumises à des stimuli cytokiniques. Une méthode de dosage ELISA a été mise au point de manière à permettre la mesure de l'IL-8 humaine en utilisant des anticorps polyclonaux. Le monoxyde d'azote, quant à lui, a été mesuré indirectement par la méthode colorimétrique de Greiss consistant en la mesure des nitrites dérivés de l'oxydation du monoxyde d'azote. Des études concentration-réponse et cinétiques ont permis de comparer la réponse inflammatoire du phénotype normal à celle obtenue par une lignée CFTR négative. De plus, l'implication de l'IL-8 et du monoxyde d'azote produits par les neutrophiles ayant infiltré les poumons FK dans le processus de destruction protéolytique conduisant à la bronchiectasie a été étudiée en mesurant ces médiateurs dans la phase soluble des expectorations de patients FK et de fumeurs bronchitiques. Les neutrophiles isolés de ces expectorations de même que du sang périphérique de sujets FK et normaux, lorsque mis en culture, ont permis l'évaluation de la production spontanée d'IL-8 et de NO de même que l'étude de la modulation positive et négative de ces marqueurs d'inflammation. Si l'inflammation a pu être induite par des cytokines dites pro-inflammatoires telles que l'interleukine-1? (IL-1?) et le tumor necrosis factora (TNFx), elle a aussi pu être inhibée par rinterférony (IFNy) alors que rinterleukine-4 (IL-4) et les anti-inflammatoires synthétiques ont été sans effet. L'inhibition de la production de NO par les neutrophiles et les cellules épithéliales a été étudiée en prétraitant les cellules avec des antagonistes de L-arginine tels que le Ng-monométhyl-L-arginine (L-NMMA), la forme méthyle ester de l'arginine (L-NAME) et la canavanine (L-CAN). Seul le L-NMMA a pu inhiber partiellement la production de NO par les neutrophiles humains induite par la présence de la bactérie P. aeruginosa. Dans un deuxième temps, l'isolement, la purification et la constitution d'un stock d'une souche clinique de Pseudomonas aeruginosa a permis de procéder à des études relatives à l'aspect bactériologique de la maladie. Les interactions entre le pathogène opportuniste et les cellules de l'hôte ont été étudiées en mesurant la production d'IL-8 et de NO induite par la co-incubation de ces deux entités biologiques. De plus, en cultivant la bactérie dans un milieu bactériostatique il a été possible de déterminer l'aptitude de celle-ci à utiliser les produits métaboliques des cellules de l'hôte pour sa propre croissance. Les travaux ont démontré que Pseudomonas aeruginosa constitue un agent inflammatoire important puisqu'elle induit la production d'IL-8 et de NO chez les neutrophiles de même que chez les cellules épithéliales des voies aériennes supérieures. Cet?te production de marqueurs d'inflammation peut, par ailleurs, être associée au degré de sévérité de la maladie. Les expériences de bactériologie ont permis de démontrer que P. aeruginosa tire avantage de la réaction qu'elle provoque puisqu'elle semble utiliser à la fois le nitrate dérivé du NO et l'IL-8. Ainsi donc, ce travail a permis de mieux comprendre les interactions entre les marqueurs d'inflammation, le pathogène impliqué et les cellules de l'hôte et ont permis de mieux saisir les causes de la persistance de l'infection à Pseudomonas aeruginosa. En outre, notre travail a permis de documenter des mécanismes inflammatoires cruciaux qui devraient devenir des cibles thérapeutiques dans de nouvelles approches au traitement de la mucoviscidose

L'alliance thérapeutique : perception du client et influence de la symptomatologie psychopathologique et du style d'attachement au thérapeute

La présente étude s'est proposée de contribuer à l'avancement des connaissances quant à la perception des clients de l'alliance thérapeutique de môme qu'à l'influence de la symptomatologie et l'attachement au thérapeute sur la qualité de l'alliance du travail. Un premier objectif visait l'élucidation de l'alliance thérapeutique telle que concrètement vécue par les clients, en vue d'obtenir une conception du phénomène mieux ancrée dans la réalité clinique de ces derniers. Un deuxième objectif visait l'étude de l'influence de divers symptômes psychopathologiques sur l'évaluation de l'alliance de travail des clients. Enfin, un troisième objectif visait la poursuite de l'étude de la pertinence du construit de l'attachement du client au thérapeute. Vingt-sept clients d'un service de consultation universitaire ont complété un questionnaire visant à recueillir leurs perceptions phénoménologiques, ainsi que l'Inventaire de l'Alliance du Travail. (WAI, version abrégée, Horvath & Greenberg, 1989; Tracey & Kokotovic, 1989), ainsi que l'Inventaire Bref des Symptômes (BSI, Derogatis & Spencer, 1982) et l'Échelle d'Attachement du Client au & Thérapeute (CATS, Mallinckrodt, Coble & Gantt 1995). (Abstract shortened by UMI.

Effect of Hydrocortisone on Mortality and Organ Support in Patients With Severe COVID-19: The REMAP-CAP COVID-19 Corticosteroid Domain Randomized Clinical Trial.

Importance: Evidence regarding corticosteroid use for severe coronavirus disease 2019 (COVID-19) is limited. Objective: To determine whether hydrocortisone improves outcome for patients with severe COVID-19. Design, Setting, and Participants: An ongoing adaptive platform trial testing multiple interventions within multiple therapeutic domains, for example, antiviral agents, corticosteroids, or immunoglobulin. Between March 9 and June 17, 2020, 614 adult patients with suspected or confirmed COVID-19 were enrolled and randomized within at least 1 domain following admission to an intensive care unit (ICU) for respiratory or cardiovascular organ support at 121 sites in 8 countries. Of these, 403 were randomized to open-label interventions within the corticosteroid domain. The domain was halted after results from another trial were released. Follow-up ended August 12, 2020. Interventions: The corticosteroid domain randomized participants to a fixed 7-day course of intravenous hydrocortisone (50 mg or 100 mg every 6 hours) (n = 143), a shock-dependent course (50 mg every 6 hours when shock was clinically evident) (n = 152), or no hydrocortisone (n = 108). Main Outcomes and Measures: The primary end point was organ support-free days (days alive and free of ICU-based respiratory or cardiovascular support) within 21 days, where patients who died were assigned -1 day. The primary analysis was a bayesian cumulative logistic model that included all patients enrolled with severe COVID-19, adjusting for age, sex, site, region, time, assignment to interventions within other domains, and domain and intervention eligibility. Superiority was defined as the posterior probability of an odds ratio greater than 1 (threshold for trial conclusion of superiority >99%). Results: After excluding 19 participants who withdrew consent, there were 384 patients (mean age, 60 years; 29% female) randomized to the fixed-dose (n = 137), shock-dependent (n = 146), and no (n = 101) hydrocortisone groups; 379 (99%) completed the study and were included in the analysis. The mean age for the 3 groups ranged between 59.5 and 60.4 years; most patients were male (range, 70.6%-71.5%); mean body mass index ranged between 29.7 and 30.9; and patients receiving mechanical ventilation ranged between 50.0% and 63.5%. For the fixed-dose, shock-dependent, and no hydrocortisone groups, respectively, the median organ support-free days were 0 (IQR, -1 to 15), 0 (IQR, -1 to 13), and 0 (-1 to 11) days (composed of 30%, 26%, and 33% mortality rates and 11.5, 9.5, and 6 median organ support-free days among survivors). The median adjusted odds ratio and bayesian probability of superiority were 1.43 (95% credible interval, 0.91-2.27) and 93% for fixed-dose hydrocortisone, respectively, and were 1.22 (95% credible interval, 0.76-1.94) and 80% for shock-dependent hydrocortisone compared with no hydrocortisone. Serious adverse events were reported in 4 (3%), 5 (3%), and 1 (1%) patients in the fixed-dose, shock-dependent, and no hydrocortisone groups, respectively. Conclusions and Relevance: Among patients with severe COVID-19, treatment with a 7-day fixed-dose course of hydrocortisone or shock-dependent dosing of hydrocortisone, compared with no hydrocortisone, resulted in 93% and 80% probabilities of superiority with regard to the odds of improvement in organ support-free days within 21 days. However, the trial was stopped early and no treatment strategy met prespecified criteria for statistical superiority, precluding definitive conclusions. Trial Registration: ClinicalTrials.gov Identifier: NCT02735707

Effect of angiotensin-converting enzyme inhibitor and angiotensin receptor blocker initiation on organ support-free days in patients hospitalized with COVID-19

IMPORTANCE Overactivation of the renin-angiotensin system (RAS) may contribute to poor clinical outcomes in patients with COVID-19. Objective To determine whether angiotensin-converting enzyme (ACE) inhibitor or angiotensin receptor blocker (ARB) initiation improves outcomes in patients hospitalized for COVID-19. DESIGN, SETTING, AND PARTICIPANTS In an ongoing, adaptive platform randomized clinical trial, 721 critically ill and 58 non–critically ill hospitalized adults were randomized to receive an RAS inhibitor or control between March 16, 2021, and February 25, 2022, at 69 sites in 7 countries (final follow-up on June 1, 2022). INTERVENTIONS Patients were randomized to receive open-label initiation of an ACE inhibitor (n = 257), ARB (n = 248), ARB in combination with DMX-200 (a chemokine receptor-2 inhibitor; n = 10), or no RAS inhibitor (control; n = 264) for up to 10 days. MAIN OUTCOMES AND MEASURES The primary outcome was organ support–free days, a composite of hospital survival and days alive without cardiovascular or respiratory organ support through 21 days. The primary analysis was a bayesian cumulative logistic model. Odds ratios (ORs) greater than 1 represent improved outcomes. RESULTS On February 25, 2022, enrollment was discontinued due to safety concerns. Among 679 critically ill patients with available primary outcome data, the median age was 56 years and 239 participants (35.2%) were women. Median (IQR) organ support–free days among critically ill patients was 10 (–1 to 16) in the ACE inhibitor group (n = 231), 8 (–1 to 17) in the ARB group (n = 217), and 12 (0 to 17) in the control group (n = 231) (median adjusted odds ratios of 0.77 [95% bayesian credible interval, 0.58-1.06] for improvement for ACE inhibitor and 0.76 [95% credible interval, 0.56-1.05] for ARB compared with control). The posterior probabilities that ACE inhibitors and ARBs worsened organ support–free days compared with control were 94.9% and 95.4%, respectively. Hospital survival occurred in 166 of 231 critically ill participants (71.9%) in the ACE inhibitor group, 152 of 217 (70.0%) in the ARB group, and 182 of 231 (78.8%) in the control group (posterior probabilities that ACE inhibitor and ARB worsened hospital survival compared with control were 95.3% and 98.1%, respectively). CONCLUSIONS AND RELEVANCE In this trial, among critically ill adults with COVID-19, initiation of an ACE inhibitor or ARB did not improve, and likely worsened, clinical outcomes. TRIAL REGISTRATION ClinicalTrials.gov Identifier: NCT0273570

Étude des effets non-immuns du TNF[alpha] et de l'IFN[gamma] sur l'altération des intéractions épithélio-mésenchymateuses et de l'intégrité mucosale dans la maladie de Crohn

La maladie de Crohn est une maladie inflammatoire chronique du tube digestif. Lorsqu'elle affecte l'intestin grêle, elle se caractérise entre autres par l'apparition de foyers d'inflammation où l'on observe un important remodelage de la muqueuse. En effet, on observe une atrophie de la villosité et une hyperplasie des cryptes accompagnées par une importante sécrétion de cytokines pro-inflammatoires dont le TNF[alpha], l'IFN[gamma], l'IL-1[bêta], l'IL-6 de même que le TGF[bêta]. Récemment, notre groupe de recherche a démontré une altération de la distribution des laminines de la membrane basilaire des cryptes des régions inflammées [i.e. enflammées]. Cette observation a soulevé une première hypothèse voulant que cette altération soit le résultat de l'action des cytokines pro-inflammatoires sur la sécrétion des laminines par les cellules épithéliales. Les études menées in vitro à l'aide d'un modèle de cellules épithéliales intestinales humaines représentant les cellules prolifératives de la cryptes (HIEC) nous ont permis de démontrer que le TNF[alpha] et le TGF[bêta] sont les seules cytokines pouvant augmenter la sécrétion des laminines-5 et -10 par les cellules HIEC. Cependant, lorsque le TNF[alpha] est combiné à l'IFN[gamma], celles-ci agissent en synergie et conduisent à une sécrétion massive des laminines-5 et -10 selon un mécanisme indépendant de la voie du TGF[bêta]. Par ailleurs, la combinaison TNF[alpha]/IFN[gamma] induit l'apoptose des cellules épithéliales dans ~25% de la population cellulaire selon une voie dépendante des caspases. Or, l'utilisation d'inhibiteurs de caspases a permis de démontrer que l'augmentation de la sécrétion des laminines-5 et -10 et de l'apoptose, toutes deux induites par la combinaison TNF[alpha]/IFN[gamma], constituent deux mécanismes concomitants mais indépendants. Puisque les laminines de la membrane basilaire sont d'origines épithéliale mais aussi myofibroblastique, nous avons soulevé une seconde hypothèse voulant que la couche myofibroblastique sous-épithéliale puisse également être une cible des cytokines pro-inflammatoires et que leur altération puisse affecter l'homéostasie épithélio-mésenchymateuse. Encore une fois, des observations faites précédemment in vivo ont montré une altération du marqueur de myofibroblaste, l'[alpha]-actine de muscle lisse ([alpha]-AML), dans les régions péricryptales aux sites d'inflammation

Comparison du profil inflammatoire des soiris résistantes et sensibles à une infection endobronchique à Pseudomonas aeruginosa

A mouse model of resistance and susceptibility to a pulmonary infection with Pseudomonas aeruginosa (PA), was used to study the inflammatory profile early following infection. This study allowed the identification of the mechanisms responsible for the resistant phenotype. We have first determined the pivotal role of the neutrophil recruitment in the alveolar space in the host defense against PA. This influx occurred earlier in the resistant BALB/c mice than in susceptible DBA/2 mice and occurred concommitantly with the beginning of the bacterial clearance. Furthermore, levels of TNFalpha were found to be higher in BALB/c mice than in DBA/2 mice. TNFalpha appears to mediate the production of chemokines responsible for neutrophil recruitment in the lungs. However, treatment of susceptible mice with TNFalpha led to an increase of neutrophil recruitment without any improvement in bacterial clearance. Lung homogenates from resistant mice also showed an increase in IL-10 and GM-CSF content. This was not seen in susceptible mice. This may lead to a more efficient neutrophil activation due to their effect on bacterial exotoxins and apoptotic gene regulation (via Fas pathway). TNFalpha, IL-10 and GM-CSF may represent valuable targets for treatment of lung infection with PA in patients unresponsive to antibiotherapy

Implication de l'interleukine-8 et du monoxyde d'azote dans la caractéristique inflammatoire de la mucoviscidose

La mucoviscidose est une maladie héréditaire à caractère récessif touchant environ un enfant caucasien sur deux mille. Le phénotype principal de cette tare est caractérisé par une accumulation de mucus anormalement sec et épais dans les voies respiratoires. Cet état de fait favorise donc la colonisation des sujets atteints par la bactérie Pseudomonas aeruginosa entraînant une infiltration massive des neutrophiles dans les poumons. Il en découle une réponse immunitaire excessive qui est à l'origine d'une inflammation aiguë caractérisée par une production importante de cytokines et de radicaux libres. Les objectifs de la recherche on donc été, dans un premier temps, de quantifier la production des marqueurs d'inflammation soit l'interleukine-S (IL-8), le monoxyde d'azote (NO) et ses dérivés stables par les cellules épithéliales soumises à des stimuli cytokiniques. Une méthode de dosage ELISA a été mise au point de manière à permettre la mesure de l'IL-8 humaine en utilisant des anticorps polyclonaux. Le monoxyde d'azote, quant à lui, a été mesuré indirectement par la méthode colorimétrique de Greiss consistant en la mesure des nitrites dérivés de l'oxydation du monoxyde d'azote. Des études concentration-réponse et cinétiques ont permis de comparer la réponse inflammatoire du phénotype normal à celle obtenue par une lignée CFTR négative. De plus, l'implication de l'IL-8 et du monoxyde d'azote produits par les neutrophiles ayant infiltré les poumons FK dans le processus de destruction protéolytique conduisant à la bronchiectasie a été étudiée en mesurant ces médiateurs dans la phase soluble des expectorations de patients FK et de fumeurs bronchitiques. Les neutrophiles isolés de ces expectorations de même que du sang périphérique de sujets FK et normaux, lorsque mis en culture, ont permis l'évaluation de la production spontanée d'IL-8 et de NO de même que l'étude de la modulation positive et négative de ces marqueurs d'inflammation. Si l'inflammation a pu être induite par des cytokines dites pro-inflammatoires telles que l'interleukine-1? (IL-1?) et le tumor necrosis factora (TNFx), elle a aussi pu être inhibée par rinterférony (IFNy) alors que rinterleukine-4 (IL-4) et les anti-inflammatoires synthétiques ont été sans effet. L'inhibition de la production de NO par les neutrophiles et les cellules épithéliales a été étudiée en prétraitant les cellules avec des antagonistes de L-arginine tels que le Ng-monométhyl-L-arginine (L-NMMA), la forme méthyle ester de l'arginine (L-NAME) et la canavanine (L-CAN). Seul le L-NMMA a pu inhiber partiellement la production de NO par les neutrophiles humains induite par la présence de la bactérie P. aeruginosa. Dans un deuxième temps, l'isolement, la purification et la constitution d'un stock d'une souche clinique de Pseudomonas aeruginosa a permis de procéder à des études relatives à l'aspect bactériologique de la maladie. Les interactions entre le pathogène opportuniste et les cellules de l'hôte ont été étudiées en mesurant la production d'IL-8 et de NO induite par la co-incubation de ces deux entités biologiques. De plus, en cultivant la bactérie dans un milieu bactériostatique il a été possible de déterminer l'aptitude de celle-ci à utiliser les produits métaboliques des cellules de l'hôte pour sa propre croissance. Les travaux ont démontré que Pseudomonas aeruginosa constitue un agent inflammatoire important puisqu'elle induit la production d'IL-8 et de NO chez les neutrophiles de même que chez les cellules épithéliales des voies aériennes supérieures. Cet?te production de marqueurs d'inflammation peut, par ailleurs, être associée au degré de sévérité de la maladie. Les expériences de bactériologie ont permis de démontrer que P. aeruginosa tire avantage de la réaction qu'elle provoque puisqu'elle semble utiliser à la fois le nitrate dérivé du NO et l'IL-8. Ainsi donc, ce travail a permis de mieux comprendre les interactions entre les marqueurs d'inflammation, le pathogène impliqué et les cellules de l'hôte et ont permis de mieux saisir les causes de la persistance de l'infection à Pseudomonas aeruginosa. En outre, notre travail a permis de documenter des mécanismes inflammatoires cruciaux qui devraient devenir des cibles thérapeutiques dans de nouvelles approches au traitement de la mucoviscidose

Cooperation between HNF-1α, Cdx2, and GATA-4 in initiating an enterocytic differentiation program in a normal human intestinal epithelial progenitor cell line

In the intestinal epithelium, the Cdx, GATA, and HNF transcription factor families are responsible for the expression of differentiation markers such as sucrase-isomaltase. Although previous studies have shown that Cdx2 can induce differentiation in rat intestinal IEC-6 cells, no data are available concerning the direct implication of transcription factors on differentiation in human normal intestinal epithelial cell types. We investigated the role of Cdx2, GATA-4, and HNF-1α using the undifferentiated human intestinal epithelial crypt cell line HIEC. These transcription factors were tested on proliferation and expression of polarization and differentiation markers. Ectopic expression of Cdx2 or HNF-1α, alone or in combination, altered cell proliferation abilities through the regulation of cyclin D1 and p27 expression. HNF-1α and GATA-4 together induced morphological modifications of the cells toward polarization, resulting in the appearance of functional features such as microvilli. HNF-1α was also sufficient to induce the expression of cadherins and dipeptidylpeptidase, whereas in combination with Cdx2 it allowed the expression of the late differentiation marker sucrase-isomaltase. Large-scale analysis of gene expression confirmed the cooperative effect of these factors. Finally, although DcamKL1 and Musashi-1 expression were downregulated in differentiated HIEC, other intestinal stem cell markers, such as Bmi1, were unaffected. These observations show that, in cooperation with Cdx2, HNF-1α acts as a key factor on human intestinal cells to trigger the onset of their functional differentiation program whereas GATA-4 appears to promote morphological changes