Educomunicação, Transformação Social e Desenvolvimento Sustentável

Esta publicação apresenta os principais trabalhos dos GTs do II Congresso Internacional de Comunicação e Educação nos temas Transformação social, com os artigos que abordam principalmente Educomunicação e/ou Mídia-Educação, no contexto de políticas de diversidade, inclusão e equidade; e, em Desenvolvimento Sustentável os artigos que abordam os avanços da relação comunicação/educação no contexto da educação ambiental e desenvolvimento sustentável

Interactomic analysis of VDAC in rat and bovine mitochondria in neuronal cells

A VDAC é a proteína mais abundante da membrana mitocondrial externa. Possui diversas funções, tais como o controle da troca de metabólitos, através da membrana, e a participação no maquinário apoptótico. Estudamos o interactoma da VDAC com as proteínas mitocondriais neuronais do cérebro bovino e murino, a fim de compreender se a expressão diferenciada da VDAC1 e VDAC2 verificada entre essas células estão associadas às diferenças nas interações da VDAC. Os complexos proteicos foram analisados por 2D Blue Native SDS-PAGE e identificados via MALDI-TOF TOF usando o software Mascot e o banco de dados NCBInr. Foram identificados 27 e 46 spots em murino e bovino, respectivamente. Nós identificamos proteínas solúveis e incorporadas na membrana que não são participantes da fosforilação oxidativa, dentre elas a aldeido deidrogenase e muitas outras constituintes de complexos mitocondriais já conhecidos tão bem como novos, tais como a putative stomatin-like protein 2 complex e a switch-associated protein 70. Nossos resultados mostraram que os neurônios bovinos possuem mais complexos (5) contendo a VDAC do que em ratos (1), os quais indicam uma cinética diferencial de acoplamento e desacoplamento. Interessantemente, a lista contendo as proteínas identificadas inclui algumas proteínas conhecidas ou supostamente localizadas em compartimentos não-mitocondriais, por exemplo, a myc-induced nuclear antigen. O interactoma diferencial da VDAC entre as espécies bovina e murina, evidencia a presença de uma base comum, porém com diferentes ambientes estruturais, as quais podem ser a base da diferença entre os sítios de ligação A e B observados nas diferentes espécies.The voltage dependent anion channel (VDAC) is the most abundant protein of outer mitochondrial membrane. VDAC controls metabolite exchange through this membrane and the apoptosis machinery. We studied the interactome of VDAC with mitochondrial proteins of neuronal cells from rat and bovine brain. We wished to understand if the differential expression of VDAC1 and VDAC2 verified between these cells was linked to differences in the VDAC interactions. Protein complexes were analyzed by 2D Blue Native SDS-PAGE and were identified by MALDI-TOF TOF using Mascot software against the NCBInr database. Number of 27 e 46 spots were identified from rat and bovine brain, respectively. We identified soluble and membrane-embedded non-OXPHOS proteins, among them aldehyde dehydrogenase, and many as constituents of known mitochondrial complexes as well as novel ones such as putative stomatin-like protein 2 complex and switchassociated protein 70. Our results showed that bovine neurons had more protein complexes (5) containing VDAC than rat cells (1), which indicates a differential kinetics of assembly or disassembly. Interestingly, the identification list included some proteins known or presumed to be localized to nonmitochondrial compartments, for example, myc-induced nuclear antigen. Our results support evidences of differential apoptotic and energetic mechanisms verified in these brains. The differential VDAC interactome between bovine and murine, support evidences of a common base, but whith different structural environment, which may be the basis of the difference between the binding sites A and B observed in these brains

Purification and characterization of avian cortical mitochondrial VDAC: identification of post-translational modifications of rat and avian neuronal porins

A VDAC é uma porina presente na MME cuja função é crucial no metabolismo energético, sobrevivência e morte celular. A caracterização da VDAC torna-se importante para a compreensão das inter-relações da mitocôndria com os diferentes componentes citosólicos, tais como a HK. A ligação HK-VDAC favorece a utilização do ATP intramitocondrial em células neuronais, a HK cerebral pode interagir de formas diferentes com a VDAC, o que resulta em diferentes sítios de ligação (sítios A e B). Os variados papéis metabólicos das isoformas da VDAC podem ser explicados pela presença de alterações pós-traducionais. No presente trabalho purificamos a VDAC1 mitocondrial neuronal proveniente de cérebro aviar. Paralelamente, comprovamos que a presença de múltiplas formas das VDACs 1 e 2 em cérebros murino e aviar, seja devida à presença de modificações pós-traducionais, nomeadamente a fosforilação. A proteína isolada apresentou peso molecular de 30KDa. Quando submetida à eletroforese e posteriormente à coloração para a identificação de fosfoproteínas, a mesma mostrou-se desfosforilada. O conhecimento da presença, ou ausência de fosforilação das VDACs, reside na importância de estabelecer-se as bases moleculares ligadas à existência de sítios A e B nas mitocôndrias neuronais.VDAC (voltage-dependent anion channel) is a pore forming protein from outer mitochondrial membrane. It has key functions on energetic metabolism, and cell death and survival. VDAC characterization is important for understanding mitochondrial interactions with cytosolic proteins, such as hexokinase (HK). HK-VDAC interaction supports preferential access to intramitochondrial ATP in neural cells. Brain HK interacts in different ways with VDAC. It results in two HK binding sites (A and B). VDAC isoforms differential metabolic roles may be explained by the presence of post-translational modifications. In this study we purified avian neuronal mitochondrial VDAC1. At same time we showed that VDACs 1 and 2 pI heterogeneity in rat and avian brains is due to phosphorylation. Purified VDAC had a molecular weight of 30 KDa. The purified VDAC submitted to phosphorylated protein staining on gel, was dephosphorylated. The knowledge of presence or absence of VDAC phosphorylation is important for understanding the molecular nature basis of A and B HK binding sites in brain mitochondria.Esse projeto teve suporte da Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (Proc. 2010/05560-6). Carla Rossini Crepaldi é bolsista FAPESP (2009/06687-2). Material biológico foi fornecido pela Globoaves

Purificação e caracterização da VDAC de mitocôndrias corticais aviares: identificação de modificações pós-traducionais nas porinas neuronais murinas e aviares

A VDAC é uma porina presente na MME cuja função é crucial no metabolismo energético, sobrevivência e morte celular. A caracterização da VDAC torna-se importante para a compreensão das inter-relações da mitocôndria com os diferentes componentes citosólicos, tais como a HK. A ligação HK-VDAC favorece a utilização do ATP intramitocondrial em células neuronais, a HK cerebral pode interagir de formas diferentes com a VDAC, o que resulta em diferentes sítios de ligação (sítios A e B). Os variados papéis metabólicos das isoformas da VDAC podem ser explicados pela presença de alterações pós-traducionais. No presente trabalho purificamos a VDAC1 mitocondrial neuronal proveniente de cérebro aviar. Paralelamente, comprovamos que a presença de múltiplas formas das VDACs 1 e 2 em cérebros murino e aviar, seja devida à presença de modificações pós-traducionais, nomeadamente a fosforilação. A proteína isolada apresentou peso molecular de 30KDa. Quando submetida à eletroforese e posteriormente à coloração para a identificação de fosfoproteínas, a mesma mostrou-se desfosforilada. O conhecimento da presença, ou ausência de fosforilação das VDACs, reside na importância de estabelecer-se as bases moleculares ligadas à existência de sítios A e B nas mitocôndrias neuronais

Isolamento e cultivo de neurônios e neuroesferas de córtex cerebral aviar

Métodos de cultivo celular são convenientes na realização de análises funcionais de alterações/interações protéicas das células neuronais, auxiliando a decifrar o interactoma de proteínas chaves na neurogênese de doenças do Sistema Nervoso Central. Por esse motivo, culturas de neurônios e neuroesferas isolados do córtex cerebral aviar representam um modelo acessível para o estudo de diversas doenças neurológicas, tal como a epilepsia. A espécie aviar apresenta peculiaridades em seu proteoma neuronal, visto a presença de uma expressão diferenciada de proteínas chaves no metabolismo energético cerebral, algumas destas (VDAC1 e VDAC2) desempenham papel importante na compreensão do mecanismo da epilepsia refratária. A metodologia estabelecida no presente estudo obteve cultivo de neuroeferas, onde as células cresceram tipicamente em aglomerados atingindo, dentro de 7 dias, o diâmetro ideal de 100-200 µm. A diferenciação celular das neuroesferas foi obtida após a aderência destas às placas tratadas com poli-D-lisina, evidenciada pela migração de fibras do interior da neuroesfera. Ao contrário das neuroesferas, os neurônios em cultivo extenderam seus neuritos após 11 dias de isolamento. Tal modelo in vitro pode ser utilizado com sucesso na identificação das variáveis neuroproteômicas, propiciando uma avaliação global das alterações dinâmicas e suas interações protéicas. Tal modelo pode ter aplicações em estudos dos efeitos de indutores da morte celular e bloqueadores de canais de membrana mitocondriais em proteínas chaves do metabolismo energético cerebral

Relationship Between Expression of Voltage-Dependent Anion Channel (VDAC) Isoforms and Type of Hexokinase Binding Sites on Brain Mitochondria

Voltage-dependent anion channels (VDAC) are pore-forming proteins found in the outer mitochondrial membrane of eukaryotes. VDACs are known to play an essential role in cellular metabolism and in early stages of apoptosis. In mammals, three VDAC isoforms have been identified. A proteomic approach was exploited to study the expression of VDAC isoforms in rat, bovine, and chicken brain mitochondria. Given the importance of mitochondrially bound hexokinase in regulation of aerobic glycolysis in brain, we studied the possibility that differences in the relative expression of VDAC isoforms may be a factor in determining the species-dependent ratio of type A/type B hexokinase binding sites on brain mitochondria. The spots were characterized, and the signal intensities among spots were compared. VDAC1 was the most abundantly expressed of the three isoforms. Moreover the expression of VDAC1 plus VDAC2 was significantly higher in bovine than in rat brain. Chicken brain mitochondria showed the highest VDAC1 expression and the lowest of VDAC2. Bovine brain mitochondria had the highest VDAC2 levels. We concluded that the nature of hexokinase binding site is not determined by the expression of a single VDAC isoform.FAPESP Fundacao de Amparo a Pesquisa do Estado de Sao Paulo[2004/03170-5

The burden of previous fractures in hip fracture patients. The break study (Aging Clinical and Experimental Research (2011) 23, 3 (183-186))

A positive history of fractures in older patients with hip fracture is common. We determined the risk factors associated with a positive history of fractures and the profile of care in hip fracture patients. In the Break Study, we enrolled 1249 women aged ≥60 years, seeking care for a hip fracture. Baseline information included age, body mass index, lifestyle (smoking habit, alcohol consumption), patient's history of fracture after the age of 50 years, family history of fragility fracture and health status (presence of comorbidity, use of specific drugs, pre-fracture walking ability, type of fracture, time to surgery, type of surgery, osteoporosis treatment). In the multivariable model age, smoking, family history, treatment with antiplatelet, anticoagulants and anticonvulsants, were significant predictors of a positive history of fracture. More than 70% of patients underwent surgery more than 48 hours after admission. About 50% were discharged with a treatment for osteoporosis, but more than 30% only with calcium and vitamin D. In conclusion, factors associated with a positive history of fracture are the traditional risk factors, suggesting that they continue to have a negative impact on health even at older ages. Selected drugs, such as antiplatelet and anticoagulants, deserve further consideration as significant factors associated with fractures. Given that delay in surgery is a major cause of mortality and disability, while treatment for osteoporosis decreases significantly the risk of recurrent fractures and disability, interventions to modify these patterns of care are urgently needed