Utilização de plaquetas e de produtos derivados de plaquetas humanas em terapias avançadas

Introduction: Platelets have a central role in the tissue response to injury, in hemostasis and clot formation. They also release rapidly and in orchestrated order bioactive molecules, important for angiogenesis and for tissue regeneration. Non-transfusional clinical use of platelet-derived products, such as Platelet Rich Plasma (PRP), is based on their ability to maximize cellular regeneration in lesions that have repair difficulties. Objectives: This review addresses the characteristics and the potential clinical use of platelets and their derivatives and discusses the legislative framework of their use in the Brazilian context. Method: The databases of PubMed, Brazilian Virtual Health Library, electronic pages of Anvisa and the Brazilian Ministry of Health were consulted between September 2017 and January 2018. Results: PRP is a platelet-derived product that cannot be chemically defined, and its proposed clinical uses are not orthologous applications. Conclusions: We can thus consider that the applications of PRP are Advanced Cell Therapies. Therefore, it is mandatory to standardize protocols and establish quality control criteria - such as traceability, efficacy and pharmacovigilance - so that their use can be properly controlled by the competent regulatory organs, guaranteeing safety in their use.Introdução: As plaquetas têm um papel central no processo da resposta tecidual à injúria, atuando na hemostasia primária e na coagulação, e liberando de maneira coordenada as moléculas bioativas importantes para a angiogênese e para a regeneração tecidual. O uso clínico não transfusional de produtos derivados de plaquetas, como o Plasma Rico em Plaquetas (PRP), baseia-se na sua habilidade de maximizar o processo de regeneração celular, em lesões com dificuldades de reparo natural. Objetivo: Esta revisão aborda as características e potencialidades do uso clínico de plaquetas e seus derivados e discute seu arcabouço legislativo no contexto brasileiro. Método: Foram consultadas as bases de dados PubMed, Biblioteca Virtual em Saúde, páginas eletrônicas da Anvisa e do ministério da Saúde, entre setembro 2017 e janeiro de 2018. Resultado: O PRP é produto derivado de plaquetas que não pode ser quimicamente definido, e o seu uso clínico aqui discutido não é ortólogo. Conclusão: Dessa maneira, podemos considerar a aplicação do PRP como uma Terapia Celular Avançada, sendo fundamental padronizar protocolos, estabelecer critérios de controle de qualidade (rastreabilidade, eficácia e fármaco-vigilância), tornando seu uso devidamente controlado pelos órgãos competentes, com maior segurança na sua utilização

Photoaging skin therapy with PRP and ADSC: a comparative study

Background: Stem cells from adipose tissue (ADSCs) and platelet-rich plasma (PRP) are innovative modalities that arise due to their regenerative potential. Objective: The aim of this study was to characterize possible histological changes induced by PRP and ADSC therapies in photoaged skin. Methods: A prospective randomized study involving 20 healthy individuals, showing skin aging. They underwent two therapeutic protocols (protocol 1: PRP; protocol 2: ADSCs). Biopsies were obtained before and after treatment (4 months). Results: PRP protocol showed unwanted changes in the reticular dermis, mainly due to the deposition of a horizontal layer of collagen (fibrosis) and elastic fibers tightly linked. Structural analyses revealed infiltration of mononuclear cells and depot of fibrotic material in the reticular dermis. The ADSC protocol leads to neoelastogenesis with increase of tropoelastin and fibrillin. There was an improvement of solar elastosis inducing an increment of macrophage polarization and matrix proteinases. These last effects are probably related to the increase of elastinolysis and the remodeling of the dermis. Conclusions: The PRP promoted an inflammatory process with an increase of reticular dermis thickness with a fibrotic aspect. On the other hand, ADSC therapy is a promising modality with an important antiaging effect on photoaged human skin

Fibrina rica em plaquetas: preparo, definição da qualidade, uso clínico

Introdução: A Fibrina Rica em Plaquetas é um concentrado plaquetário, de preparo extemporâneo e uso autólogo, cuja proposta é promover uma melhor e mais rápida cicatrização e reparo das lesões cirúrgicas, tendo sido desenvolvida, inicialmente, para as cirurgias bucais. Objetivo: Analisar o preparo, controle de qualidade e uso clínico do PRF para compreender e discutir os aspectos práticos e regulatórios acerca da sua utilização. Método: Este trabalho foi elaborado como uma revisão integrativa, pelo levantamento de artigos científicos e legislação vigente sobre a utilização clínica do PRF. Resultados: O PRF constitui-se de uma matriz de fibrina, com grande quantidade de plaquetas, que liberam numerosos mediadores pró-regenerativos. A sua obtenção, preparo e uso ocorrem em centro cirúrgico ou consultório odontológico, cabendo ao cirurgião-dentista o compromisso com a garantia da qualidade, quanto aos procedimentos realizados. Além disso, os equipamentos e insumos utilizados devem ser compatíveis com as técnicas de preparo e uso do PRF. Conclusões: A utilização do PRF, pelos cirurgiões-dentistas, segue as determinações da Resolução do Conselho Federal de Odontologia – CFO nº 158/2015, de 08 de junho de 2015. Não há regulamentação para o uso de PRF pelo Conselho Federal de Medicina (CFM). A preparação e o uso do PRF não são considerados Terapia Avançada

Revisão integrativa para substituição do soro fetal bovino por plasma humano rico em plaquetas para cultivo e expansão ex vivo de células humanas destinadas às terapias avançadas

Introdução: O avanço dos ensaios clínicos e da terapia celular implicam na necessidade de substituição do soro fetal bovino por um produto de origem humana, capaz de sustentar a expansão de células humanas destinadas às pesquisas e terapias celulares. Objetivo: Esta revisão integrativa teve como objetivo principal avaliar diferentes alternativas de suplementação de cultura celulares livres de produtos animais, chamadas de culturas celulares xeno-free. Método: Foi realizada a análise de 50 artigos recuperados do PubMed publicados até janeiro de 2018 em língua inglesa ou em português. Resultados: O plasma rico em plaquetas (PRP) é considerado como uma boa alternativa para suplementação do meio de cultura celular. O PRP é obtido a partir do sangue, e possui um rico conteúdo liberado pelas plaquetas ativadas, capaz de estimular a proliferação e a diferenciação de diversos tipos de células, tanto diferenciadas quanto progenitoras. A utilização do PRP em sistemas de cultura celular xeno-free não oferece risco de alterações genéticas da população celular, tampouco sua contaminação com patógenos. As vantagens de sua utilização incluem: 1) a possibilidade de uso de soro autólogo; 2) redução de riscos de contaminação; 3) facilidade de preparo e 4) baixo custo de produção. Conclusões: O uso de concentrado de plaquetas descartados nos centros de hemoterapia é uma boa alternativa para a produção do PRP, que será utilizado sistematicamente na cultura de células humanas. O desafio é padronizar esse processo de produção, de forma a garantir a qualidade do produto destinado às terapias avançadas

Cultura autóloga de células-tronco mesenquimais de tecido adiposo para o tratamento de rítides faciais

OBJETIVO: Testar o efeito das c élulas tronco mesenquimais (CTM) de tecido adiposo no preenchimento cutâneo de rítides na região naso-labial. MÉTODOS: Foram coletados 50 cc de gordura da região infra-umbilical e 20 mL de sangue periférico de 15 voluntárias do sexo feminino para obtenção das CTM e de plasma autólogo, respectivamente. As voluntárias foram agrupadas de acordo com as estratégias de injeções intra-dérmicas: grupo (1) somente o ácido hialurônico; grupo (2) somente as CTM; grupo (3) CTM associadas ao ácido hialurônico. Tratando-se de um estudo prospectivo e qualitativo o acompanhamento das voluntárias era mensal através de fotografias. RESULTADOS: No grupo (1) foi observado um efeito de preenchimento imediato ao contrário do grupo (2) onde o efeito de preenchimento pleno foi alcançado aproximadamente após dois meses. No grupo (3) o preenchimento ocorreu de maneira mais efetiva e também progressiva, devido à combinação dos efeitos de curto e de longo prazo gerados pelo ácido hialurônico e pelas CTM, respectivamente. CONCLUSÃO: As CTM quando associadas ao ácido hialurônico foram capazes de promover o preenchimento de sulcos profundos, com melhora progressiva do tônus da pele e diminuição das linhas de expressão

Identification of Appropriate Reference Genes for Human Mesenchymal Cells during Expansion and Differentiation

<div><p>Background</p><p>Quantitative real time polymerase chain reaction (qPCR) is an extremely powerful technique for monitoring gene expression. The quantity of the messenger ribonucleic acids (mRNA) of interest should be normalized using a reference gene, in order to avoid unreliable results originated by the obtained RNA quality and quantity, manipulation errors and inhibitory contaminants. A reference gene is any gene that is stably and consistently expressed under the conditions being studied. Completely false data can be generated if a reference gene is not chosen adequately.</p><p>Results</p><p>In the present study, we compared expression levels of five putative reference genes (HPRT1, ACTB, GAPDH, RPL13A and B2M) in primary cultures of four different human cells: mesenchymal stromal cells obtained from bone marrow, adipose tissue or umbilical cord Whartońs Jelly, and dermal fibroblasts, under different expansion and differentiation conditions. We observed that reference genes are not the same for different cells under the same culture conditions.</p><p>Conclusion</p><p>Most stable reference genes under our experimental conditions were: RPL13A for adipose tissue- and Whartońs Jelly-derived mesenchymal stromal cells, and HPRT1 for bone marrow-derived mesenchymal stromal cells and dermal fibroblasts. ACTB was the most unstable gene when evaluating adipose tissue- and Whartońs Jelly-derived mesenchymal stromal cells, whilst GAPDH and B2M were the most unstable genes for bone marrow-derived mesenchymal stromal cells and dermal fibroblasts, respectively.</p></div

Quantification of cell surface markers by flow cytometry (expressed in mean percentage ± standard deviation) in human adipose tissue- (AT-), bone marrow- (BM-), and Wharton's Jelly-mesenchymal stromal cells (WJ-MSC) when grown in α-MEM supplemented with 10% human platelet-rich plasma (PRP).

<p>Quantification of cell surface markers by flow cytometry (expressed in mean percentage ± standard deviation) in human adipose tissue- (AT-), bone marrow- (BM-), and Wharton's Jelly-mesenchymal stromal cells (WJ-MSC) when grown in α-MEM supplemented with 10% human platelet-rich plasma (PRP).</p

BestKeeper results obtained for dermal fibroblasts.

<p>The last column (BK, n = 5) shows the parameters obtained after combining all stably expressed genes (B2M, RPL13A and HPRT1), so they can be use as a single normalization factor. n: number of samples; BK: BestKeeper; GM [Cq]: geometric mean of Cq; AM [Cq]: arithmetic mean of Cq; Min [Cq]: minimum value of Cq; Max [Cq]: maximum value of Cq; SD [± Cq]: standard deviation of the Cq; CV [% Cq]: coefficient of variation expressed as a percentage on the Cq level; Min [x-fold]: minimum value of expression levels expressed as an absolute x-fold; Max [x-fold]: maximum value of expression levels expressed as an absolute x-fold; SD [± x-fold]: standard deviation of the absolute regulation coefficients. No unstably expressed gene detected.</p

Cell differentiation assays of human bone marrow- (BM-), adipose tissue- (AT-) and Wharton's Jelly-derived mesenchymal stromal (WJ-MSC) into adipogenic, osteogenic and chondrogenic phenotypes under 10% human platelet-rich plasma (PRP) supplemented medium.

<p>Cell differentiation assays of human bone marrow- (BM-), adipose tissue- (AT-) and Wharton's Jelly-derived mesenchymal stromal (WJ-MSC) into adipogenic, osteogenic and chondrogenic phenotypes under 10% human platelet-rich plasma (PRP) supplemented medium.</p