Evaluación de la mutagenicidad del herbicida glifosato en Prochilodus lineatus a través del test de micronúcleos

The use of pesticides can affect the aquatic ecosystem. Through the soil, these pollutants are drained into rivers and lagoons. In Argentina, glyphosate-based agrochemicals such as Roundup are widely used in agricultural activities. Considering this, the objective of this work was to evaluate the genotoxic damage of Roundup Full II® in blood cells of juvenile specimens of Prochilodus lineatus were evaluated. The fish are exposed to concentrations of 0.025 μg/L, 0.05 μg/L and 0.1 μg/L of glyphosate (Roundup Full II) for 7 days. After this period, for the preparation of the smears, blood was extracted from the fish by puncture of the caudal vein. Smear analysis will reveal micronucleus, binucleate cells, lobed nuclei, blebbed nuclei, notched nuclei, nuclear vacuoles, microcytes, buds and cells with nuclear bridge. The statistical analysis showed significant differences between the control and treated groups. In this way, the results suggest the existence of a genetic damage caused by the exposure of the fish to the pesticide.El uso de plaguicidas puede afectar el ecosistema acuático. A través del suelo, estos contaminantes se drenan a los ríos y lagunas. En la Argentina, agroquímicos a base de glifosato como el Roundup, se utilizan ampliamente en actividades agrícolas. Considerando esto, el objetivo de este trabajo fue evaluar los efectos genotóxicos de Roundup Full II® en células sanguíneas de ejemplares juveniles de Prochilodus lineatus. Los peces se expusieron a las concentraciones de 0,025 μg/L, 0,05 μg/L y 0,1 μg/L de glifosato (Roundup Full II) durante 7 días. Después de este período, para la preparación de los frotis se extrajo de los peces sangre por punción de la vena caudal. El análisis de los frotis reveló la ocurrencia de células con micronúcleos, células binucleadas, lobulaciones nucleares (Lobed nuclei; blebbed nuclei), muescas nucleares (notched nuclei), vacuolas nucleares, microcitos, brotes y núcleos con puente. El estudio estadístico mostró diferencias significativas entre los grupos de control y los tratados. De esta manera, los resultados sugieren la existencia de un daño en el material genético causado por la exposición de los peces al pesticida

Evaluación de los efectos del herbicida glifosato en el pez Prochilodus lineatus a través del test de aberración cromosómica.

The widespread use of glyphosate has been subject of numerous controversies since the prolonged exposure to low concentrations of this substance could lead to toxic effects. Then, the appearance of pathologies in medium and long term progressively will increase because of the exposure of people and animals through the consumption of contaminated water or food. Considering this, the aim of this study was to evaluate the potential mutagenicity of glyphosate herbicide in fish (Prochilodus lineatus) using the test of chromosome aberrations. The fish were exposed to 0,1 ug/l of glyphosate for 70 days. After this period, samples of the anterior portion of the kidney were extracted for chromosomal aberrations (CAs) analysis. A greater number of CAs (gaps, breaks, stickiness, endomitosis, fragmentations, and pulverizations) were observed in individuals exposed to the pesticide. The statistical analysis of the data showed significant differences between the control and treated groups. In this way, the results suggested the existence of a genetic response as a consequence of pesticide exposure in fish.El uso generalizado del glifosato ha sido objeto de numerosas controversias, ya que la exposición prolongada a bajas concentraciones de este agroquímico podría dar lugar a efectos no deseados o nocivos. Ello favorecería la aparición de patologías en el mediano y largo plazo, lo que aumenta progresivamente el riesgo de exposición en seres humanos y animales, a través del consumo de agua y alimentos contaminados. Teniendo en cuenta esta premisa, el objetivo del trabajo fue evaluar el posible efecto mutagénico del herbicida a través de la prueba de aberraciones cromosómicas en peces de la especie Prochilodus lineatus. Los peces fueron expuestos a 0,1 ug/l de glifosato durante 70 días. Después de este período una muestra de la porción anterior del riñón fue extraída para el análisis de aberraciones cromosómicas (AC). En los individuos expuestos al pesticida se registró mayor número de AC. El análisis estadístico de los datos mostró diferencias significativas entre los grupos control y tratado. Los resultados sugieren la existencia de una respuesta genética causada por la exposición y el contacto de los especímenes con el herbicida

Análisis citogenético en Salminus brasiliensis (Pisces, Characidae) del Río Paraná, Corrientes, Argentina

La especie Salminus brasiliensis es conocida vulgarmente con el nombre de “dorado”. Se caracteriza por tener una amplia distribución en América del Sur. Los ejemplares de la población del Río Paraná se caracterizan por presentar un número diploide de 50 cromosomas. La fórmula cariotípica está constituida por 5 pares de cromosomas metacéntricos, 10 pares submetacéntricos y 10 pares subtelo- acrocéntricos, con un número fundamental de 80 en ambos sexos. No se observaron heteromorfismos cromosómicos relacionados con el sexo. La impregnación con nitrato de plata permitió observar la ocurrencia de NORs simples, localizadas en el brazo largo del par número 6. El bandeo C reveló una gran cantidad de bloques de heterocromatina, presentes en la mayoría de los cromosomas, preferentemente situados en regiones centroméricas y pericentroméricas. El cariotípo de S. brasiliensis del Paraná Medio, Argentina, muestra con relación a individuos de la misma especie pertenecientes a las cuencas del Alto Paraná y San Francisco (Brasil), una notable similitud, evidenciando la ocurrencia de una estructura cariotípica muy conservada

Caracterización citogenética de Hoplosternum littorale (Pisces, Siluriformes) del río Riachuelo (Corrientes, Argentina)

La especie Hoplosternum littorale es conocida vulgarmente con el nombre de “cascarudo”. Se caracteriza por tener una amplia distribución en América del Sur. Tres ejemplares de la población del río Riachuelo (dos hembras y un macho) fueron citogenéticamente analizados y se caracterizaron por presentar un número diploide de 60 cromosomas. La formúla cariotípica estuvo constituida por 8 cromosomas meta-submetacéntricos y 52 acrocéntricos, con un número fundamental de 68 en ambos sexos. No se observaron diferencias cromosómicas entre sexos. La impregnación con nitrato de plata identificó la ocurrencia de NOR simples, localizadas en el brazo corto del par número 5. El bandeo C reveló una gran cantidad de bloques de heterocromatina presentes en la mayoría de los cromosomas, preferentemente situados en regiones terminales e intersticiales adyacentes al centrómero. Los datos obtenidos corroboran que H. littorale posee una evolución cariotípica conservada, siendo necesario complementar los estudios citogenéticos con marcadores moleculares para una mejor comprensión de las relaciones evolutivas y el mantenimiento de la macroestructura cariotípica de la especie

Estructura y variabilidad de la región organizadora de nucléolos en Prochilodus lineatus (Pisces, Prochilodontidae)

Los peces de la familia Prochilodontidae se distribuyen en varias cuencas hidrográficas de América del Sur. El género Prochilodus presenta una de las distribuciones más amplias, encontrándose desde el Orinoco hasta el río de La Plata. En la Argentina es el recurso íctico más abundante del río Paraná y actualmente ha crecido el interés por esta especie. Dada su importancia económica, el objetivo del presente trabajo fue establecer su estructura cromosómica en ejemplares provenientes del río Paraná en la Provincia de Corrientes (Argentina), con especial énfasis al análisis de las regiones organiza­doras de nucléolos (NORs). El estudio de los cromosomas mitóticos y de las NORs se realizó a través de la coloración convencional con Giemsa y nitrato de plata, respectivamente. El cariotipo de la especie está constituido por 54 cromosomas (meta/submetacéntricos), siendo observada la ocurrencia de microcromosomas B, los cuales varían en número a nivel intra e interindividual, generando la ocurrencia de polimorfismos. La NOR está localizada en posi­ción intersticial en el brazo largo de un par metacéntrico, presentando variaciones en cuanto a la posición y tamaño de las regiones Ag-NORs+, a saber: a) la NOR se presenta única y de igual tamaño en los dos homólogos, b) NOR grande ocupando la mitad del brazo largo y úni­ca en uno de los cromosomas; pequeña y única en el otro, c) doble región NOR en uno de los cromosomas y NOR única y pequeña en su homólogo. La diferencia de tamaño de la NOR es debida a alteraciones cromosómicas estructurales como duplicaciones, deleciones y crossing over desigual. La doble NOR probablemente sea el resultado de una inversión paracéntrica.

PLXNA1 and PLXNA3 cooperate to pattern the nasal axons that guide gonadotropin-releasing hormone neurons

Gonadotropin-releasing hormone (GnRH) neurons regulate puberty onset and sexual reproduction by secreting GnRH to activate and maintain the hypothalamic-pituitary-gonadal axis. During embryonic development, GnRH neurons migrate along olfactory and vomeronasal axons through the nose into the brain, where they project to the median eminence to release GnRH. The secreted glycoprotein SEMA3A binds its receptors neuropilin (NRP) 1 or NRP2 to position these axons for correct GnRH neuron migration, with an additional role for the NRP co-receptor PLXNA1. Accordingly, mutations in SEMA3A, NRP1, NRP2 and PLXNA1 have been linked to defective GnRH neuron development in mice and inherited GnRH deficiency in humans. Here, we show that only the combined loss of PLXNA1 and PLXNA3 phenocopied the full spectrum of nasal axon and GnRH neuron defects of SEMA3A knockout mice. Together with Plxna1, the human orthologue of Plxna3 should therefore be investigated as a candidate gene for inherited GnRH deficiency

Plxna1 and Plxna3 cooperate to pattern the nasal axons that guide gonadotropin-releasing hormone neurons

The gonadotropin releasing hormone (GnRH) neurons regulate puberty onset and sexual reproduction by secreting GnRH to activate and maintain the hypothalamic-pituitary gonadal axis. During embryonic development, GnRH neurons migrate along olfactory and vomeronasal axons through the nose into the brain, where they project to the median eminence to release GnRH. The secreted glycoprotein SEMA3A binds its receptors neuropilin (NRP) 1 or NRP2 to position these axons for correct GnRH neuron migration, with an additional role for the NRP co-receptor PLXNA1. Accordingly, mutations in SEMA3A, NRP1, NRP2 and PLXNA1 have been linked to defective GnRH neuron development in mice and inherited GnRH deficiency in humans. Here, we show that only the combined loss of PLXNA1 and PLXNA3 phenocopied the full spectrum of nasal axon and GnRH neuron defects of SEMA3A knockout mice. Together with Plxna1, the human ortholog of Plxna3 should therefore be investigated as a candidate gene for inherited GnRH deficiency

Efectos de un herbicida a base de glifosato sobre hematíes de Prochilodus lineatus (Pisces, Prochilodontidae)

En la actualidad el sistema agrícola tiene como principal propósito el aumento de la producción con el fin de garantizar el abastecimiento y distribución de sus productos en el mercado, sea interno o externo, generando así mayor rentabilidad económica. Esto trae aparejado la implementación de diferentes agroquímicos que, vertidos al ambiente, pueden tener un impacto negativo sobre la flora, fauna, cuerpos hídricos e incluso en seres humanos. El glifosato (Roundup Full II) es uno de los herbicidas más empleados y sus beneficios están siendo objetados por las desventajas que podría provocar su utilización en forma excesiva. El objetivo de este trabajo fue evaluar la ocurrencia de alteraciones citoplasmáticas en eritrocitos de sábalo (Prochilodus lineatus) expuestos en un ensayo crónico al herbicida glifosato. Se utilizaron ocho ejemplares juveniles de sábalo, los que fueron distribuidos aleatoriamente en dos tratamientos según la adición del herbicida: control (C) sin adición y tratado (T) con adición de 0,1 µg/l de glifosato. El ensayo tuvo una duración de 70 días. Para la preparación de los frotis sanguíneos se procedió a la extracción de sangre periférica por punción de la vena caudal. Las alteraciones observadas fueron presencia de vacuolas citoplasmáticas, dacriocitosis y microcitosis. Estas anormalidades se presentaron con mayor frecuencia en el grupo T con respecto al C. Los resultados obtenidos sugieren la existencia de una respuesta patológica a nivel hemático ante una exposición crónica a la dosis de 0,1 µg/l del herbicid

Anormalidades morfológicas nucleares en hematíes del pez Prochilodus linneatus expuesto al clorpirifos

In recent years, the monitoring of xenobiotics (chemicals such as pesticides) in the environment has been very important, as the persistence of the biological activity of many of these compounds has been recognized. Chlorpyrifos is an organophosphorus insecticide of broad spectrum, used in agricultural and domestic activities. This pesticide as well as other chemicals may accidentally reach the aquatic ecosystem and the ictic fauna. Fish ingesting contaminated substances subsequently develop alterations due to bioaccumulation, becoming effective indicators of environmental pollution. The purpose of this study was to evaluate the genotoxicity of chlorpyrifos in P. linneatus (Pisces, Prochilodontidae) through the frequency of micronuclei (MN) and nuclear morphology alterations (AMN) in peripheral blood erythrocytes. After acclimatization the fish were divided into two control (C) and treated groups (T1 = 10 μg/l, T2 = 30 μg/l and T3 = 90 μg/l). Three replicates per group (C, T) were performed with a total of 3 animals per fishbowl. The animals remained in the aquariums for a period of 7 days. After this time they were sacrificed with an overdose of anaesthetic to extract blood from the caudal vein. Smears were stained with Giemsa. In the samples analyzed, the number of MN and AMN was determined after observation of 2000 cells per animal. Cells with intact cytoplasmic membrane were considered for the study. The analysis of blood smears in both groups revealed the presence of micronuclei and the following nuclear morphology alterations; notches, lobulated, evaginations, eigth shaped, segmentations and vacuolization nuclei. Individuals T3 showed significant variations in the frequency of MN and AMN with respect to the controls (p<0.05), but not the T1 and T2 specimens. We conclude that chlorpyrifos at a dose of 90 μg/l could be harmful to the environment.Recientemente adquirió importancia el monitoreo de xenobióticos (como pesticidas) en el medio ambiente, debido a la persistencia de la actividad biológica de muchos de ellos. Clorpirifos es un insecticida organofosforado empleado a nivel agrícola y doméstico. Este plaguicida puede alcanzar accidentalmente el ecosistema acuático y la fauna íctica. Al ingerir sustancias contaminadas, los peces desarrollan alteraciones debidas a la bioacumulación, constituyéndose en eficaces indicadores de polución ambiental. El propósito del estudio fue evaluar la genotoxicidad del clorpirifos en P. linneatus (Pisces, Prochilodontidae) a través de la frecuencia de micronúcleos (MN) y de alteraciones de la morfología nuclear (AMN) en eritrocitos de sangre periférica. Los ensayos se realizaron con clorpirifos en su forma pura (Sigma Aldrich). Los peces se dividieron en grupos control (C) y tratados (T1 = 10 μg/l; T2 = 30 μg/l y T3 = 90 μg/l). Se realizaron tres replicas por grupo, con un total de 3 animales por pecera, los cuales permanecieron allí durante 7 días, tras lo cual fueron sacrificados con sobredosis de anestésico. Se extrajo sangre de la vena caudal, realizándose frotis que se colorearon con Giemsa, determinándose el número de MN y AMN luego de la observación de 2000 células por animal. Para el estudio se consideraron las células con sus membranas citoplasmáticas intactas. En ambos grupos, los frotis sanguíneos revelaron la presencia de micronúcleos, así como algunas de las siguientes alteraciones de la morfología nuclear: muesca, lobulación, evaginación, forma de ocho, segmentación y vacuolización nuclear. Los individuos del grupo T3 mostraron variaciones significativas en la frecuencia de MN y AMN respecto a los controles (p<0,05), no así los ejemplares de los tratamientos T1 y T2. Por lo expuesto, surge que el clorpirifos a la dosis de 90 μg/l podría ser nocivo para el medio ambiente

Impact of social determinants on antiretroviral therapy access and outcomes entering the era of universal treatment for people living with HIV in Italy

Background: Social determinants are known to be a driving force of health inequalities, even in high income countries. Aim of our study was to determine if these factors can limit antiretroviral therapy (ART) access, outcome and retention in care of people living with HIV (PLHIV) in Italy. Methods: All ART naïve HIV+ patients (pts) of Italian nationality enrolled in the ICONA Cohort from 2002 to 2016 were included. The association of socio-demographic characteristics (age, sex, risk factor for HIV infection, educational level, occupational status and residency area) with time to: ART initiation (from the first positive anti-HIV test), ART regimen discontinuation, and first HIV-RNA < 50 cp/mL, were evaluated by Cox regression analysis, Kaplan Meier method and log-rank test. Results: A total of 8023 HIV+ pts (82% males, median age at first pos anti-HIV test 36 years, IQR: 29-44) were included: 6214 (77.5%) started ART during the study period. Women, people who inject drugs (PWID) and residents in Southern Italy presented the lowest levels of education and the highest rate of unemployment compared to other groups. Females, pts aged > 50 yrs., unemployed vs employed, and people with lower educational levels presented the lowest CD4 count at ART initiation compared to other groups. The overall median time to ART initiation was 0.6 years (yrs) (IQR 0.1-3.7), with a significant decrease over time [2002-2006 = 3.3 yrs. (0.2-9.4); 2007-2011 = 1.0 yrs. (0.1-3.9); 2012-2016 = 0.2 yrs. (0.1-2.1), p < 0.001]. By multivariate analysis, females (p < 0.01) and PWID (p < 0.001), presented a longer time to ART initiation, while older people (p < 0.001), people with higher educational levels (p < 0.001), unemployed (p = 0.02) and students (p < 0.001) were more likely to initiate ART. Moreover, PWID, unemployed vs stable employed, and pts. with lower educational levels showed a lower 1-year probability of achieving HIV-RNA suppression, while females, older patients, men who have sex with men (MSM), unemployed had higher 1-year risk of first-line ART discontinuation. Conclusions: Despite median time to ART start decreased from 2002 to 2016, socio-demographic factors still contribute to disparities in ART initiation, outcome and durability