Estudio de la concentración sérica del factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF) en el carcinoma vesical y de su relación con el estadio tumoral, grado citológico, recidivas y supervivencia

RESUMEN El carcinoma vesical es el segundo tumor más frecuente del aparato genitourinario, es el quinto tumor más frecuente de los varones occidentales, y en nuestro país se estima una incidencia de 20 casos por cada 100.000 habitantes y año. En la actualidad es necesario encontrar nuevos indicadores pronósticos del carcinoma vesical que permitan identificar que tumores deben ser tratados precozmente de manera más intensa. La angiogénesis en el carcinoma vesical, expresada como densidad vascular en las piezas quirúrgicas, ha mostrado tener relación con el pronóstico del mismo. VEGF es una citosina multifuncional que ha mostrado tener gran relevancia en el proceso angiogénico. Hipótesis: Para el desarrollo y progresión del carcinoma vesical la angiogénesis es un factor necesario, aunque no suficiente, en el que VEGF pudiera jugar un papel relevante. Objetivos: Cuantificar la concentración sérica de VEGF en una serie de tumores vesicales primarios, así como en un grupo control de pacientes no neoplásicos. Comprobar si existe una relación entre los niveles séricos de VEGF en el momento del diagnóstico inicial con el estadio tumoral, grado citológico, citología urinaria, número de tumores existentes al diagnóstico, número de recidivas, progresión, intervalo libre de enfermedad existente hasta la primera recidiva y mortalidad en los tres primeros años de seguimiento. Material y Métodos: Se realizó una determinación de los niveles séricos de VEGF, mediante una técnica de ELISA, en una serie 52 de tumores vesicales así como en un grupo control de 26 pacientes no neoplásicos. Resultados: Se apreciaron concentraciones medias significativamente distintas en el grupo de estudio y en el grupo control, presentando los pacientes del grupo de estudio concentraciones séricas medias superiores a las existentes en el grupo control. No se aprecio una relación estadísticamente significativa entre las concentraciones séricas de VEGF y estadio, grado, citología urinaria, número de tumores existentes al diagnóstico, número de recidivas, progresión, intervalo libre de enfermedad, mortalidad ni supervivencia. Conclusiones: Los pacientes con carcinoma transicional vesical presentan unas concentraciones séricas de VEGF elevadas en relación existentes en la población no oncológica. No se apreciaron relaciones significativas de las concentraciones séricas de VEGF con indicadores pronósticos de reconocidos del carcinoma vesical. Las concentraciones séricas de VEGF no aportan información pronóstica en el carcinoma vesical. __________________________________________________________________________________________________Bladder cancer is the second most frequent tumour of the genitourinary tract. In our days it is necessary to identify new prognostic markers of bladder cancer that help clinicians to identify which patients should be treated earlier and in an intensive way. Tumour development is angiogenesis dependent. Tumour angiogenesis, expressed as mean micro vessel density in histological preparations, proved to be in several studies an independent prognostic marker in bladder cancer. VEGF is a multifunctional cytokine that plays an outstanding role in angiogenesis. Hypothesis: Angiogenesis is a necessary process in the development and progression of bladder cancer, in which VEGF could play an outstanding role. Objective: To determine the serum concentrations of VEGF in a primary bladder cancer series and in a healthy (non cancer) control group, and to verify if there is a relationship of VEGF serum concentrations at diagnosis with stage, grade, urinary cytology, number of tumours at the first transurethral resection (TUR), disease - free survival and mortality in the first three years of follow up. Material and methods: This study comprised 52 patients with bladder cancer and 26 healthy controls. Serum concentrations of VEGF were assessed by the Quantikine quantitative sandwich enzyme human vascular endothelial growth factor immunoassay kit (R & D Systems, Abington, United Kingdom) according to manufacturer instructions. Results: Mean serum concentrations of VEGF in the study (bladder cancer) group where significantly higher than in controls. There were no significantly relationships of serum concentrations of VEGF with tumour stage, grade, number of tumours at the first TUR, number of relapses, urinary cytology, disease free survival or mortality. Conclusions: Patients with bladder cancer show higher serum concentrations of VEGF than healthy controls. There was no significant relationship of serum concentrations of VEGF with recognized prognostic factors of bladder cancer. The serum concentrations of VEGF do not provide prognostic information in bladder cancer

Identifikation frei zirkulierender Tumor- DNA durch den Nachweis tumorspezifischer Mikrosatelliten-Alterationen im Serum

Für das Urothelkarzinom der Harnblase gibt es derzeit keine serologischen Marker und keine suffizienten nicht-invasiven Untersuchungsmethoden für eine Karzinomdiagnose anhand von Urinproben. In der vorliegenden Arbeit wurde mit der Methode der Mikrosatellitenanalyse (MSA) eine genetische Charakterisierung beim Urothelkarzinom der Harnblase durchgeführt, um Alterationen in der Serum-DNA und Urin-Sediment bei an einem Urothelkarzinom der Blase erkrankten Patienten nachzuweisen. Insgesamt wurden von 2001 bis 2003 frische Tumor-, Blut-, Serum und Urin-Sedimentproben von 117 im Universitätsklinikum Marburg an einem Urothelkarzinom der Blase operierten Patienten prospektiv asserviert. Mittels der Phenol-Chloroform Methode wurde die DNA aus Tumor und Lymphozyten des Blutes isoliert. Frei zirkulierende Serum- und Urin-Sediment DNA wurde mit dem Untersuchungs-Kit (Mini-Kit, Qiagen) isoliert. Die MSA wurde mit insgesamt 10 polymorphen Markern für die chromosomalen Regionen 5q, 8p, 9p, 9q 13q, 14q, 17p und 20q angewendet, um tumorspezifische Alterationen der Serum- und Urin-Sediment DNA zu identifizieren. Nach Amplifikation mittels PCR wurde allelic imbalance und loss of heterozygosity mit dem automatischen Laser Sequenzer (ALFexpress II, Amersham-Pharmacia Biotech) detektiert. 20 gesunde Kontrollen wurden mit denselben Markern untersucht. Es konnten Serum-DNA Alterationen in 77,7% (87/112) identifiziert werden. Unter Anwendung von denselben 10 Mikrosatellitenmarkern konnten tumorspezifische Urin-DNA Alterationen in 85% nachgewiesen und somit eine Tumordiagnose gestellt werden (64/75). Vier gesunde Kontrollen zeigten Serum-DNA Artefakte. Dies bedeutet eine Spezifität von 80%. Die höchste Frequenz von Serum-DNA Alterationen wurde für die chromosomale Region 9p mit 35% gefunden. Die anderen Chromosomen zeigten Serum-DNA Alterationen in 16 bis 26%. Bei den Urin-Proben zeigte die Region 9q mit 37% die häufigsten Alterationen. Die Identifikation von Serum-DNA Alterationen war assoziiert mit dem Tumorstadium (p = 0,008) und häufiger in schlecht differenzierten Tumoren (p = 0,005). Dies gilt nicht für die Urindiagnose (p > 0,05). Bei gut differenzierten G1-Tumoren war eine Urindiagnose in 77,8% möglich. Bei der Zytologie gelingt dies lediglich mit etwa 30%. Damit bietet sich die MSA bei dieser Tumorentität als eine hervorragende Ergänzung im Rahmen der Diagnostik an. Zusammenfassung 91 Ein wesentliches Ziel dieser Arbeit, die Reduktion der Anzahl an Tumormarkern von 17 auf nur noch 10 bei gleichen oder besseren Werten für die Sensitivität im Vergleich zu den Vorarbeiten von von Knobloch, konnte erfüllt werden