Investigação da presença do vírus do papiloma humano em células de lesões orais epiteliais proliferativas por PCR em material selecionado por microdissecção a laser

Contém ilustrações e tabelasO vírus do papiloma humano (HPV) pertence à família Papillomaviridae, e infecta o epitélio cutâneo e/ou oral em vários vertebrados. É um vírus com o genoma constituído por ácido desoxirribonucléico (DNA) e tem desenvolvido estratégias de sobrevivência que envolve desregular o ciclo celular das células do hospedeiro. Mais de 150 subtipos diferentes de HPV foram identificados, e têm sido associados a lesões malignas e, principalmente, benignas de mucosa e pele, sendo 25 detectados em lesões orais. O objetivo desse estudo é demonstrar a associação do HPV com lesões orais proliferativas (papiloma escamoso oral, condiloma acuminado, verruga vulgar e hiperplasia epitelial focal) através da identificação do DNA do HPV por PCR em ceratinócitos selecionados por microdissecção a laser em cortes parafinados. A amostra foi constituída por 31 lesões orais provenientes de 31 pacientes em estudo retrospectivo: papiloma escamoso oral (20 lesões), condiloma acuminado oral (4 lesões), verruga vulgar (3 lesões) e hiperplasia epitelial focal (4 lesões). A microdissecção foi realizada com o sistema computadorizado Leica DM 6000 B (Leica Microsystems). Procedeu-se a extração do DNA total com o micro kit QIAmp da QIAGEN e foram amplificados como controle do DNA o éxon 7 do gene TP53 e a β-actina. A seguir, foi feito PCR para HPV utilizando a técnica de nested PCR, onde foram utilizados os pares de iniciadores genéricos MY09/MY11 e GP5+/ GP6+. A técnica de PCR foi positiva para o éxon 7 do gene TP53 em 67,7% das amostras (21 de 31), e foi positiva para a β-actina em 93,5% (29 de 31). Foi detectada a presença de DNA do HPV em 25,8% das amostras (8 de 31) e nessas lesões foram encontrados os HPV tipo 6 e tipo 11 através do sequenciamento dos produtos amplificados. Concluímos que, nas condições desse estudo, a minoria (25,8%) das lesões alvo está associada ao HPV, sendo que apenas os subtipos 6 e 11 foram encontrados. Dessa forma, o HPV tipo 13 não foi detectado nas lesões de hiperplasia epitelial focal de pacientes HIV positivos.The human papillomaviruses (HPV) belong to the Papillomaviridae family and infect the cutaneous and/or oral epithelium in various vertebrates. They are deoxyribonucleic acid (DNA) viruses and have developed survival strategies that involve disrupting the cell cycle of host cells. More than 150 different subtypes of HPV have been identified and have been associated with malignant and especially benign skin and mucosa lesions, of which 25 types have been detected in oral lesions. The aim of this study is to demonstrate the association between HPV and oral proliferative lesions (oral squamous papilloma, condyloma acuminatum, verruca vulgaris and focal epithelial hyperplasia) through the identification of HPV DNA by PCR in keratinocytes selected by laser microdissection on paraffin-embedded material. The sample consisted of 31 oral lesions from 31 patients in a retrospective study: oral squamous papilloma (20 lesions), oral condyloma acuminata (4 lesions), warts (3 lesions) and focal epithelial hyperplasia (4 lesions). The microdissection was performed with the computerized Leica DM 6000 B (Leica Microsystems) microscope. DNA extraction was performed with micro QIAmp kit (QIAGEN) and exon 7 of TP53 gene and β-actin gene were used as DNA quality control. Nested PCR was used for HPV testing, in which amplification of the generic primer pair MY09/ MY11 was followed by amplification for the GP5+/ GP6+ prime pair. The PCR was positive for exon 7 of TP53 gene in 67.7% of samples (21 of 31) and was positive for β-actin in 93.5% (29 of 31) Presence of HPV DNA was observed in 25,8% (8 of 31) of the samples and in these lesions were found HPV type 6 and type 11 by sequencing of the amplified products. In our conditions and population, a minority (25.8%) of target lesions were associated with HPV, and the HPV type 6 and 11 were the only ones found. Thus, HPV type 13 was not detected in lesions of focal epithelial hyperplasia of HIV positive patients.99 f

Infecção oral pelo HPV e lesões epiteliais proliferativas associadas HPV oral infection and proliferative epithelial associated lesions

Os papilomavírus humanos (HPVs) pertencem à família Papillomaviridae e seu ciclo de vida é diretamente ligado à diferenciação das células epiteliais do hospedeiro. Possuem seis genes que se expressam precocemente e dois genes que se expressam tardiamente, sendo denominados respectivamente E (early) e L (late). O ácido desoxirribonucleico (DNA) viral dentro da célula do hospedeiro pode assumir duas formas: epissomal e integrada. O HPV tem como alvo as células basais de epitélios escamosos, em particular da área genital, onde está associado ao carcinoma da cérvice uterina. Na boca, o HPV está associado a papiloma escamoso oral, condiloma acuminado, verruga vulgar e hiperplasia epitelial focal. Entretanto, seu papel na carcinogênese oral é ainda controverso, sendo também identificado como agente etiológico de alguns carcinomas de células escamosas de cabeça e pescoço. A infecção pelo HPV pode agir sinergicamente com agentes carcinogênicos, como o tabaco e o álcool. Pelo menos 150 subtipos diferentes de HPV já foram identificados, sendo que 25 têm sido detectados em lesões orais. Considerando a relevância do tema para a melhor compreensão da infecção oral pelo HPV, o objetivo desta atualização é rever os aspectos relevantes da biologia do HPV, com ênfase na relação HPV-ceratinócitos, e a importância dos dados clínicos e histopatológicos na definição diagnóstica das lesões orais possivelmente associadas ao HPV.<br>Papillomaviruses belong to the family Papillomaviridae and their life cycle is directly linked to the differentiation of host epithelial cells. They have six genes that are expressed earlier and two genes that are expressed later in their life cycle, named respectively E (early) and L (late). Host cell viral DNA can take two forms: episomal and integrated. The human papillomavirus (HPV) targets the basal cells of squamous epithelia, particularly from the genital area, which is associated with uterine cervix carcinoma. In the oral area HPV is associated with oral squamous papilloma, condyloma acuminatum, verruca vulgaris, and focal epithelial hyperplasia. However, its role in oral carcinogenesis is still controversial. Moreover, it has identified as an etiological agent of some head and neck squamous cell carcinomas. HPV infection may act synergistically with carcinogens such as tobacco and alcohol. At least 150 different subtypes of HPV have been identified, of which 25 types have been detected in oral lesions. Considering the relevance of the topic for better understanding of HPV oral infection, the objective of this update is to review relevant aspects of HPV biology, with emphasis on HPV-keratinocytes relationship and the importance of clinical and histopathological aspects in the diagnosis of oral lesions possibly associated with HPV