Manual de Métodos Inmunológicos

folleto--Universidad de Costa Rica, Instituto Clodomiro Picado 2020El presente Manual tiene como objetivo proporcionar al lector la información esencial para comprender, ejecutar e interpretar los principales tipos de técnicas inmunológicas básicas en el laboratorio. Las aplicaciones clínicas de estos métodos se mencionan ocasionalmente, solo a modo de ilustración, dado que son objeto de otra recopilación. En esta obra se presentan los métodos inmunológicos de laboratorio en una forma muy general, teniendo en cuenta que los mismos son aplicables a numerosos sistemas de interacción antígeno-anticuerpo, ya sea para el trabajo hospitalario, o de otra índole. Siguiendo el formato de las versiones anteriores de este Manual, se presenta un breve fundamento teórico de cada técnica, seguido de una descripción de los procedimientos, reactivos, principales cuidados, lectura, e interpretación de los resultados. Las referencias bibliográficas incluyen, en la medida de lo posible, los trabajos clásicos que originaron cada método, y se complementan ocasionalmente con algunos ejemplos de experiencia propia, o de colegas cercanos. Se espera que esta modesta obra didáctica, cuya primera edición se imprimió en 1989, continúe siendo de utilidad para estudiantes universitarios en formación profesional, y pueda eventualmente servir también de consulta posterior. Las valiosas observaciones y ayuda de los colegas del Instituto Clodomiro Picado constituyeron un elemento muy importante en la elaboración de este Manual, a todos gracias.Universidad de Costa RicaUCR::Vicerrectoría de Investigación::Unidades de Investigación::Ciencias de la Salud::Instituto Clodomiro Picado (ICP

Investigación científica y tecnológica en el Instituto Clodomiro Picado: Una perspectiva bibliométrica de cuatro décadas (1970-2010)

El presente trabajo presenta una visión panorámica de la evolución de la actividad investigativa del Instituto Clodomiro Picado (ICP; Universidad de Costa Rica), reflejada a través de sus publicaciones científicas a lo largo de 40 años (1970-2010) desde su fundación. Se recopiló y analizó la producción total de publicaciones en revistas (442 artículos) y algunas características, tales como sus áreas temáticas, cifras de citación en la Web of Science, proporción de las colaboraciones con autores en el extranjero, países con los cuales se ha colaborado, y la utilización de revistas locales o internacionales. Los datos indican que las actividades de investigación en el ICP, desde la perspectiva de la producción de publicaciones en revistas, presentan un considerable desarrollo, consolidación y grado de visibilidad. Estos análisis permiten concluir que es factible producir ciencia en un contexto socioeconómico como el de Costa Rica, donde los recursos de apoyo a la investigación son escasos e inconstantes. Se discuten algunos de los factores que podrían haber incidido para favorecer tal crecimiento cuantitativo y cualitativo. El estudio del ICP como un caso particular podría proveer información de utilidad más general para formular estrategias de desarrollo en otros grupos y países con características similares.Universidad de Costa Rica, Instituto de Investigaciones Clodomiro PicadoUCR::Vicerrectoría de Investigación::Unidades de Investigación::Ciencias de la Salud::Instituto Clodomiro Picado (ICP

Identification of linear B-cell epitopes on myotoxin-II, a Lys49 phospholipase A2 homologue from Bothrops asper snake venom

Knowledge on toxin immunogenicity at the molecular level can provide valuable information for the improvement of antivenoms, as well as for understanding toxin structure– function relationships. The aims of this study are two-fold: first, to identify the linear B-cell epitopes of myotoxin II from Bothrops asper snake venom, a Lys49 phospholipase A2 homologue; and second, to use antibodies specifically directed against an epitope having functional relevance in its toxicity, to probe the dimeric assembly mode of this protein in solution. Linear B-cell epitopes were identified using a library of overlapping synthetic peptides spanning its complete sequence. Epitopes recognized by a rabbit antiserum to purified myotoxin II, and by three batches of a polyvalent (Crotalidae) therapeutic antivenom (prepared in horses immunized with a mixture of B. asper, Crotalus simus, and Lachesis stenophrys venoms) were mapped using an enzyme-immunoassay based on the capture of biotinylated peptides by immobilized streptavidin. Some of the epitopes identified were shared between the two species, whereas others were unique. Differences in epitope recognition were observed not only between the two species, but also within the three batches of equine antivenom. Epitope V, located at the C-terminal region of this protein, is known to be relevant for toxicity and neutralization. Affinity-purified rabbit antibodies specific for this site were able to immunoprecipitate myotoxin II, suggesting that the two copies of epitope V are simultaneously available to antibody binding, which would be compatible with the mode of dimerization known as “conventional” dimer.International Center of Genetic Engineering and Biotechnology/[CRP Program COS-08-03]/ICGEB/IndiaUCR::Vicerrectoría de Investigación::Unidades de Investigación::Ciencias de la Salud::Instituto Clodomiro Picado (ICP

Peligros de los falsos positivos en la determinación de gonadotropina coriónica

Los expertos del Servicio de Referencia para hCG (hormona gonadotropina coriónica humana) de los Estados Unidos de América, han llamado la atención de los laboratorios que realizan la determinación de esta hormona, para que redoblen sus cuidados (Cole y Butler, 2001). A través de una serie de publicaciones recientes, se han señalado los riesgos que implica el detectar -erróneamente- hCG sérica en mujeres en las que no se observa embarazo intrauterino ni ectópico.UCR::Vicerrectoría de Investigación::Unidades de Investigación::Ciencias de la Salud::Instituto Clodomiro Picado (ICP

Tissue Damage and Inflammation Induced by Snake Venoms

Tesis Doctoral, Universidad de Goteborg, Suecia, 1994. También disponible en: http://brunolomonte.comli.com/1994_PhD_Thesis_alone.pdfSome characteristics of the local tissue damage and inflammatory reactions induced by snake venoms were analyzed in a mouse model. Tissue damage was studied by intravital, light, and electron microscopic techniques, and by the use of biochemical markers. Detailed information on the early development and dynamics of local tissue damage was obtained by intravital microscopy. Main alterations were microvascular plasma leakage, hemorrhage, blood flow disturbances, thrombosis, and myonecrosis. A new technique for the quantification of myonecrosis in vivo was established, based on the principle of MTT reduction. The method was tested for its usefulness in the evaluation of antibody-mediated neutralization of myotoxicity. The inflammatory response to venom included early lymphopenia and neutrophilia, thrombocytopenia, with edema and leukocyte extravasation at the site of injection. A rapid plasma peak of IL-6 was induced by venoms, as well as by purified muscle-damaging and hemorrhagic toxins, in response to cellular damage. The effects of a purified hemorrhagic toxin on cultured endothelial cells were studied. The toxin was not directly lytic to these cells even at high concentrations, and caused moderate cell detachment due to its metalloproteinase activity, suggesting that the endothelial cell damage in vivo occurs via an indirect mechanism, probably initiated by proteolytic degradation of the basal lamina of microvessels. Myotoxin II from Bothrops asper venom was shown to lyse a variety of cell types in culture, including myoblasts and endothelial cells. This property was exploited in a cytotoxicity assay for the evaluation of myotoxin neutralization. Heparin was found to be a potent inhibitor of its cytolytic activity, by forming complexes, held at least in part by electrostatic interactions. The ability of heparin to neutralize several related non neurotoxic phospholipase A2 myotoxins present in crotalid venoms, was not dependent on its anticoagulant effect. Thus, nonanticoagulant heparin has a potential as a therapeutic aid, which should be further evaluated. The structural characteristic of the binding interaction of heparin with myotoxin II were analyzed, indicating that a hexasaccharide is the minimal heparin chain size required, and that both N-sulfate and O-sulfate groups participate in the binding.UCR::Vicerrectoría de Investigación::Unidades de Investigación::Ciencias de la Salud::Instituto Clodomiro Picado (ICP

Técnicas de Laboratorio en Inmunología Clínica

folleto--Universidad de Costa Rica. 2009El presente manual pretende proporcionar al estudiante de la carrera de Microbiología y Química Clínica la información esencial para comprender, ejecutar e interpretar un conjunto de técnicas inmunológicas de aplicación clínica, como parte de su formación en el curso MB-4003, Laboratorio de Inmunología Clínica. Se asume que el estudiante posee de antemano una formación básica en Inmunología General, tanto teórica (curso MB-3510) como de laboratorio (curso MB-3511). Siguiendo la tradición de versiones anteriores, los capítulos presentan un breve introducción que resume los fundamentos teóricos de cada técnica, seguida de una descripción general de los procedimientos, algunas notas sobre los principales cuidados e interpretación, y una bibliografía sucinta. Los reactivos utilizados y su preparación se describen todos juntos al final, en el Apéndice. Agradezco muy especialmente a los colegas y estudiantes que han hecho valiosas observaciones constructivas a las versiones anteriores de este manual. La presente edición regresa al formato inicial de copias sencillas, luego de la experiencia de unos cinco años con una versión hecha en imprenta, con el fin de facilitar la realización de cambios, actualizaciones, y mejoras. Espero que este modesto trabajo didáctico sea de utilidad a los estudiantes en su formación, así como en su futuro ejercicio profesional. Tercera edición.Universidad de Costa RicaUCR::Vicerrectoría de Investigación::Unidades de Investigación::Ciencias de la Salud::Instituto Clodomiro Picado (ICP

Snake venoms: from research to treatment

El presente trabajo ofrece una breve visión de cómo se ha enfrentado el problema del ofidismo en Costa Rica, y en especial, de cómo la investigación científica y tecnológica ha contribuido a tal fin. Se resumen los orígenes de la lucha antiofídica en el país y de la creación del Instituto Clodomiro Picado en la Universidad de Costa Rica, en 1970. Se describen las primeras etapas de su labor, y la evolución de distintas líneas de investigación sobre serpientes, venenos y antivenenos, que por espacio de cuatro décadas han contribuido a que en el país y en la región centroamericana, existan recursos terapéuticos adecuados y suficientes para enfrentar el ofidismo.The present work offers a brief overview on how the problem of ophidism has been confronted in Costa Rica, and especially, on how scientific and technological research has contributed to this goal. The origins of the antiophidic struggle in the country and the creation of the Instituto Clodomiro Picado, at the University of Costa Rica in 1970, are briefly summarized. The first stages of its work are described, as well as the evolution of different research areas on snakes, venoms and antivenoms; which have contributed during four decades to the existence of adequate and sufficient therapeutic resources to tackle ophidism in Costa Rica and in the Central American region.Universidad de Costa RicaUCR::Vicerrectoría de Investigación::Unidades de Investigación::Ciencias de la Salud::Instituto Clodomiro Picado (ICP

Las citokinas, elementos centrales para la comprensión y manipulación terapéutica del sistema inmune (Parte 1)

Dentro del explosivo desarrollo en que se encuentra la inmunología básica, el campo de las citokinas y sus funciones dentro (y fuera) del sistema inmune, es uno de los que crece más vertiginosamente. En la primera parte de este resumen se persigue revisar algunos conceptos generales sobre el tema de las citokinas.UCR::Vicerrectoría de Investigación::Unidades de Investigación::Ciencias de la Salud::Instituto Clodomiro Picado (ICP

Determinación cuantitativa de la actividad lítica del complemento sérico (CH50) en adultos costarricenses

En el presente trabajo se estandariza un método simple y cuantitativo para la determinación de la actividad hemolítica (CH5O) del complemento sérico. Con este método, se evalúa los niveles de complemento en una muestra de la población adulta costarricense, y a la vez, se introduce un método de control de calidad en dicha técnica. Los valores obtenidos en los adultos sanos estudiados (n =53) se distribuyeron en un ámbito entre 71 y 128 U/mI, con un promedio de 93 U/ml y una desviación estándar de 14 U/ml.Universidad de Costa Rica//UCR/Costa RicaUCR::Vicerrectoría de Investigación::Unidades de Investigación::Ciencias de la Salud::Instituto Clodomiro Picado (ICP

Effects of Bothrops asper Snake Venom on Lymphatic Vessels: Insights into a Hidden Aspect of Envenomation

Envenomations by snakes of the family Viperidae (pit vipers) induce severe pathological alterations at the site of venom injection, such as edema, necrosis, hemorrhage, and blistering, which may lead to permanent tissue damage and disability. Edema is a prominent and common manifestation in these envenomations. The effect of viperid snake venoms in lymphatic vessels has not been previously investigated. This study analyzed the effect of the venom of Bothrops asper, the most important venomous snake in Central America, on the collecting lymphatic vessels of the mouse mesentery. The venom induced a rapid reduction in the lumen of these lymphatics, associated with a halting in the flow of lymph. These effects were reproduced by a myotoxic phospholipase A2 homologue isolated from this venom, but not by a hemorrhagic metalloproteinase nor by a coagulant serine proteinase. B. asper venom, and the purified myotoxin, were cytotoxic for smooth muscle cells in culture, thus suggesting that the alterations observed in lymphatics are due to the effect on smooth muscle cells of the lymphatic vessel wall. These results demonstrate a direct effect of B. asper venom on lymphatics, which is likely to contribute to the prominent edema characteristic of these envenomations