Immunogenetics of MHC and KIR in the Leprosy

Several genetic polymorphisms in immune response genes have been associated to leprosy. This fact converges on the main hypothesis that genetic factors are involved in the disease susceptibility in two distinct steps: leprosy per se and their clinical forms. These genes play an important role in the recognition process, in the activation of the main metabolic pathway of the immune response and in the evolution of the disease. The scope of this project was to highlight the role of the immune response genes in the context of leprosy, emphasizing the participation of some of them in the signaling and targeting processes in response to bacillus infection and on disease evolution, such as HLA, KIR and MIC genes. Some environmental and genetic factors are important when the exposure to the bacillus occurs, leading to cure or not. Factors that favor a cellular or humoral immune response may influence the clinical manifestations after the infection inducting to one of extreme poles. Furthermore, some genetic factors were associated to the type of reaction that some individuals present during the disease development. Thus, it is very important to highlight the participation of some genetic factors in the immunopathogenesis of leprosy

Prevalence of anti-SARS-CoV-2 antibodies in outpatients of a large public university hospital in Sao Paulo, Brazil

Coronavirus disease 19 (COVID-19) is caused by SARS-Cov-2 and the manifestations of this infection range from an absence of symptoms all the way up to severe disease leading to death. To estimate the prevalence of past infection in a population, the most readily available method is the detection of antibodies against the virus. This study has investigated the prevalence of anti-SARS-CoV-2 antibodies in outpatients of the Hospital das Clinicas, in Sao Paulo city (Brazil), which is a large university hospital belonging to the public health system that cares for patients with complex diseases who need tertiary or quaternary medical care. Our serological inquiry was carried out for 6 weeks, with once-a-week blood sampling and included 439 patients from several outpatient services. Overall, 61 patients tested positive for anti-SARS-CoV-2 IgG (13.9%); 56.1 % of the patients live in Sao Paulo city, with the remaining living in other towns of the metropolitan area; 32.8% of the patients testing positive for IgG antibodies to SARS-CoV-2 were asymptomatic, 55.7% developed mild or moderate disease and 11.5% had to be hospitalized. The prevalence of SARS-CoV-2 positive serology was lower among patients who had received the seasonal influenza vaccine compared to the ones who did not. These findings may indicate that those individuals care more about health issues, and/or that they have a better access to health care and/or a better quality of health care service. The large proportion of patients who were unaware of having had contact with SARS-CoV-2 deserves attention, reflecting the scarcity of tests performed in the population

SARS-CoV-2 recombinant proteins stimulate distinct cellular and humoral immune response profiles in samples from COVID-19 convalescent patients

OBJECTIVES: In this preliminary study we investigated cellular and humoral immune responses to severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) antigens in blood samples from 14 recovered coronavirus disease 2019 (COVID-19) patients and compared them to those in samples from 12 uninfected/unvaccinated volunteers. METHODS: Cellular immunity was assessed by intracellular detection of IFN-γ in CD3+ T lymphocytes after stimulation with SARS-CoV-2 spike (S1), nucleocapsid (NC), or receptor-binding domain (RBD) recombinant proteins or overlapping peptide pools covering the sequence of SARS-CoV-2 spike, membrane and nucleocapsid regions. The humoral response was examined by ELISAs and/or chemiluminescence assays for the presence of serum IgG antibodies directed to SARS-CoV-2 proteins. RESULTS: We observed differences between humoral and cellular immune profiles in response to stimulation with the same proteins. Assays of IgG antibodies directed to SARS-CoV-2 NC, RBD and S1/S2 recombinant proteins were able to differentiate convalescent from uninfected/unvaccinated groups. Cellular immune responses to SARS-CoV-2 protein stimuli did not exhibit a specific response, as T cells from both individuals with no history of contact with SARS-CoV-2 and from recovered donors were able to produce IFN-γ. CONCLUSIONS: Determination of the cellular immune response to stimulation with a pool of SARS-CoV-2 peptides but not with SARS-CoV-2 proteins is able to distinguish convalescent individuals from unexposed individuals. Regarding the humoral immune response, the screening for serum IgG antibodies directed to SARS-CoV-2 proteins has been shown to be specific for the response of recovered individuals

Nanoparticles as a delivery strategy for HIV antigens to pulse monocyte derived dendritic cells: potential application in anti HIV immunotherapy

A imunoterapia baseada em células dendríticas (DC) constitui uma ferramenta potencial para aperfeiçoar o tratamento da infecção pelo HIV, cujo intuito é estimular e direcionar uma resposta imune específica contra a infecção viral. O protocolo mais utilizado para a obtenção de DCs envolve a cultura de monócitos na presença de IL-4 e GM-CSF e posterior ativação das DCs imaturas com citocinas pró-inflamatórias. As aDC1, diferentemente das DCs derivadas de monócitos convencionais, exibem uma capacidade superior de induzir uma resposta de linfócito T CD8+, capaz de eliminar células infectadas pelo HIV-1. Além da importância da qualidade da DC, agentes carreadores têm ganhado notoriedade por melhorarem a entrega do antígeno para célula ou tecido de interesse. A nanopartícula de quitosana (QS) tem sido utilizada por ter origem de um polímero natural, não-tóxico, biocompatível e biodegradável, enquanto a nanopartícula de sílica tem sido amplamente aplicada no contexto de delivery de fármacos e antígenos por conta de sua estabilidade e possibilidade de diferentes formulações. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do uso de nanopartículas para o delivery de antígenos de HIV em células dendríticas do tipo aDC1. Nos ensaios iniciais, a avaliação da viabilidade das células de linhagem RAW 264.7, estimuladas com nanopartículas de QS e sílica, foi avaliada por MTT. Entretanto, desafios como a instabilidade e a reprodutibilidade na produção das nanopartículas de QS foram decisivos para encerrarmos os ensaios com a QS. Dessa forma, optamos por dar continuidade somente com as nanopartículas de sílica. A proporção calculada para conjugação de nanopartículas de sílica aos peptídeos de HIV foi de 10:1. A avaliação da viabilidade e análise fenotípica de aDC1, pulsadas com nanopartículas de sílica, foi realizada por citometria de fluxo, assim como a avaliação dos diferentes tempos de internalização das partículas pelas células. Diferentemente, as nanopartículas de sílica, na concentração de 10 g/ml, conjugadas a 1 g/ml do peptídeo Gag.27 do HIV, parecem não interferir na viabilidade das aDC1, quando comparadas às nanopartículas sem conjugação à antígenos. Em relação à avaliação do perfil fenotípico das aDC1, na qual foram utilizados os marcadores de ativação e maturação CD40, CCR7, CD80, CD83 e HLA-DR, nenhuma diferença significativa foi observada entre as células que receberam as nanopartículas dos controles. Um achado inesperado foi o aumento na expressão da molécula CD14 nas aDC1 pulsadas com as nanopartículas de sílica, principalmente quando não associadas aos peptídeos, fato que pode estar relacionado à apoptose celular. Por fim, o tempo de 8 horas parece ser o suficiente para a internalização das nanopartículas de sílica conjugadas aos peptídeos de HIV por aDC1, achado demonstrado por citometria e microscopia de fluorescência. Em suma, reiteramos o potencial uso das nanopartículas de sílica conjugadas a peptídeos de HIV para culturas de células com aDC1Immunotherapy based on dendritic cells (DC) is a potential tool for improving the treatment of HIV infection, whose aim is to stimulate a direct and specific immune response against viral infection. The most commonly used protocol for obtaining DCs involve s culturing monocytes in the presence of IL 4 and GM CSF and subsequent activation of immature DCs with pro inflammatory cytokines. aDC1, unlike conventional monocyte derived DCs, exhibits a superior ability to induce a CD8+ T lymphocyte response capable o f eliminating HIV 1 infected cells. In addition to the importance of DC quality, carrier agents have gained notoriety for improving antigen delivery to the cells or tissues of interest. Chitosan nanoparticles (QS) have been used because they are from a nat ural source, non toxic, biocompatible, and biodegradable polymer, while silica nanoparticles have been widely applied in the context of drug and antigen delivery owing to their stability and the possibility of different formulations. Therefore, the objecti ve of this study was to evaluate the effect of nanoparticles on delivery of HIV antigens to aDC1 type dendritic cells. In the initial tests, the viability of RAW 264.7 cells, stimulated with QS and silica nanoparticles was evaluated by MTT. However, challe nges, such as instability and reproducibility in the production of QS nanoparticles, were decisive in ending QS trials. Therefore, we chose to continue using only silica nanoparticles. The ratio calculated for the conjugation of silica nanoparticles to HIV peptides was 10:1. Evaluation of the viability and phenotypic analysis of aDC1 pulsed with silica nanoparticles was carried out by flow cytometry, as well as evaluation of the different internalization times of the particles by the cells. In contrast, sil ica nanoparticles, at a concentration of 10 µg/ml, conjugated to 1 µg/ml of the HIV Gag.27 peptide, did not seem to interfere with the viability of aDC1, when compared to nanoparticles without conjugation to antigens. Regarding the evaluation of the phenot ypic profile of aDC1, in which the activation and maturation markers CD40, CCR7, CD80, CD83, and HLA DR were used, no significant difference was observed between the cells that received nanoparticles and the controls. An unexpected finding was the increase in the expression of the CD14 molecule in aDC1 pulsed with silica nanoparticles, especially when not associated with peptides, which may be related to cell apoptosis. Finally, 8 h seemed to be sufficient for the internalization of silica nanoparticles con jugated to HIV peptides by aDC1, as demonstrated by cytometry and fluorescence microscopy. In summary, we reiterated the potential use of silica nanoparticles conjugated to HIV peptides in aDC1 cell cultures

Vitamin D receptor gene polymorphisms are associated with leprosy in southern Brazil

Vitamin D, together with its nuclear receptor (VDR), plays an important role in modulating the immune response, decreasing the inflammatory process. Some polymorphisms of the VDR gene, such as BsmI (G>A rs1544410), ApaI (G>T rs7975232), and TaqI (T>C rs731236) could affect its stability and mRNA transcription activity, while FokI T>C (rs2228570) gives a truncated protein with three fewer amino acids and more efficiency in binding vitamin D. This study evaluated these four polymorphisms in the immunopathogenesis of leprosy in 404 patients and 432 control individuals without chronic or infectious disease in southern Brazil. When analyzing differences in the allele and genotype frequency of polymorphisms between patients (leprosy per se, multibacillary, and paucibacillary clinical forms) and controls, we found no statistically significant association. Regarding haplotype analysis, the bAt haplotype was associated with protection from leprosy per se (P = 0.004, OR = 0.34, CI = 0.16-0.71) and from the multibacillary clinical form (P = 0.005, OR = 0.30, CI = 0.13-0.70). In individuals aged 40 or more years, this haplotype has also showed protection against leprosy per se and multibacillary (OR = 0.26, CI = 0.09-0.76; OR = 0.26, CI = 0.07-0.78, respectively), while the BAt haplotype was a risk factor for leprosy per se in the same age group (OR = 1.34, CI = 1.04-1.73). In conclusion, despite having found no associations between the VDR gene polymorphisms with the development of leprosy, the haplotypes formed by the BsmI, ApaI, and TaqI polymorphisms were associated with leprosy per se and the multibacillary clinical form10CONSELHO NACIONAL DE DESENVOLVIMENTO CIENTÍFICO E TECNOLÓGICO - CNPQCOORDENAÇÃO DE APERFEIÇOAMENTO DE PESSOAL DE NÍVEL SUPERIOR - CAPESFUNDAÇÃO ARAUCÁRIA DE APOIO AO DESENVOLVIMENTO CIENTÍFICO E TECNOLÓGICO DO ESTADO DO PARANÁ - FAsem informaçãosem informação1589/2017-CSDUE

COMPARAÇÃO DOS NÍVEIS DE ANTICORPOS NEUTRALIZANTES ESPECÍFICOS PARA SARS-COV-2 ENTRE PESSOAS VIVENDO COM HIV E CONTROLES SADIOS

Introdução: O Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV) infecta principalmente linfócitos T CD4+, e pode levar à uma maior dificuldade na construção da imunidade específica contra o SARS-CoV-2. Os anticorpos contra SARS-CoV-2 são essenciais para uma resposta neutralizante adequada frente à infecção pelo vírus. O objetivo foi comparar os níveis de anticorpos neutralizantes de PVHA com indivíduos sadios. Métodos: As amostras foram coletadas da coorte acompanhada no ambulatório de HIV ADEE3002 da Divisão de Dermatologia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo. Os critérios de inclusão para a escolha das amostras, foram indivíduos não vacinados, sendo amostras dentro do intervalo de dezembro de 2019 a abril de 2021, positivas para IgG específico contra SARS-CoV-2, rastreadas utilizando um ELISA interno padronizado e confirmadas por imunoensaio de quimioluminescência (CLIA). A dosagem dos anticorpos neutralizantes foi realizada através do kit SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody ELISA(Invitrogen). A análise dos dados foi feita através do software GraphPad Prism®. A significância estatística foi estabelecida com p < 0.05. Resultados: Quarenta amostras de PVHA foram testadas para produção de anticorpos neutralizantes, onde 34 foram positivas para anticorpos neutralizantes, e seis negativas. Desta coorte, 30% eram mulheres e 70% eram homens, com média de idade de 57 anos. Já no grupo sadio foram testadas 24 amostras para anticorpos neutralizantes. A coorte foi composta de 50% homens e 50% de mulheres, com média de idade de 49 anos. A porcentagem de anticorpos neutralizantes do grupo PVHA se mostrou significativamente menor quando comparada com o grupo controle sadio (p = 0.009). Apesar dos anticorpos neutralizantes contra SARS-CoV-2 serem essenciais para uma resposta neutralizante adequada às PVHA mesmo apresentando diminuição importante na produção destas moléculas, não apresentaram doença mais grave

IMUNOFENOTIPAGEM DE LINFÓCITOS B EM RESPONDEDORES E NÃO RESPONDEDORES ANTICÓRPICOS: ESTUDO EM COORTE DE PROFISSIONAIS DA SAÚDE VACINADOS COM CORONAVAC

Introdução: A COVID-19 gerou impactos constantes aos profissionais da saúde que estavam na linha de frente de combate, e deste modo foram considerados prioridade para a vacinação no Brasil. A vacina induz uma proteção imune baseada primordialmente na produção de anticorpos, que comumente bloqueiam a interação do vírus com seu receptor celular ou impedem as alterações conformacionais necessárias para a fusão do vírus com a membrana celular, impedindo ou minimizando a infecção. Objetivo: Estudar a resposta à vacina CoronaVac em profissionais da saúde, avaliando as subpopulações de linfócitos B e sua relação com a resposta anticórpica. Métodos: Foi realizada coleta de sangue para separação das células mononucleares do sangue periférico (PMBC) por gradiente de densidade Ficoll-Hypaque. Estas células foram transferidas para placa de cultura na concentração de 2 × 105 células/poço, por 18 horas, em duplicata nas seguintes condições: sem estímulo, estimuladas com mitógenos, estimuladas com pool de peptídeos de SARS-CoV-2. Após estímulo as células foram transferidas para tubos de citometria, e marcadas para avaliação das subpopulações de linfócitos B com os anticorpos monoclonais CD3, CD19, CD24, CD21, IgD, IgM, CD27, CD38. As células foram adquiridas em citômetro de fluxo LSR Fortessa. Resultados: Encontramos maior frequência de linfócitos B naive e plasmablastos no grupo de respondedores (R), enquanto que os não respondedores (NR) apresentaram maior frequência de linfócitos B switched e double negative. Se agregados os dois grupos (R e NR) visualizamos correlação positiva entre a frequência de plasmablastos e os níveis de anticorpos IgG, e também correlação negativa entre a frequência de linfócitos switched e anticorpos IgG. Conclusão: Maior frequência de células naive pode estar relacionada à maior transformação celular durante ativação, estimulando a formação de plasmablastos, o que justificaria a correlação de ambas as subpopulações com maiores níveis de anticorpos IgG vacinais

RESPOSTA CELULAR DE RESPONDEDORES E NÃO RESPONDEDORES ANTICÓRPICOS: ESTUDO EM PROFISSIONAIS DA SAÚDE VACINADOS COM CORONAVAC

Introdução: Profissionais de saúde foram os indivíduos que sofreram constantemente os impactos da COVID-19 sendo considerados prioridade para a vacinação no Brasil. A proteção induzida pelas vacinas disponíveis contra o vírus baseia-se principalmente na produção de anticorpos. Esses anticorpos geralmente bloqueiam a interação do vírus com seu receptor celular ou impedem as alterações conformacionais necessárias para a fusão do vírus com a membrana celular. Objetivo: Estudar a resposta à vacina CoronaVac em profissionais da saúde, avaliando a resposta anticórpica, e a resposta de células T. Métodos: Foi realizada coleta de sangue para separação das células mononucleares do sangue periférico (PMBC) por gradiente de densidade Ficoll-Hypaque. Estas células foram transferidas para placa de cultura na concentração de 2 × 105 células/poço, por 18 horas, em duplicata nas seguintes condições: sem estímulo, estimuladas com mitógenos, estimuladas com pool de peptídeos de SARS-CoV-2, nos poços para avaliação de citocinas foi acrescido Brefeldina A. Após estímulo as células foram transferidas para tubos de citometria, e marcadas para: avaliação de resposta celular com CD3, CD4, CD8, Interferon-γ (INF-γ) e CD38. As células foram adquiridas em citômetro de fluxo LSR Fortessa. Resultados: Apenas no grupo R, os linfócitos TCD8 mostraram maior expressão de CD38 quando estimulados com o pool de peptídeos. A frequência de produtores de INF- γ e não produtores de INF- γ foi semelhante (75.9 % e 77.1%). No grupo NR a produção de INF- γ ocorreu em maior parte concomitantemente por linfócitos TCD4 e TCD8, diferente do grupo R que demonstrou produção semelhante seja por apenas um ou dois tipos de linfócitos T. Conclusão: A produção ou não de anticorpos não parece ter relação direta com a secreção de INF-γ ou expressão de CD38 por linfócitos T. Não houve diferença significativa na produção de INF- γ entre os grupos R e NR