Физико-химические свойства Δ3−12 цистеин-обедненного цитохрома P450 3A4 с аминокислотной заменой S291C

Cytochrome P450 3A4 (3A4) is highly expressed in the human liver cells and plays a decisive role in the metabolism of xenobiotics, including more than 50 % of medical products. The activity of this enzyme can be regulated at the expression level of genes, as well as at the conformation level of the structure of the protein itself, due to changes in the molecular environment, including due to the interaction with high-molecular effectors. The understanding of the structure changes and the 3A4 dynamics in response to the environmental changes is necessary to predict the changes in the level of its activity that to a considerable extent regulates the body’s homeostasis. To perform in vitro experiments on the structure, dynamics, and protein-ligand/protein interactions of the enzymes by the modern spectral methods, the approach is used, in which the target protein is selectively added with cysteine residues in the given polypeptide chain loci by the protein engineering methods for subsequent labeling with specialized molecular labels. To do this, the human mutant form of membrane-bound (full length) recombinant cytochrome P450 3A4 C58A/C64M/C98A/C239T/C377A/C468S/S291C was obtained. According to the circular dichroism spectroscopy data we established that the introduced mutations do not cause significant changes in the secondary structure of the obtained form 3A4, which shows the preservation of the folding of the peptide chain. The spectral photometric measurements were made to comparatively analyze the changes in the affinity to the ligands of the active center. Moreover, we showed that the testosterone hydroxylase activity in the in vitro reconstructed system for a given mutation form of 3A4 increases many times with respect to the wild form of the enzyme. Цитохром P450 3A4 (3A4) экспрессируется в клетках печени человека и играет ключевую роль в метаболизме ксенобиотиков, в том числе и более 50 % лекарственных препаратов. Регуляция активности данного фермента может происходить на уровне экспрессии генов, а также на уровне конформационного состояния структуры самого белка, за счет изменения молекулярного окружения, в том числе за счет взаимодействия с высокомолекулярными эффекторами. Понимание изменения структуры и динамики 3A4 в ответ на изменение условий среды необходимо для предсказания изменения уровня его активности, который в значительной степени обуславливает гомеостаз организма. Для проведения in vitro экспериментов по исследованию структуры, динамики и белоклигандных/белковых взаимодействий ферментов современными спектральными методами используется подход, в котором в целевой белок селективно вводятся методами белковой инженерии цистеиновые остатки в заданные локусы полипептидной цепи для последующего мечения специализированными молекулярными метками. Для этих целей в данной работе была получена мутантная форма мембрансвязанного (полноразмерного) рекомбинантного цитохрома P450 3A4 человека C58A/C64M/C98A/C239T/C377A/C468S/S291C. По данным спектроскопии кругового дихроизма нами было установлено, что введенные мутации не вызывают значимых изменений во вторичной структуре полученной формы 3A4, что свидетельствует о сохранении свернутости полипептидной цепи. Проведены спектрофотометрические измерения для сравнительного анализа изменения сродства к лигандам активного центра. Более того, нами было показано, что тестостерон гидроксилирующая активность в in vitro реконструированной системе для данной мутантной формы 3A4 многократно увеличивается относительно дикой формы фермента

Digital Storytelling to Develop Students’ English Speaking Skills in Form 3

Digitālais stāstījums apvieno tradicionālo mutvārdu stāstīšanas mākslu ar tehnoloģijām, kas ir pieejamas 21. gadsimta klasē. Spēja efektīvi komunicēt ir viena no vissvarīgākajām dzīves iemaņām. Viena no efektīvākajām mācību metodēm ir iztēles un vizualizācijas izmantošana jaunas informācijas nodošanai. Tāpēc mūsdienu “digitālās” pasaules rīki ir tikai paplašinājuši metodes iespējas. Diplomdarba autore veica gadījuma izpēti Rīgas vidusskolā no 2019. gada septembra līdz novembrim. 10 skolēni piedalījās pētījumā un veidoja animētus video ar balss ierakstīšanu runāšanas prasmju attīstīšanai. Tika izmantotas šādas datu vākšanas metodes: runāšanas tests, vērtēšanas lapas un anketa. Pētījuma rezultāti nav pierādījuši, ka digitālā stāstīšanas pieeja palīdz attīstīt runāšanas prasmes. Runāšanas testa rezultāti parādīja, ka 3. klases studentiem, ir vērojama neliela pozitīva dinamika. Animētu video veidošana paplašināja skolēnu vārdu krājumu, uzlaboja izrunu un gramatiku. Anketu analīze parādīja, ka angļu valodas skolotāji piekrīt, ka šai metodei var būt pozitīva ietekme, tomēr lielākajai daļai skolotāju nebija pieredzes metodes izmantošanā klasē.Digital storytelling combines the traditional art of oral storytelling with the technology existing in the twenty-first century classroom. Being able to communicate effectively is one of the most important life skills to learn. Using imagination and visualization to convey new information has been one of the most effective teaching methods. Therefore, the tools of the modern “digital” world have only expanded the possibilities of the method. The author of the diploma paper carried out a case study in secondary school in Riga from September till November 2019. 10 students participated in a research study and made animated videos with voice-over for developing their speaking skills. The following data collection methods were used: speaking test, evaluation sheets and a questionnaire. The research results haven't proven that digital storytelling approach helps to develop speaking skills. Results of the speaking test have shown that there is a slight positive dynamic in speaking of form 3 students. Making animated videos widened students’ vocabulary, improved pronunciation and grammar. Analysis of questionnaires showed that English teachers agree that digital storytelling may have a positive effect, however the majority of the teachers didn't have the experience in using the method in the classroom

Specific character and problems integrating children with special needs into general education school

Integracijos tema aktuali, nes šiandien norima, kad specialiųjų poreikių turintys vaikai gyventų pilnavertį gyvenimą savo bendruomenėje, kad nesusidurtų su segregacija (atskyrimu), kad būtų lygiaverčiai su kitais bendrojo lavinimo mokyklos mokiniais. Darbe nagrinėjamas mokyklos bendruomenės požiūris į specialiųjų poreikių vaikų integraciją į bendrojo lavinimo mokyklą.In my magistrate work I would like to analyse the problem and peculiarity of disabled children in the process of integration in general educational schools. The aim of the research: To research specific problems appearing while integrating children with special needs into general educational school in Shalchininkay town.Švietimo akademijaVytauto Didžiojo universiteta