Intramyocardial gene silencing by interfering RNA

RNAi is a widely used methodology for gene silencing. The action mechanism of siRNA molecules has been well studiedin recent years, and the technique has been optimized in terms of safety and effectiveness. Cardiovascular diseases havea high incidence in the current population, and despite of the extensive research, safe and efficient therapeutics have notyet been found, which is reflected by 17.1 million people who die each year for this cause. In this context, siRNAs arebeing considered a therapeutic tool to regulate the expression of genes involved in the generation of these pathologies.The efficacy of siRNAs entry to cardiomyocytes, the safety of the delivery process and the degree of silencing achievedare main aspects before consider it as a cardiovascular disease therapy. Presently, we will give a brief outline of thecurrent understanding of the RNAi mechanism and the delivery system to the heart. We describe the use of lentivirus fora functional silencing of cardiac proteins in the study of a pathophysiological process, the slow force response to cardiacstretch.Fil: Brea, María Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - la Plata. Centro de Investigaciones Cardiovasculares ; ArgentinaFil: Morgan, Patricio Eduardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - la Plata. Centro de Investigaciones Cardiovasculares ; ArgentinaFil: Perez, Nestor Gustavo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - la Plata. Centro de Investigaciones Cardiovasculares ; Argentin

Silenciamiento del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) mediante RNA de interferencia en el miocardio de rata

El objetivo de este trabajo es inhibir de forma específica el EGFR en el corazón de rata usando una metodología que permita evitar los efectos colaterales no deseados de las intervenciones farmacológicas.Para ello se planeó desarrollar la técnica del RNA de interferencia para silenciar de manera precisa la expresión de la isoforma 1 del receptor (EGFR, ErbB1) sin afectar los otros miembros de esta familia presentes en el corazón (ErbB2, ErbB4). Para ello se realizaron los siguientes pasos: 1) Buscar la secuencia de EGFR para confeccionar el short hairpin RNA contra el EGFR (shRNA-EGFR) y diseñarlo con todos los elementos necesarios para su funcionamiento intracelular. 2) Clonar el shRNA-EGFR dentro de un plásmido vector lentiviral. 3) Confirmar la secuencia clonada en el vector a través de PCR, cortes con enzimas de restricción y secuenciación. 4) Confirmar funcionalidad del shRNA-EGFR en células HEK293T.Facultad de Ciencias Exacta

Señales hipertróficas disparadas por la Angiotensina II en el miocardio: rol del receptor del factor de crecimiento epidérmico y de las especies reactivas del oxígeno

El objetivo del trabajo fue diseñar una herramienta para bloquear de manera específica al receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) y utilizarla para evaluar la participación del receptor en dos procesos fisiopatológicos: la segunda fase de fuerza al estiramiento y la hipertrofia cardíaca patológica. Diseñamos un RNA de interferencia contra el EGFR y lo clonamos en un vector lentiviral. Se inyectaron los corazones de ratas macho de 3 meses de edad (wistar para el estudio de segunda fase de fuerza y SHR para el estudio de hipertrofia) con el virus silenciador y el virus control, y al mes de la inyección se sacrificaron los animales y se realizaron distintos experimentos. La conclusión general del trabajo de tesis es que el EGFR es necesario para el desarrollo de segunda fase de fuerza al estiramiento y para la progresión de las SHR a la disfunción cardíaca.Facultad de Ciencias Exacta

Silenciamiento del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) mediante RNA de interferencia en el miocardio de rata

El objetivo de este trabajo es inhibir de forma específica el EGFR en el corazón de rata usando una metodología que permita evitar los efectos colaterales no deseados de las intervenciones farmacológicas.Para ello se planeó desarrollar la técnica del RNA de interferencia para silenciar de manera precisa la expresión de la isoforma 1 del receptor (EGFR, ErbB1) sin afectar los otros miembros de esta familia presentes en el corazón (ErbB2, ErbB4). Para ello se realizaron los siguientes pasos: 1) Buscar la secuencia de EGFR para confeccionar el short hairpin RNA contra el EGFR (shRNA-EGFR) y diseñarlo con todos los elementos necesarios para su funcionamiento intracelular. 2) Clonar el shRNA-EGFR dentro de un plásmido vector lentiviral. 3) Confirmar la secuencia clonada en el vector a través de PCR, cortes con enzimas de restricción y secuenciación. 4) Confirmar funcionalidad del shRNA-EGFR en células HEK293T.Facultad de Ciencias Exacta

Intramyocardial gene silencing by interfering RNA

RNAi is a widely used methodology for gene silencing. The action mechanism of siRNA molecules has been well studiedin recent years, and the technique has been optimized in terms of safety and effectiveness. Cardiovascular diseases have a high incidence in the current population, and despite of the extensive research, safe and efficient therapeutics have notyet been found, which is reflected by 17.1 million people who die each year for this cause. In this context, siRNAs arebeing considered a therapeutic tool to regulate the expression of genes involved in the generation of these pathologies.The efficacy of siRNAs entry to cardiomyocytes, the safety of the delivery process and the degree of silencing achievedare main aspects before consider it as a cardiovascular disease therapy. Presently, we will give a brief outline of thecurrent understanding of the RNAi mechanism and the delivery system to the heart. We describe the use of lentivirus fora functional silencing of cardiac proteins in the study of a pathophysiological process, the slow force response to cardiac stretch.Centro de Investigaciones Cardiovasculare

Puesta en valor de la extensión universitaria: curricularización para una integración real con investigación y docencia

This work is presented as the result of a complex, continuum and long reflexive process about our teaching practices along different workshops, meetings and collaborative exchanges in our teaching formation journey. The text includes our revisions about educational fragmentation and the importance of an integral, social and collectively constructed professional formation. We consider the importance of the articulation between teaching, research and extension practices for the social, political and historically situated teaching and learning processes, which promote a professional profile more committed to political-social problems, and we place the University as a fundamental institutional actor in the permanent exchange with the community. We also include concrete proposals for curricularisation of extension as an innovative pedagogical strategy to implement in university teaching practices in response to the problems addressed.Este trabajo se origina en respuesta a un proceso reflexivo complejo y continuo de nuestras prácticas docentes a lo largo de distintos encuentros, talleres e intercambios de la especialización en docencia universitaria de la Universidad Nacional de La Plata. A lo largo del texto plasmamos nuestras revisiones sobre la fragmentación en la educación y la necesidad de una formación integral, social y colectivamente construida. Consideramos la importancia de la articulación entre docencia, investigación y extensión para los procesos de enseñanza y aprendizaje social, política e históricamente situados, que promuevan un perfil profesional y ciudadano más comprometido con las problemáticas político-sociales, y situamos a la Universidad como actor institucional fundamental en el intercambio permanente con la comunidad. Incluimos también propuestas concretas de curricularización de la extensión como estrategia pedagógica innovadora para implementar en las prácticas docentes universitarias en respuesta a las problematizaciones abordadas

Epidermal growth factor receptor silencing blunts the slow force response to myocardial stretch

Background-Myocardial stretch increases force biphasically: the Frank-Starling mechanism followed by the slow force response (SFR). Based on pharmacological strategies, we proposed that epidermal growth factor (EGF) receptor (EGFR or ErbB1) activation is crucial for SFR development. Pharmacological inhibitors could block ErbB4, a member of the ErbB family present in the adult heart. We aimed to specifically test the role of EGFR activation after stretch, with an interference RNA incorporated into a lentiviral vector (small hairpin RNA [shRNA]-EGFR). Methods and Results-Silencing capability of p-shEGFR was assessed in EGFR-GFP transiently transfected HEK293T cells. Four weeks after lentivirus injection into the left ventricular wall of Wistar rats, shRNA-EGFR-injected hearts showed -60% reduction of EGFR protein expression compared with shRNA-SCR-injected hearts. ErbB2 and ErbB4 expression did not change. The SFR to stretch evaluated in isolated papillary muscles was ≈130% of initial rapid phase in the shRNA-SCR group, while it was blunted in shRNA-EGFR-expressing muscles. Angiotensin II (Ang II)-dependent Na+/H+ exchanger 1 activation was indirectly evaluated by intracellular pH measurements in bicarbonate-free medium, demonstrating an increase in shRNA-SCR-injected myocardium, an effect not observed in the silenced group. Ang II- or EGF-triggered reactive oxygen species production was significantly reduced in shRNA-EGFR-injected hearts compared with that in the shRNA-SCR group. Chronic lentivirus treatment affected neither the myocardial basal redox state (thiobarbituric acid reactive substances) nor NADPH oxidase activity or expression. Finally, Ang II or EGF triggered a redox-sensitive pathway, leading to p90RSK activation in shRNA-SCR-injected myocardium, an effect that was absent in the shRNA-EGFR group. Conclusions-Our results provide evidence that specific EGFR activation after myocardial stretch is a key factor in promoting the redox-sensitive kinase activation pathway, leading to SFR development.Centro de Investigaciones CardiovascularesFacultad de Ciencias Veterinaria

Paleontologic record of Pleistocene in Entre Ríos province (Argentine)

Las formaciones geológicas de Entre Ríos tradicionalmente asignadas al Pleistoceno inferior-medio corresponden a las Formaciones Hernandarias, La Juanita y Punta Gorda. El registro fósil del Pleistoceno de la provincia de Entre Ríos proceden mayoritariamente de cuatro unidades: las Formaciones Salto Ander Egg, El Palmar, Arroyo Feliciano y Tezanos Pinto. Todas ellas de edad Pleistoceno Tardío. El objetivo de la presente contribución es brindar una reseña del registro paleofaunístico y paleobotánico en un marco geológicos-estratigráficos y geocronológicos actualizado.The geological formations assigned to early- middle Pleistocene are Hernandarias, La Juanita and Punta Gorda Formations. Pleistocene fossil record of Entre Ríos province manly comes from four units: Salto Ander Egg, El Palmar, Arroyo Feliciano and Tezanos Pinto Formations. All of them Late Pleistocene ages. The aim of this contribution is to provide a review of the paleofaunistic and paleobotanic records within a geological-stratigraphic and geochronological updated framework.Fil: Ferrero, Brenda Soledad. Provincia de Entre Ríos. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción. Universidad Autónoma de Entre Ríos. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción; ArgentinaFil: Patterer, Noelia Isabel. Provincia de Entre Ríos. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción. Universidad Autónoma de Entre Ríos. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción; ArgentinaFil: Brunetto, Ernesto. Provincia de Entre Ríos. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción. Universidad Autónoma de Entre Ríos. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción; ArgentinaFil: Ramos, Rita Soledad. Provincia de Entre Ríos. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción. Universidad Autónoma de Entre Ríos. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción; ArgentinaFil: Noriega, Jorge Ignacio. Provincia de Entre Ríos. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción. Universidad Autónoma de Entre Ríos. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción; ArgentinaFil: Moya, Eliana Vanesa. Provincia de Entre Ríos. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción. Universidad Autónoma de Entre Ríos. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción; ArgentinaFil: Peralta, Matias Javier. Provincia de Entre Ríos. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción. Universidad Autónoma de Entre Ríos. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción; ArgentinaFil: Zucol, Alejandro Fabián. Provincia de Entre Ríos. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción. Universidad Autónoma de Entre Ríos. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción; ArgentinaFil: Franco, María Jimena. Provincia de Entre Ríos. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción. Universidad Autónoma de Entre Ríos. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción; ArgentinaFil: Brea, Mariana. Provincia de Entre Ríos. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción. Universidad Autónoma de Entre Ríos. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción; Argentin

Epidermal growth factor receptor silencing blunts the slow force response to myocardial stretch

Background-Myocardial stretch increases force biphasically: the Frank-Starling mechanism followed by the slow force response (SFR). Based on pharmacological strategies, we proposed that epidermal growth factor (EGF) receptor (EGFR or ErbB1) activation is crucial for SFR development. Pharmacological inhibitors could block ErbB4, a member of the ErbB family present in the adult heart. We aimed to specifically test the role of EGFR activation after stretch, with an interference RNA incorporated into a lentiviral vector (small hairpin RNA [shRNA]-EGFR). Methods and Results-Silencing capability of p-shEGFR was assessed in EGFR-GFP transiently transfected HEK293T cells. Four weeks after lentivirus injection into the left ventricular wall of Wistar rats, shRNA-EGFR-injected hearts showed -60% reduction of EGFR protein expression compared with shRNA-SCR-injected hearts. ErbB2 and ErbB4 expression did not change. The SFR to stretch evaluated in isolated papillary muscles was ≈130% of initial rapid phase in the shRNA-SCR group, while it was blunted in shRNA-EGFR-expressing muscles. Angiotensin II (Ang II)-dependent Na+/H+ exchanger 1 activation was indirectly evaluated by intracellular pH measurements in bicarbonate-free medium, demonstrating an increase in shRNA-SCR-injected myocardium, an effect not observed in the silenced group. Ang II- or EGF-triggered reactive oxygen species production was significantly reduced in shRNA-EGFR-injected hearts compared with that in the shRNA-SCR group. Chronic lentivirus treatment affected neither the myocardial basal redox state (thiobarbituric acid reactive substances) nor NADPH oxidase activity or expression. Finally, Ang II or EGF triggered a redox-sensitive pathway, leading to p90RSK activation in shRNA-SCR-injected myocardium, an effect that was absent in the shRNA-EGFR group. Conclusions-Our results provide evidence that specific EGFR activation after myocardial stretch is a key factor in promoting the redox-sensitive kinase activation pathway, leading to SFR development.Centro de Investigaciones CardiovascularesFacultad de Ciencias Veterinaria

Afinidades De Leguminosas Africanas Con La Flora Fosil Del Cenozoico Superior De La Cuenca Baja Del Plata, America Del Sur

This article presents an analysis of the affinities of legumes from the upper Cenozoic of the lower La Plata Basin (South America) with extant African genera and their implications for paleoecology and paleophytogeography. Permineralized woods, assigned to Entrerrioxylon victoriensis from the Paraná Formation (upper Miocene), Gossweilerodendroxylon palmariensis and Paraoxystigma concordiensis from the El Palmar Formation (upper Pleistocene), and Cylicodiscuxylon paragabunensis from the Arroyo Feliciano Formation (upper Pleistocene), show affinities with extant genera of the Detarioideae and Caesalpinioideae (mimosoid clade). Today, the taxa of the Detarioideae are distributed mainly in tropical regions of Africa, Central America and South America, and the monotypic genus Cylicodiscus is restricted to West Africa from Sierra Leone to Gabon. Currently, Cylicodiscus, Gossweilerodendron, and Oxystigma are not distributed in South America, which implies that in the past they were widely distributed and became extinct in this region at some point during the Pleistocene–Holocene, presumably related to the climatic changes that occurred during this time. The fossil record of the lower La Plata Basin with taxa related to the Detarioideae and Cylicodiscus supports a wider distribution during the Cenozoic as well as an ancient relationship with the tropical forests of West Africa.Este artículo presenta un análisis de las afinidades de las leguminosas del Cenozoico superior, halladas en la cuenca baja del Plata (América del Sur), con géneros africanos actuales, y sus implicancias paleoecológicas y paleofitogeográficas. Maderas permineralizadas, asignadas a Entrerrioxylon victoriensis de la Formación Paraná (Mioceno Superior), Gossweilerodendroxylon palmariensis y Paraoxystigma concordiensis de la Formación El Palmar (Pleistoceno Superior) y (Cylicodiscuxylon paragabunensis) de la Formación Arroyo Feliciano (Pleistoceno Superior), presentan afinidades con taxones actuales de Detarioideae y Caesalpinioideae (clado mimosoide). Actualmente, los taxones asignados a Detarioideae se distribuyen principalmente en las regiones tropicales de África, América Central y América del Sur y el género monotípico Cylicodiscus está restringido a África occidental desde Sierra Leona hasta Gabón. En la actualidad, Cylicodiscus, Gossweilerodendron y Oxystigma no están distribuidos en América del Sur, lo que implica que en el pasado tuvieron una mayor distribución y que se extinguieron en esta región en algún momento durante el Pleistoceno–Holoceno, presumiblemente relacionado con los cambios climáticos que ocurrieron durante este intervalo de tiempo. El registro fósil de la cuenca baja del Plata con taxones relacionados a Detarioideae y Cylicodiscus respalda una distribución fitogeográfica más amplia durante el Cenozoico y una vinculación antigua con los bosques tropicales de África occidental.Fil: Moya, Eliana Vanesa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Autónoma de Entre Ríos. Facultad de Ciencia y Tecnología; ArgentinaFil: Ramos, Rita Soledad. Provincia de Entre Ríos. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción. Universidad Autónoma de Entre Ríos. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción; ArgentinaFil: Franco, María Jimena. Provincia de Entre Ríos. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción. Universidad Autónoma de Entre Ríos. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción; ArgentinaFil: Brea, Mariana. Provincia de Entre Ríos. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción. Universidad Autónoma de Entre Ríos. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción; Argentin