Development and evaluation of indirect enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) to detect Epstein-Barr virus infection based on gp125 viral capsid antigen

زمینه و هدف: ویروس اپشتن-بار از خانواده هرپس ویروس ها، بوسیله تماس مستقیم با ترشحات عفونی منتقل می شود. در طی عفونت، آنتی بادی هایی از کلاس IgG و IgM علیه آنتی ژن کپسید ویروسی تولید می شوند که در تعیین وضعیت عفونت نقش دارند. هدف از این مطالعه طراحی و راه اندازی آزمون الایزا برای تشخیص آنتی بادی های IgG و IgM علیه آنتی ژن کپسید ویروس اپشتن-بار بود. روش بررسی: در این مطالعه تحقیقی-تولیدی، آزمون الایزا با استفاده از آنتی ژن کپسید ویروسی (gp125) بمنظور تشخیص آنتی بادی های IgG و IgM اختصاصی ویروس اپشتن-بار طراحی و راه اندازی شد. سپس 101 نمونه سرمی با آزمون الایزا IgM (26نمونه مثبت و 75 نمونه منفی) و 105 نمونه سرمی با آزمون الایزا IgG (98 نمونه مثبت و 7 نمونه منفی) طراحی شده مورد آزمایش قرار گرفتند و جهت بررسی ویژگی، 24 نمونه سرمی بیماران غیر منونوکلئوز عفونی استفاده گردید. نتایج حاصل با آزمون ایمنوفلورسنس (IFA) و کیت تجاری الایزا اکوئی پار-ایتالیا (Equipar Diagnostics -Italy) مقایسه شد. به منظور تجزیه و تحلیل داده ها از نرم افزار SPSS و آزمون مک نمار استفاده گردید. یافته ها: حساسیت نسبی، ویژگی نسبی و میزان همخوانی آزمون الایزا IgM و آزمون الایزا IgG طراحی شده در مقایسه با کیت تجاری به ترتیب برابر 3/92، 96 و 95 - 6/96، 9/88 و 95 بود. آزمون الایزا طراحی شدهIgG زمانی که با آزمون IFA مقایسه گردید. به ترتیب دارای حساسیت، ویژگی و میزان همخوانی 97، 100 و 1/97 و ارزش اخباری مثبت 100 بود. نتیجه گیری: ماهیت آنتی ژن پوشش داده شده نقش مهمی در افزایش حساسیت و ویژگی دارد به عبارتی زمانی که در آزمون الایزا از آنتی ژن اصلی استفاده گردد آزمون ویژگی بالایی دارد (الایزا طراحی شده) اما زمانی که از آنتی ژن سنتتیک (کیت تجاری اکوئی پار-ایتالیا) استفاده گردد حساسیت آزمون بالا می رود لذا پیشنهاد می شود بمنظور افزایش حساسیت و ویژگی آزمون مخلوطی از هر دو آنتی ژن در طراحی الایزا مورد استفاده قرار گیرد

Development of ELISA method for primary detection of HCV using core antigen

Studies show that Hepatitis C Virus (HCV) antigens appear before antibody while the early days of infection. Therefore detecting antigens could lead us to diagnosing the infection on time. The aim of this study was to develop a simple and sensitive enzyme immunoassay for the detection of hepatitis C virus (HCV) core antigen in order to evaluate the role of core antigen as a marker of HCV infection. A total of 280 samples was tested by third generation anti-HCV, and the reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) was performed only when the anti-HCV enzyme immunoassay (EIA) was positive. All samples were tested with HCV core antigen using Elisa kits. Among the 280 samples, 95 samples were anti-HCV positive. Among those 95 samples, 75 samples were RT-PCR-positive. The cut-off value was set at 0.15 unit of optical density (equivalent to 2.5 pg/ml of core antigen based on the distribution of healthy subjects (anti-HCV-negative subjects). The difference between the mean optical density values of HCV-ribonucleic acid-positive (HCV-RNA-positive) samples and HCV-RNA-negative samples in the HCV core antigen assay was highly significant (1.4 us 0.08, p < 0.005). The sensitivity and specificity of the core antigen assay were 88% and 96%, respectively. The pretreatment of the anti-HCV-positive samples with a solution that contained 1.5 M glycin buffer (pH = 2) increased the sensitivity of the assay (from 57.3% to 88%). This assay is a simple, sensitive, and useful method for use as a screening strategy for HCV infection in anti-HCV-positive or anti-HCV-negative individuals