Efeito do led vermelho sobre o número de células viáveis, morfologia e modulação de espécies reativas de oxigênio (eros) por células pulpares de dentes decíduos

FAPEMIG - Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas GeraisTrabalho de Conclusão de Curso (Graduação)Objetivo: avaliar o efeito de diferentes parâmetros do LED vermelho sobre o número de células viáveis, metabolismo celular, morfologia e modulação de espécies reativas de oxigênio (EROs) e óxido nítrico (ON) por células pulpares de dentes decíduos. Material e método: células pulpares de dentes decíduos foram obtidas de 2 dentes hígidos esfoliados e cultivadas em placas de acrílico de 24 compartimentos (1x105células/compartimento) utilizando DMEM suplementado com 10% de soro fetal bovino (SFB). Após 24 horas, foi realizada a indução da produção de mediadores inflamatórios pela aplicação de lipopolissacarídeo (LPS) de E.Coli, na concentração de 10µg/ml de meio de cultura. Logo após a aplicação do LPS as células foram irradiadas uma única vez (630 nm, 40 mW/cm2 e 80 mW/cm2) nas doses de 4 J/cm2, 15 J/cm2 e 30 J/cm2. Foram realizadas as análises de viabilidade celular (MTT), número de células viáveis (azul de Tripano), morfologia celular (MEV) bem como a quantificação de ON (reagente de Griess) e de espécies reativas de oxigênio (EROs) utilizando uma sonda de fluorescência (DCFH-DA). Todas as avaliações foram realizadas 24 horas após a irradiação. Os testes estatísticos foram Kruskall-Wallis e Mann-Whitney, com inferências estatísticas baseadas no nível de significância de 5%. Resultado: Na presença de LPS, as doses de 15 e 30 J/cm2 (40 mW/cm²) e 4 e 15 J/cm² (80 mW/cm²) apresentaram maior viabilidade celular quando comparado ao grupo controle (não irradiado) (p 0,05). Pôde-se observar células pulpares de aspecto normal, com formato fusiforme, recobrindo a lamínula de vidro na MEV. Na presença de LPS, os parâmetros irradiados com 40 mW/cm2 apresentaram os menores valores de ON, com diferença estatisticamente significante entre os parâmetros de irradiação e o grupo controle (com LPS) (p 0,05). As imagens geradas após a utilização da sonda para detecção de EROs confirmam os achados quantitativos. Conclusão: As densidades de energia de 15 e 30 J/cm² e irradiândia de 80 mW/cm² foram os parâmetros de irradiação mais efetivos para modular o estresse oxidativo nas células pulpares de dentes decíduos, sem causar danos ao metabolismo e morfologia celula

Cytotoxicity and dentin composition alterations promoted by different chemomechanical caries removal agents : a preliminary in vitro study

The use of chemomechanical agents for caries removal has been indicated as a non-invasive treatment option; however, their possible deleterious effects on the dental-pulp complex have been insufficiently studied. This study assessed the direct cytotoxici

Effect of red and infrared LED on free radicals level produced by pulp cells under stress condition using lipolysaccharide

Studies have showed positive effects related to the pulp tissue repair, after the use of light sources such as laser or Light Emitting Diodes (LED). However, the specific irradiation parameter that may be beneficial or harmful to the inflammatory modulation of this tissue remains unknown. The aim of the study was to evaluate the effect of different parameters of the red and infrared LED on the oxidative stress modulation and on the viability of pulp cells of primary teeth. Pulp cells were obtained from 5 healthy exfoliated teeth and cultured in 24-compartment acrylic plates (105 cells/compartment) using DMEM supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS). After 24 hours, the production of inflammatory mediators was induced by the application of lipopolysaccharide (LPS) at a concentration of 10µg/mL in culture medium. Right after the application of LPS, the cells were irradiated only once (630nm and 850nm, 40mW/cm2 and 80 mW/cm2) in the energy exposures of 4J/cm2, 15J/cm2 and 30J/cm2. To assess cell viability, number of viable cells and cell morphology, MTT, Trypan Blue and Scanning Electron Microscopy (SEM) tests were performed respectively. In addition, quantification of nitric oxide (NO) was performed using Griess reagent, and the quantification of reactive oxygen species (ROS) using a fluorescence probe (DCFH-DA). All evaluations were performed 24 hours after irradiation. The Kruskal-Wallis and Mann-Whitney statistical tests were used (p<0.05). For the red LED, an increase on viability was observed in cells exposed to LPS and irradiated with 15J/cm2 and 30J/cm2 at 40mW/cm2 and 4J/cm2 and 15J /cm2 at 80 mW/cm2 compared to the control group (p<0.05). The doses of 4J/cm2 to 40mW/cm2 and 15J/cm2 and 30J/cm2 at 80mW/cm2 modulated oxidative stress when compared to the group treated only with LPS (p<0.05). For the infrared LED, all irradiation parameters were able to decrease the concentrations of ROS after LPS application when compared to the non-irradiated group (p<0.05). The SEM images indicated cells with normal morphology and adhered to the substrate. It was concluded that the red LED using 15J/cm² and 30J/cm2 at 40mW/cm2 and 15J/cm2 at 80mW/cm² and the infrared LED using 15J/cm2 at 40mW/cm2 were the most effective parameters for stimulating viability and modulating the oxidative stress of pulp cells from primary teeth.CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e TecnológicoDissertação (Mestrado)Estudos têm apontado efeitos positivos relacionados com o reparo do tecido pulpar, após uso de fontes de luz como laser ou Diodos Emissores de Luz (LED). Entretanto, os parâmetros específicos de irradiação que podem ser benéficos ou deletérios para a modulação inflamatória deste tecido permanecem desconhecidos. Deste modo, o objetivo do estudo foi avaliar o efeito de diferentes parâmetros do LED vermelho e infravermelho na modulação do estresse oxidativo e na viabilidade de células pulpares de dentes decíduos. Para isto, células pulpares foram obtidas de 5 dentes hígidos esfoliados e cultivadas em placas de acrílico de 24 compartimentos (105 células/compartimento) utilizando DMEM suplementado com 10% de soro fetal bovino (SFB). Após 24 horas, foi realizada a indução da produção de mediadores inflamatórios pela aplicação de lipopolissacarídeo (LPS) na concentração de 10µg/mL de meio de cultura. Logo após a aplicação do LPS, as células foram irradiadas uma única vez (630nm e 850nm, 40 mW/cm2 e 80 mW/cm2) nas doses de 4J/cm2, 15J/cm2 e 30J/cm2. Para avaliação da viabilidade celular, número de células viáveis e morfologia celular, foram realizados os testes de MTT, Trypan Blue e Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) respectivamente. Além disso, foi realizado a quantificação de óxido nítrico (ON), por meio do reagente de Griess, e a quantificação de espécie reativa de oxigênio (EROs) utilizando uma sonda de fluorescência (DCFH-DA). Todas as avaliações foram realizadas 24 horas após a irradiação. Os testes estatísticos de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney foram utilizados (p<0,05). Para o LED vermelho, um aumento da viabilidade foi observado nas células expostas ao LPS e irradiadas com 15J/cm2 e 30J/cm2 a 40mW/cm2 e 4J/cm2 e 15J/cm2 a 80 mW/cm2 em comparação ao grupo controle (p<0,05). As doses de 4J/cm2 a 40mW/cm2 e 15J/cm2 e 30J/cm2 a 80mW/cm2 modularam o estresse oxidativo quando comparadas ao grupo apenas tratado com LPS (p<0,05). Para o LED infravermelho, todos os parâmetros de irradiação foram capazes de diminuir as concentrações de EROs após aplicação do LPS quando comparados ao grupo não irradiado (p<0,05). As imagens de MEV indicaram células com morfologia normal e aderidas ao substrato. Concluiu-se que o LED vermelho utilizado na dose de 15J/cm² e 30J/cm2 a 40mW/cm2 e 15J/cm2 a 80mW/cm² e o LED infravermelho utilizado na dose de 15J/cm2 a 40mW/cm2 foram os parâmetros mais efetivos para o estímulo da viabilidade e a modulação do estresse oxidativo de células pulpares de dentes decíduos.2023-04-1