C16-Ceramide Analog Combined with Pc 4 Photodynamic Therapy Evokes Enhanced Total Ceramide Accumulation, Promotion of DEVDase Activation in the Absence of Apoptosis, and Augmented Overall Cell Killing

Because of the failure of single modality approaches, combination therapy for cancer treatment is a promising alternative. Sphingolipid analogs, with or without anticancer drugs, can improve tumor response. C16-pyridinium ceramide analog LCL30, was used in combination with photodynamic therapy (PDT), an anticancer treatment modality, to test the hypothesis that the combined treatment will trigger changes in the sphingolipid profile and promote cell death. Using SCCVII mouse squamous carcinoma cells, and the silicone phthalocyanine Pc 4 for PDT, we showed that combining PDT with LCL30 (PDT/LCL30) was more effective than individual treatments in raising global ceramide levels, as well as in reducing dihydrosphingosine levels. Unlike LCL30, PDT, alone or combined, increased total dihydroceramide levels. Sphingosine levels were unaffected by LCL30, but were abolished after PDT or the combination. LCL30-triggered rise in sphingosine-1-phosphate was reversed post-PDT or the combination. DEVDase activation was evoked after PDT or LCL30, and was promoted post- PDT/LCL30. Neither mitochondrial depolarization nor apoptosis were observed after any of the treatments. Notably, treatment with the combination resulted in augmented overall cell killing. Our data demonstrate that treatment with PDT/LCL30 leads to enhanced global ceramide levels and DEVDase activation in the absence of apoptosis, and promotion of total cell killing

Molecular Cloning and Characterization of a Human Mitochondrial Ceramidase

We have recently purified a rat brain membrane-bound nonlysosomal ceramidase (El Bawab, S., Bielawska, A., and Y. A. Hannun (1999) J. Biol. Chem. 274, 27948-27955). Using peptide sequences obtained from the purified rat brain enzyme, we report here the cloning of the human isoform. The deduced amino acid sequence of the protein did not show any similarity with proteins of known function but was homologous to three putative proteins from Arabidospis thaliana, Mycobacterium tuberculosis, and Dictyostelium discoideum. Several blocks of amino acids were highly conserved in all of these proteins. Analysis of the protein sequence revealed the presence at the N terminus of a signal peptide followed by a putative myristoylation site and a putative mitochondrial targeting sequence. The predicted molecular mass was 84 kDa, and the isoelectric point was 6.69, in agreement with rat brain purified enzyme. Northern blot analysis of multiple human tissues showed the presence of a major band corresponding to a size of 3.5 kilobase. Analysis of this major band on the blot indicated that the enzyme is ubiquitously expressed with higher levels in kidney, skeletal muscle, and heart. The enzyme was then overexpressed in HEK 293 and MCF7 cells using the pcDNA3. 1/His-ceramidase construct, and ceramidase activity (at pH 9.5) increased by 50- and 12-fold, respectively. Next, the enzyme was characterized using lysate of overexpressing cells. The results confirmed that the enzyme catalyzes the hydrolysis of ceramide in the neutral alkaline range and is independent of cations. Finally, a green fluorescent protein-ceramidase fusion protein was constructed to investigate the localization of this enzyme. The results showed that the green fluorescent protein-ceramidase fusion protein presented a mitochondrial localization pattern and colocalized with mitochondrial specific probes. These results demonstrate that this novel ceramidase is a mitochondrial enzyme, and they suggest the existence of a topologically restricted pathways of sphingolipid metabolism

\u3ci\u3eArabidopsis\u3c/i\u3e Accelerated Cell Death 11, ACD11, Is a Ceramide-1-Phosphate Transfer Protein and Intermediary Regulator of Phytoceramide Levels

The accelerated cell death 11 (acd11) mutant of Arabidopsis provides a genetic model for studying immune response activation and localized cellular suicide that halt pathogen spread during infection in plants. Here, we elucidate ACD11 structure and function and show that acd11 disruption dramatically alters the in vivo balance of sphingolipid mediators that regulate eukaryotic-programmed cell death. In acd11 mutants, normally low ceramide-1- phosphate (C1P) levels become elevated, but the relatively abundant cell death inducer phytoceramide rises acutely. ACD11 exhibits selective intermembrane transfer of C1P and phyto-C1P. Crystal structures establish C1P binding via a surface-localized, phosphate headgroup recognition center connected to an interior hydrophobic pocket that adaptively ensheaths lipid chains via a cleft-like gating mechanism. Point mutation mapping confirms functional involvement of binding site residues. A π helix (π bulge) near the lipid binding cleft distinguishes apo-ACD11 from other GLTP folds. The global two-layer, α-helically dominated, ‘‘sandwich’’ topology displaying C1P-selective binding identifies ACD11 as the plant prototype of a GLTP fold subfamily

Refleksje na temat pracy Analiza finansowa ekonomicznej kondycji na przykładzie przedsiębiorstwa produkcyjnego autorstwa P. Chudzik

<p>Praca ma za zadanie ocenić poziom zastosowania modelu FHI w analizie przedsiębiorstwa produkcyjnego działającego na polskim rynku. Model ten został stworzony przez Johna Zietlowa.</p

Analiza finansowa ekonomicznej kondycji na przykładzie przedsiębiorstwa zajmującego się hurtową sprzedażą wyrobów farmaceutycznych i medycznych

<p>W pracy dokonano analizy kondycji finansowej przedsiębiorstwa zajmującego się sprzedażą hurtową wyrobów farmaceutycznych i medycznych na przestrzeni sześciu lat. Okres czasu który podlega badaniu to lata 2007-2012. Analiza kondycji ekonomicznej sprowadza się do obliczenia wskaźnika FHI (Financial Health Index) zaproponowanego przez Johna Zietlow’a – profesora finansów na Uniwersytecie Malone w mieście Canton w stanie Ohio (Stany Zjednoczone). Proces kalkulacji tej miary składa się z czterech etapów różniących się rozpatrywanym horyzontem czasu, a wyliczane na każdym z nich wskaźniki dotyczą płynności, wypłacalności oraz elastyczności finansowej. Każda z grup została opisana i przeanalizowana dla omawianej instytucji, a uzyskane wyniki poddano interpretacji.</p

Refleksje na temat pracy Analiza finansowa ekonomicznej kondycji na przykładzie polskich instytucji autorstwa J. Figuła, A. Główka, M. Kołodziej, P. Łagodzińska, D. Serwińska.

<p>Niniejsza recenzja dotyczy pracy opartej na modelu Zietlowa. Autorkami recenzowanej pracy są studentki Uniwersytetu Ekonomicznego we Wrocławiu. Celem Celem wielopłaszczyznowej analizy było zbadanie kondycji finansowej trzech instytucji: organizacji non profit, instytucji finansowej i przedsiębiorstwa produkcyjnego i objęła okres 2008-2010.</p> <p> </p

Refleksje na temat pracy "Analiza finansowa ekonomicznej kondycji na przykładzie przedsiębiorstwa działającego na rynku zaopatrzenia w wyroby medyczne" autorstwa A. Główka

<p>Podlegająca recenzji praca autorstwa A. Główki zawiera analizę finansową przedsiębiorstwa, przeprowadzoną na podstawie modelu Zietlowa. Autorka recenzowanej pracy jest obecnie studentką Uniwersytetu Ekonomicznego we Wrocławiu. Celem przeprowadzonych badań było przeanalizowanie kondycji finansowej spółki działającą na polskim rynku zaopatrzenia w wyroby medyczne na przestrzeni lat 2006-2011.</p> <p> </p