Diversity and distribution of lepidoptera-specific toxin genes in Bacillus thuringiensis strains from Argentina

A total of 268 Bacillus thuringiensis strains obtained from different sources of Argentina were analyzed to determine the diversity and distribution of the cry1, cry2, cry8, cry9 and vip3A genes encoding for lepidopteran-specific insecticidal proteins. Twin strains were excluded. Ten different profiles were detected among the 80 selected B. thuringiensis strains. Two of these profiles (cry1Aa, cry1Ac, cry1Ia, cry2Aa, cry2Ab and vip3Aa (35/80), and cry1Aa, cry1Ab, cry1Ac, cry1Ia, cry2Aa, cry2Ab and vip3Aa (25/80)) pooled 75% of the strains. The existence of this low diversity is rare, since in most of the studied collections a great diversity of insecticidal toxin gene profiles has been described. In addition, the most frequently detected profile was also most frequently derived from soil (70%), stored product dust (59%) and spider webs (50%). In contrast, the cry1Aa, cry1Ab, cry1Ac, cry1Ia, cry2Aa, cry2Ab and vip3Aa profiles were mainly detected in strains isolated from leaves (40%) and dead insect larvae (50%). Six of the identified insecticidal toxin gene profiles were discovered in strains isolated from stored product dust and leaves indicating higher diversity of profiles in these kinds of sources than in others. Some strains with high insecticidal activity against Epinotia aporema (Lepidoptera) larvae were identified, which is important to explore future microbial strategies for the control of this crop pest in the regionSe analizaron 268 cepas de Bacillus thuringiensis obtenidas de diferentes fuentes de Argentina con el objeto de determinar la diversidad y distribución de genes cry1, cry2, cry8, cry9 y vip3A, que codifican proteínas insecticidas lepidóptero-específicas. Se excluyeron las cepas gemelas. Se detectaron solo diez perfiles diferentes entre los 80 B. thuringiensis seleccionados. Dos de estos perfiles, el cry1Aa, cry1Ac, cry1Ia, cry2Aa, cry2Ab y vip3Aa (35/80) y el cry1Aa, cry1Ab, cry1Ac, cry1Ia, cry2Aa, cry2Ab y vip3Aa (25/80), comprendieron el 75% de las cepas seleccionadas. La existencia de esta baja diversidad es una rareza, ya que en la mayor parte de las colecciones estudiadas se ha descrito una gran diversidad de perfiles de genes de toxinas insecticidas. El perfil detectado con mayor frecuencia se obtuvo principalmente de cepas procedentes de suelo (el 70% de los de esa fuente lo tenían), también fue mayoritario entre los procedentes de polvo de producto almacenado (59%) y en los que procedían de telas de araña (50%). En cambio, el perfil cry1Aa, cry1Ab, cry1Ac, cry1Ia, cry2Aa, cry2Ab y vip3Aa se detectó principalmente en las cepas aisladas de hojas (40%) y de larvas de insectos muertos (50%). Seis de los perfiles identificados fueron encontrados en cepas aisladas de polvo de producto almacenado y de hojas, lo que indica una mayor diversidad de perfiles en estas fuentes que en otras. Se identificaron algunas cepas con alta actividad insecticida contra larvas de Epinotia aporema (Lepidoptera), hallazgo importante para explorar en el futuro estrategias microbianas para el control de esta plaga en la región.Inst. de Microbiología y Zoología Agrícola IMyZAFil: Sauka, Diego Hernan. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola; ArgentinaFil: Benintende, Graciela Beatriz. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola; Argentin

New variants of lepidoptericidal toxin genes encoding bacillus thuringiensis Vip3Aa proteins

Bacillus thuringiensis is an entomopathogenic bacterium characterized by producing parasporal proteinaceous insecticidal crystal inclusions during sporulation. Many strains are capable to also express other insecticidal proteins during the vegetative growing phase that are called Vip. Particularly, Vip3A proteins have activity against certain Lepidoptera species through a unique mechanism of action which emphasized their possible use in resistance management strategies against resistant pests. The aim of the work was to develop a PCR-RFLP method that can distinguish between vip3A genes from B. thuringiensis strains. In addition, four novel vip3Aa genes were cloned and sequenced. The method was originally based on amplification of a single PCR amplicon and the use of two restriction enzymes with recognition sites that facilitate simultaneous detection. Subsequently, a third restriction enzyme was use to distinguished between vip3A variants. Thirteen vip3Aa genes were identified in strains belonging to ten different B. thuringiensis serovars. Three intra-subclass variants of vip3Aa genes could be differentiated. The presented method can serve as an invaluable tool for the investigation of known and novel vip3A genes in B. thuringiensis strains. To the best of our knowledge, it is the first report where variants of a same subclass of insecticidal genes could be distinguished following PCR-RFLP.Fil: Sauka, Diego Herman. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Rodriguez, Sonia E.. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola; ArgentinaFil: Benintende, Graciela Beatriz. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola; Argentin

Bacterias entomopatógenas

De los cinco grupos más importantes de microorganismos entomopatógenos que presentan potencial como agentes de control biológico (virus, bacterias, hongos, nematodos y microsporidios), las bacterias son de las más estudiadas y utilizadas a nivel mundial. Entre ellas, las especies que tienen mayor potencial para ser empleadas en el Control Microbiano de insectos plagas son las de bacilos formadores de esporas: Bacillus spp. y géneros relacionados. Los primeros trabajos sobre el manejo de insectos plaga mediante la utilización de bacterias se remontan a 1914. Aparentemente los ensayos no fueron consistentes y el interés en estos entomopatógenos resurge cuando White y Dutky en 1940, demostraron exitosamente el control del escarabajo japonés Popillia japonica Newman (Coleoptera: Scarabaeidae) mediante la aplicación deesporas de Paenibacillus popilliae (antes Bacillus popilliae). Sin duda alguna, ello estimuló a otros investigadores a que publiquen numerosos trabajos sobre la efectividad de diferentes bacterias patógenas de diversos insectos. Hacia la misma época, otra bacteria llamada Bacillus thuringiensis,comenzó a ser objeto de numerosos estudios, convirtiéndose varios años más tarde en el insecticida microbiano más comercializado en el mundo. Se ha estimado que casi el 90 % de los bioinsecticidas bacterianos actualmente disponibles en el mercado mundial está constituido por más de 200 productos comerciales sobre la base de esta bacteria entomopatógena. Este entomopatógeno posee todas las características requeridas para ser utilizado como insecticida biológico. El espectro de hospedantes está limitado a especies de los órdenes Lepidoptera, Diptera y Coleoptera, así como a algunas pocas especies de nematodos y ácaros. Los parasitoides o predadores no son afectados por la acción patogénica de esta bacteria. Tampoco se han detectado efectos tóxicos en vertebrados, siendo segura su manipulación y utilización aun hasta la fecha de cosecha, lo cual los hace especialmente apropiados para el tratamiento de frutales y hortalizas. Porúltimo, su producción en gran escala no presenta mayores inconvenientes, siendo multiplicadas a nivel industrial por cultivo sumergido en fermentadores.Fil: Sauka, Diego Herman. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Benintende, Graciela Beatriz. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola; Argentin

Bioensaios de alimentação induzida para determinar a atividade inseticida de Bacillus thuringiensis contra Epilachna paenulata (Coleoptera)

The objective of this work was to establish and test the induced-feeding bioassay in order to detect Bacillus thuringiensis insecticidal activity against (Coleoptera: Coccinellidae). Larvae were induced to swallow high concentrations of spore-crystal suspensions of s Argentine B. thuringiensis strains. The great majority of strains showed no toxicity, and observed mortality was lower than 30%. Induced-feeding bioassay is feasible, and should be used for prospecting strains that produce right combinations of Cry proteins needed to an efficient pest control.Apresenta-se o estabelecimento de uma classe nova de bioensaios chamados de alimentação induzida. Neles, larvas de Epilachna paenulata (Coleoptera: Coccinellidae) são induzidas a ingerir concentrações elevadas de uma suspensão espora-cristal de Bacillus thuringiensis. Determinou-se a atividade tóxica de sete cepas exóticas e 30 argentinas de B. thuringiensis. A maioria mostrou não ser tóxicas e nenhuma uma mortalidade maior aos 30% apesar da alta concentração das suspensões espora-cristal empregadas. Uma cepa nativa de B. thuringiensis, previamente associado a uma atividade mosquitocida, resultou moderadamente tóxica.O objetivo deste trabalho foi estabelecer e testar o bioensaio de alimentação induzida para a determinação da atividade inseticida de Bacillus thuringiensis contra larvas de Epilachna paenulata (Coleoptera: Coccinellidae). As larvas foram induzidas a ingerir concentrações elevadas de suspensões esporo-cristal de 7 cepas exóticas e 30 argentinas de B. thuringiensis. A maioria das cepas não apresentou toxicidade a larvas de E. paenulata, com mortalidade inferior a 30%. O bioensaio de alimentação induzida se mostrou efetivo, e pode ser usado para identificar cepas que produzam combinações adequadas de proteínas Cry, necessárias para o controle de pragas

Variantes hiperproductoras de proteínas insecticidas de Bacillus thuringiensis obtenidas por mutagénesis inducida aumentan toxicidad para Alphitobius diaperinus

Poster y resumenLa producción avícola puede verse afectada por Alphitobius diaperinus (Coleoptera: Tenebrionidae). Su control se basa principalmente en el empleo de productos químicos. La utilización de una herramienta de control ambientalmente sostenible podría contemplar el uso de bioinsecticidas que contengan Bacillus thuringiensis como ingrediente activo. La cepa nativa INTA Mo4-4, productora mayoritariamente de la proteína insecticida Cry3 durante la esporulación, presenta alta virulencia en larvas de A. diaperinus. A efectos de reducir costos de producción a nivel industrial, es necesario maximizar la obtención de biomasa activa (esporas y cristales proteicos). Esto podría lograrse mediante la selección de mutantes que sinteticen mayores proporciones de proteínas insecticidas obtenidas a través de mutagénesis inducida al azar. Recientemente obtuvimos tres variantes hiperproductoras de INTA Mo4-4 (28, 30 y 113) por exposición a etilmetanosulfonato. Un análisis microscópico evidenció a 30 como una variante claramente oligosporogénica. El objetivo de este trabajo fue cuantificar la actividad tóxica de las tres variantes hiperproductoras de proteínas insecticidas y compararlas con la de INTA Mo4-4. Asimismo se pretendió especular acerca de alguna posible razón responsable de la hiperproducción. La virulencia de las variantes y de la cepa silvestre en A. diaperinus se determinó a través de la estimación de la concentración letal media (Cl50) en bioensayos de incorporación en dieta. Se emplearon seis concentraciones de cada muestra. Los valores obtenidos de Cl50 resultaron del promedio de tres bioensayos realizados en días diferentes y estimados mediante análisis Probit. Además se realizaron recuentos de esporas viables en placa a partir de la biomasa de cada variante y de la cepa silvestre. Los resultados mostraron un aumento significativo de la actividad tóxica de las variantes hiperproductoras en comparación con INTA Mo4-4 (Cl50= 200,7 ± 32,5 μg de biomasa/ml de dieta), representando mejoramientos entre un 53 y 57%. Los recuentos de esporas de las variantes 28 y 113 fueron similares entre sí y alrededor de 3,5 veces menores que el de INTA Mo4-4 (5x107 UFC/mg de biomasa). En cambio, el recuento de la variante 30 resultó un orden de magnitud menor que el de las otras variantes y la cepa silvestre. Considerando estos resultados y observaciones microscópicas previas, la hiperproducción se asoció a variantes oligosporogénicas. Este tipo de variantes se caracterizan por cultivos donde algunas células hijas pueden esporular y otras no, haciendo que la fase estacionaria se prolongue en estas últimas, y se produzca mayor cantidad de proteínas insecticidas. Esto se evidenció claramente en la variante 30, y en menor medida en la 28 y 113, donde los recuentos de esporas fueron menores que en la cepa silvestre. El uso de este tipo de variantes podría mejorar el rendimiento de la producción de biomasa activa de INTA Mo4-4 para el desarrollo de un bioinsecticida.Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola (IMYZA)Fil: Pérez, Melisa Paula. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola; ArgentinaFil: Pérez, Melisa Paula. Agencia Nacional de Promoción Científica y Tecnológica (ANPCyT); ArgentinaFil: Berretta, Marcelo Facundo. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola; ArgentinaFil: Berretta, Marcelo Facundo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Benintende, Graciela Beatriz. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola; ArgentinaFil: Sauka, Diego Herman. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola; ArgentinaFil: Sauka, Diego Herman. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Draft Genome Sequence of Geobacillus sp. Isolate T6, a Thermophilic Bacterium Collected from a Thermal Spring in Argentina

Geobacillus sp. isolate T6 was collected from a thermal spring in Salta, Argentina. The draft genome sequence (3,767,773 bp) of this isolate is represented by one major scaffold of 3,46 Mbp, a second one of 207 Kbp and twenty scaffolds of < 13 Kbp. Assembled sequences revealed 3,919 protein-coding genes.Fil: Ortiz, Elio Maximiliano. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronomicas. Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Berretta, Marcelo Facundo. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronomicas. Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Navas, Laura Emilce. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronomicas. Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Benintende, Graciela Beatriz. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronomicas. Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola; ArgentinaFil: Amadio, Ariel Fernando. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Santa Fe. Estación Experimental Agropecuaria Rafaela; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe; ArgentinaFil: Zandomeni, Rubén O.. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronomicas. Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Fusion of a bacterial cadherin-like domain and green fluorescent protein as a specific probe to study biofilm matrix formation in Rhizobium spp

Rhizobium adhering proteins or ‘Raps’ are secreted proteins identified in a very restricted group of rhizobial strains, specifically those belonging to R. leguminosarum and R. etli. The distinctive feature of members of the Rap family is the presence of one or two cadherin-like domains or CHDLs that are also present in numerous extracellular bacterial and archaeal proteins and were proposed to confer carbohydrate binding ability. We have previously made an in-depth characterization of RapA2, a calcium-binding lectin, composed by two CHDLs, involved in biofilm matrix remodelling in R. leguminosarum bv. viciae 3841. In this study, CHDLs derived from RapA2 were analysed in detail, finding significant structural and functional differences despite their considerable sequence similarity. Only the carboxy-terminal CHDL retained properties similar to those displayed by RapA2. Our findings were used to obtain a novel fluorescent probe to study biofilm matrix development by confocal laser scanning micros-copy, and also to shed some light on the role of the ubiquitous CHDL domains in bacterial secreted proteins.Fil: Abdian, Patricia Lorena. Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro de Investigacion En Ciencias Veterinarias y Agronomicas. Instituto de Agrobiotecnologia y Biologia Molecular. Grupo Vinculado Instituto de Microbiologia y Zoologia Agrigola Al Iabimo | Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Pque. Centenario. Instituto de Agrobiotecnologia y Biologia Molecular. Grupo Vinculado Instituto de Microbiologia y Zoologia Agrigola Al Iabimo.; ArgentinaFil: Malori, Maria Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Caramelo, Julio Javier. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Maglio Checchi, Abi. Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro de Investigacion En Ciencias Veterinarias y Agronomicas. Instituto de Agrobiotecnologia y Biologia Molecular. Grupo Vinculado Instituto de Microbiologia y Zoologia Agrigola Al Iabimo | Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Pque. Centenario. Instituto de Agrobiotecnologia y Biologia Molecular. Grupo Vinculado Instituto de Microbiologia y Zoologia Agrigola Al Iabimo.; ArgentinaFil: Russo, Daniela Marta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Zorreguieta, Ángeles. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Berretta, Marcelo Facundo. Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro de Investigacion En Ciencias Veterinarias y Agronomicas. Instituto de Agrobiotecnologia y Biologia Molecular. Grupo Vinculado Instituto de Microbiologia y Zoologia Agrigola Al Iabimo | Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Pque. Centenario. Instituto de Agrobiotecnologia y Biologia Molecular. Grupo Vinculado Instituto de Microbiologia y Zoologia Agrigola Al Iabimo.; ArgentinaFil: Benintende, Graciela Beatriz. Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro de Investigacion En Ciencias Veterinarias y Agronomicas. Instituto de Agrobiotecnologia y Biologia Molecular. Grupo Vinculado Instituto de Microbiologia y Zoologia Agrigola Al Iabimo | Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Pque. Centenario. Instituto de Agrobiotecnologia y Biologia Molecular. Grupo Vinculado Instituto de Microbiologia y Zoologia Agrigola Al Iabimo.; Argentin

Isolation and characterization of new Bacillus thuringiensis isolates from live and healthy larvae of carpocapsa

Bacillus thuringiensis es la bacteria entomopatógena más estudiada y utilizada en el mundo como agente de control microbiano. Se caracteriza por sintetizar factores de virulencia que se conglomeran en inclusiones cristalinas parasporales (proteínas Cry/Cyt) durante la fase de esporulación. Asimismo, puede secretar metabolitos insecticidas durante su fase vegetativa de crecimiento, los que son activos per se o pueden contribuir sinérgicamente a la toxicidad global de la cepa en estudio. Durante los últimos años, se han establecido en distintas partes del mundo colecciones de B. thuringiensis con la finalidad de encontrar nuevas cepas productoras de factores de virulencia que posean mayor poder insecticida o tóxicas para insectos en los que no se ha reportado actividad. Esta bacteria se ha aislado a partir de muestras de suelos, filoplano de plantas, residuos de la molienda de granos, telarañas, e incluso larvas de insectos muertos o enfermos. Sin embargo, el aislamiento de B. thuringiensis a partir de larvas vivas y sanas ha sido muy poco explorado. En el presente estudio se describe el aislamiento y caracterización fenotípica y genotípica de nuevos aislados de B. thuringiensis obtenidos a partir de larvas vivas y sanas de la comúnmente conocida carpocapsa o polilla del manzano (Cydia pomonella L. [Lepidoptera: Tortricidae]).Se realizaron aislamientos a partir de 32 larvas vivas y sanas provenientes de distintas fincas radicadas en Tunuyán (Mendoza) y en el Alto Valle (Río Negro), libres de la aplicación de B. thuringiensis. A partir de tres de ellas, se obtuvieron 8 aislamientos que fueron identificados por la presencia de cristales parasporales y análisis de un fragmento del gen 16S rRNA, dejando claro que el aislamiento de B. thuringiensis a partir de este tipo de muestras es totalmente factible. Se individualizaron cristales ovoides mediante microscopía de contraste de fases en todos ellos. Su análisis mediante SDS-PAGE brindó la existencia de una banda principal de ca. 130 kDa en la mayoría de estos, mientras que en otros, de ca. 180 kDa. Posteriormente se procedió a la detección de genes que codifican proteínas tóxicas paralepidópteros, coleópteros y dípteros, y de genes asociados a la síntesis de beta-exotoxina y zwittermicina, mediante amplificación génica (PCR). Se obtuvo ausencia de amplificaciones para los genes estudiados en todos los aislamientos, con excepción de la detección de genes cry8 en todos los aislamientos de la muestra L276. Paralelamente, los nuevos aislamientos se analizaron mediante Rep-PCR; lo que permitió que estos se agruparan dentro de uno de dos perfiles electroforéticos distintivos. Se evidenciaron 18 bandas polimórficas en ellos. El perfil de uno de estos grupos se asemejó al de la cepa coleoptericida DSM2803 utilizada como referencia.Finalmente se evaluó la patogenicidad de los nuevos aislamientos utilizando larvas de lepidópteros (C. pomonella), coleópteros (Alphitobius diaperinus) y dípteros (Aedes aegypti). Ninguno de los aislamientos nativos resultó significativamente tóxico para C. pomonella ni A. diaperinus. Mostraron un nivel de actividad insecticida nulo a leve, reportando mortalidades comprendidas entre el 0,0 % y el 10,4 % para C. pomonella y entre el 2,1 % y el 12,5 % para A. diaperinus. Estos niveles de toxicidad para C. pomonella eran esperables, ya que los aislamientos provinieron de larvas vivas y sanas de la misma especie donde se evaluó su patogenicidad. Por una parte, se podría hipotetizar que estos B. thuringiensis se encontraban en las larvas de donde se aislaron como saprófitos, y llegaron a ellas por estar en contacto con sus esporas libres o contenidas en su alimento habitual. En cambio, la baja toxicidad obtenida para A. diaperinus se pudo correlacionar con los aislamientos obtenidos de la muestra L276 con la presencia de un cristal ovoide asociado a una proteína de ca. 130 kDa, genes cry8 y un perfil de Rep-PCR similar al de una cepa coleoptericida. Por otra parte, ninguno de los aislamientos tampoco produjo mortalidad, ni ningún efecto visible, en larvas de A. aegypti. Teniendo en cuenta que en los aislamientos no se detectaron genes de toxinas insecticidas asociadas con actividad diptericida, era de esperar que estos no sean activos. Las proteínas Cry8 se han reportado como tóxicas para coleópteros, por ejemplo, para Anthonomus grandis, y en particular, para ciertos miembros de la familia Scarabaeidae, y para algunos lepidópteros como Anticarsia gemmatalis. Por lo tanto, los aislamientos INTA L276-1, INTA L276-5, INTA L276-9, INTA L276-10, INTA L276-11 podrían ser tóxicos para otras especies de coleópteros que no han sido aún evaluadas (por ejemplo, especies de escarabeídos). No obstante, para descartar o confirmar una actividad insecticida importante por parte de estos aislamientos nativos nuevos sería necesario realizar nuevos bioensayos donde se enfrenten estos y larvas de insectos pertenecientes a otras especies de los órdenes estudiados, incluso larvas de otros Filo como el Nematoda.Fil: Sauka, Diego Herman. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Troncozo, María Inés. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola; ArgentinaFil: Perez, Melisa Paula. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola; ArgentinaFil: López, Nanci Esther. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola; ArgentinaFil: Benintende, Graciela Beatriz. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola; Argentin

La técnica de la microgota como alternativa para el recuento de Azospirillum spp. dentro del protocolo de la Red de Control de Calidad de Inoculantes (REDCAI)

La evaluación de la calidad de los inoculantes comerciales es fundamental para garantizar una adecuada respuesta de los cultivos a la inoculación dentro de un marco de bioseguridad. En este sentido, el objetivo de este trabajo fue la estandarización y validación de la técnica de la microgota para la cuantificación de Azospirillum como metodología alternativa a la técnica de siembra en superficie, propuesta actualmente en el protocolo consenso de la Red de Calidad de Inoculantes, REDCAI. Entre 14 y 25 laboratorios, tanto privados como públicos, participaron de tres ensayos independientes. A partir de ellos se obtuvieron resultados reproducibles y robustos que permiten confirmar que ambas técnicas son equivalentes y concluir que la técnica de recuento por la microgota es una alternativa adecuada para ser incluida dentro del mencionado protocolo consenso.Quality evaluation of commercial inoculants is essential to warrant an adequate crop response to inoculation within a biosecurity framework. In this sense, this work is aimed at standardizing and validating the drop plate method for the enumeration of Azospirillum viable cells as an alternative to the spread plate technique, which is currently proposed in the consensus protocol of the REDCAI network. Between 14 and 25 private and public laboratories participated in three independent trials. We obtained consistent and robust results that allowed to confirm that both techniques are equivalent, concluding that the drop plate method is an alternative enumeration technique that is adequate to be included in the abovementioned consensus protocol.Fil: Di Salvo, Luciana Paula. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Departamento de Biología Aplicada y Alimentos. Cátedra de Microbiología Agrícola; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: García, Julia E.. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola; ArgentinaFil: Puente, Mariana Laura. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola; ArgentinaFil: Amigo, Josefina Alejandra. Universidad Nacional de Tucumán. Facultad de Agronomía y Zootecnia. Departamento de Ecología. Cátedra de Microbiología Agrícola; ArgentinaFil: Anriquez, Analia Liliana. Universidad Nacional de Santiago del Estero; Argentina. Universidad Nacional de Santiago del Estero. Facultad de Agronomía y Agroindustrias; ArgentinaFil: Barlocco, Claudia. Instituto Nacional de Investigación Agropecuaria; UruguayFil: Benintende, Silvia Mercedes. Universidad Nacional de Entre Ríos. Facultad de Ciencias Agropecuarias; ArgentinaFil: Bochatay, Tatiana. BASF Agricultural Specialities S.A.; ArgentinaFil: Bortolato, Marta Alejandra. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Agrarias; ArgentinaFil: Cassan, Fabricio Dario. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas Fisicoquímicas y Naturales. Instituto de Investigaciones Agrobiotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones Agrobiotecnológicas; ArgentinaFil: Ramirez Castaño, Carolina. Universidad Nacional de La Pampa. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Catafesta, Melina. Bio Nova; ArgentinaFil: Coniglio, Nayla Anahí. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Ciencias Exactas Fisicoquímicas y Naturales. Instituto de Investigaciones Agrobiotecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto de Investigaciones Agrobiotecnológicas; ArgentinaFil: Díaz, Marisa. Rizobacter Argentina; ArgentinaFil: Galian, Liliana Rosa. Universidad Nacional de Lomas de Zamora. Facultad de Ciencias Agrarias; ArgentinaFil: Gallace, María Eugenia. Universidad Nacional de La Pampa. Facultad de Agronomía. Recursos Naturales; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Patagonia Confluencia; ArgentinaFil: Garcia, Patricia Graciela. Universidad Nacional de La Pampa. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Patagonia Confluencia; ArgentinaFil: García de Salamone, Inés E.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Departamento de Biología Aplicada y Alimentos. Cátedra de Microbiología Agrícola; ArgentinaFil: Landa, Marianela. Ministerio de Agricultura, Ganadería, Pesca y Alimento. Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria; ArgentinaFil: Liernur, Germán. No especifíca;Fil: Maneiro, María Laura. Rizobacter Argentina S.A.; ArgentinaFil: Massa, Rosana. Stoller Biociencias S.R.L.; ArgentinaFil: Malinverni, Julieta. Ministerio de Agricultura, Ganadería, Pesca y Alimento. Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria; ArgentinaFil: Marchessi, Nicolas Carlos. Universidad Nacional de Lomas de Zamora. Facultad de Ciencias Agrarias; ArgentinaFil: Monteleone, Emilia. Nitrasoil Argentina S.A.; ArgentinaFil: Oviedo, Silvina. Rizobacter Argentina S.A.; ArgentinaFil: Pobliti, Lucrecia. Barenbrug Argentina; ArgentinaFil: Portela, Gabriela Rut. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Agronomía; ArgentinaFil: Radovancich, Débora. Laformed S.A.; ArgentinaFil: Righes, Silvia. Marketing Agrícola S.R.L.; Argentin

Identification of toxin genes encoding Cyt proteins from standard and Argentine strains of Bacillus thuringiensis

Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism methods for identification of cyt subclasses from Bacillus thuringiensis were established. Eight of 68 standard and ten of 107 Argentine B. thuringiensis strains harbor at least one cyt gene. The combination of cyt1Aa/cyt2Ba genes was identified in four standard and in ten native strains, whereas the cyt1Ba, cyt2Aa and cyt2Bb genes alone and the cyt1Ab/cyt2Bc genes together were found in four different standard strains respectively. The cyt2Ba genes from three B. thuringiensis svar israelensis strains and two Argentine B. thuringiensis strains were cloned, sequenced and designated as cyt2Ba10 to cyt2Ba14 respectively. These results suggest that these methods are relevant tools for identification of toxin genes encoding Cyt proteins in B. thuringiensis.Fil: Sauka, Diego Herman. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronomicas. Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Benintende, Graciela Beatriz. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronomicas. Instituto de Microbiología y Zoología Agrícola; Argentin