NLRC4 -mediated activation of CD1c+ dendritic cells contributes to perpetuation of synovitis in rheumatoid arthritis.

The individual contribution of specific myeloid subsets such as CD1c+ conventional dendritic cells (cDC) to perpetuation of Rheumatoid Arthritis (RA) pathology remains unclear. In addition, the specific innate sensors driving pathogenic activation of CD1c+ cDCs in RA patients and their functional implications have not been characterized. Here, we assessed phenotypical, transcriptional and functional characteristics of CD1c+ and CD141+ cDCs and monocytes from the blood and synovial fluid of RA patients. Increased levels of CCR2 and the IgG receptor CD64 on circulating CD1c+ cDC associated with the presence of this DC subset in the synovial membrane in RA patients. Moreover, synovial CD1c+ cDCs are characterized by increased expression of proinflammatory cytokines and high abilities to induce pathogenic IFNγ+IL-17+ CD4+ T cells in vitro. Finally, we identified the crosstalk between Fcγ Receptors and NLRC4 as a new potential molecular mechanism mediating pathogenic activation, CD64 upregulation and functional specialization of CD1c+ cDCs in response to dsDNA-IgG in RA patients.E.M.G. was supported by Comunidad de Madrid Talento Program (2017-T1/BMD5396), Ramón y Cajal Program (RYC2018-024374-I), the MINECO RETOS program (RTI2018-097485-A-I00), La Caixa Foundation (HR20-00218), CIBERINF (CB21/13/00107) and the TV3 Marató (REDINCOV). C.D.A. was supported by Comunidad de Madrid Talento Program (2017-T1/BMD-5396). M.C.M was supported by the NIH (R21AI140930). HR17-00016 grant from “La Caixa Banking Foundation to F.S.M also supported the study. D.C-F. is supported by the Fellowship “la Caixa” Foundation LCF/BQ/DR19/11740010. A.T.M. was supported by a PhD fellowship from the Autonomous Region of Madrid (PEJD-2019-PRE/BMD-16851) and the RD21/0002/0027 grant. R.L. and G.H.B. were supported by PI18/00261 AND PI20/00349 grants from Ministerio de Ciencia e Innovación and Instituto de Salud Carlos III, respectively. O.P. was supported by the TV3 Marató (REDINCOV) and I.T. was funded by grant for the promotion of research studies master-UAM 2021. S.C. was supported by PI21/01474 grant from the Instituto de Salud Carlos III and co-funded by The European Regional Development Fund (ERDF). I.G.A was supported by RD21/0002/0027 and PI21/00526 grants from the Spanish MINECO and Instituto de Salud Carlos III and co-funded by The European Regional Development Fund (ERDF) “A way to make Europe.S

Regulación de la actividad tirosina quinasa del receptor del factor de creciminento epidérmico por la calmodulina y la fosfocalmodulina

Tesis doctoral inédita leída en la Universidad Autónoma de Madrid, Facultad de Medicina, Departamento de Bioquímica. Fecha de lectura: 13-07-1993Una de las primeras respuestas celulares a la estimulación por el factor de crecimiento epidérmico (EGF) es el aumento de la concentración citoplásmica de Caz+. Por tanto, cabe suponer que la principal proteina receptora de este ión, calmodulina, se active durante este proceso, siendo capaz de unirse a los diferentes enzimas diana y regular su actividad. Así, hemos estudiado el papel de la calmodulina en la regulación de la actividad tirosina quinasa del receptor del EGF. Hemos demostrado que el receptor del EGF de la membrana plasmática de hígado de rata se puede aislar mediante cromatografía de afinidad en calmodulina-agarosa uniéndose en presencia de Ca2+ y eluyéndose con EGTA, lo que sugiere que el receptor tiene un lugar de unión para esta proteína reguladora. La unión del receptor del EGF a la calmodulina es específica y eficiente. La calmodulina inhibe tanto la autofosforilación del receptor del EGF en tirosina, como su actividad tírosina quinasa hacia sustratos exógenos. Dicha inhibición es parcialmente dependiente de Caz+ y no es revertida por concentraciones altas de EGF. Estos resultados sugieren que la calmodulina podría inducir la desensibilización del receptor del EGF, y por tanto, podría ser capaz de parar la señal mitogénica. También hemos demostrado que la calmodulina se fosforila en serina, treonina y tirosina por una(s) proteína quinasa(s) de la membrana plasmática. Además, el receptor del EGF, aislado mediante cromatografía en calmodulina-agarosa, fosforila fuertemente a la calmodulina en la tirosina-99. La fosforilación de la calmodulina se inhibe por Caz+ y es dependiente de ciertos cofactores básicos como la poli-L-lisina y la histona. En las condiciones óptimas, la estequiometría de la fosforilación de la calmodulina por el receptor del EGF es aproximadamente de 1 mol de fosfato unido por mol de calmodulina, lo que indica que el 100 % de las moléculas de calmodulina se fosforilan. La fosfocalmodulina, fosforilada por el receptor del EGF, estimula aparentemente la actividad tirosina quinasa del receptor del EGF, por lo que presenta un efecto contrario a su forma no fosforilada y por tanto, podría amplificar la señal mitogénica. Estos resultados sugieren que la calmodulina, tanto fosforilada como no fosforilada, está ínvolucrada en la regulación de los procesos iniciales de la transducción de señales inducidos por el EGF