Comparison of two enzymatic immunoassays, high resolution mass spectrometry method and radioimmunoassay for the quantification of human plasma histamine

International audienceHistamine (HA) is one of the main immediate mediators involved in allergic reactions. HA plasma concentration is well correlated with the severity of vascular and respiratory signs of anaphylaxis. Consequently, plasma quantification of HA is useful to comfort the diagnosis of anaphylaxis. Currently, radioimmunoassay (RIA) is the gold standard method to quantify HA due to its high sensitivity, but it is time consuming, implicates specific formations and cautions for technicians, and produces hazardous radioactive wastes. The aim of this study was to compare two enzymatic immunoassays (EIA) and one in-house liquid chromatography high-resolution mass spectrometry method (LC-HRMS) with the gold standard method for HA quantification in plasma samples of patients suspected of anaphylaxis reactions. Ninety-two plasma samples were tested with the 4 methods (RIA, 2 EIA and LC-HRMS) for HA quantification. Fifty-eight samples displayed HA concentrations above the positive cut-off of 10 nM evaluated by RIA, including 18 highly positive samples (>100 nM). Our results showed that Immunotech® EIA and LC-HRMS concentrations were highly correlated with RIA values, in particular for samples with a HA concentration around the positive cut-off. In our hands, plasma concentrations obtained with the Demeditec Diagnostics® EIA correlated less with results obtained by RIA, and an underestimation of plasma HA levels led to a lack of sensitivity. In conclusion, this study demonstrates that Immunotech® EIA and LC-HRMS method could be used instead of RIA to assess plasma HA in human diagnostic use

Cellules dendritiques et exosomes (protection vaccinale vis-à-vis des formes chronique et congénitale de la toxoplasmose)

Toxoplasma gondii est un parasite protozoaire intracellulaire obligatoire, qui infecte tous les animaux homéothermes, y compris l'homme. De caractère bénin chez les personnes immunocompétentes, la toxoplasmose peut revêtir un caractère de grande sévérité, dans les cas d'immunosuppression et de contamination transplacentaire du foetus. Les travaux de notre laboratoire ont démontré, dans un modèle murin de transfert passif, le rôle clef des cellules dendritiques (CD), cellules présentatrices d'antigènes professionnelles, dans la réponse immune protectrice vis-à-vis du toxoplasme. Un des mécanismes impliqués serait la sécrétion par les CD d'exosomes. Ces vésicules dérivées des endosomes tardifs présentent des molécules de CMH I et II à leur surface et expriment également une protéine particulière : la lactadhérine pouvant servir dans l'adressage de ces vésicules vers les CD. Ces exosomes sont donc capables de stimuler des lymphocytes T de manière spécifique. Suite à l'établissement d'une lignée de CD spléniques de souris CBA/J (lignée SRDC), CD à caractère phénotypique CD8+, nous avons pu observer que le transfert passif de SRDC ou de ses exosomes sensibilisées par des extraits antigéniques toxoplasmiques (ET), à des souris syngéniques par voie intra veineuse ou sous-cutanée, induit une protection sensible de ces souris contre la toxoplasmose. Cette protection caractérisée par une diminution de la charge parasitaire cérébrale (de 60 à 75 %) est associée à une réponse humorale spécifique sérique (IgG de type IgG2a) et locale (IgA muqueuses) ainsi qu'à une réponse cellulaire (prolifération cellulaire des cellules de rate et de ganglions mésentériques en présence d'ET avec sécrétion spécifique de cytokines de type Th1 (IL-2 et IFN-g) modulé Th2 (IL-4 et IL-10). Dans un dernier temps, nous avons voulu valider ces résultats en modèle de toxoplasmose congénitale. Les souriceaux issus de mères immunisées sont eux-mêmes protégés (croissance et poids quasi normaux, diminution de la charge parasitaire cérébrale) alors que les souriceaux issus de mères témoin sont fortement infectés et présentent les symptômes d'une toxoplasmose congénitale. En conclusion, ces résultats nous permettent d'envisager l'élaboration d'une stratégie vaccinale anti-toxoplasmique nouvelle et rationnelle basée sur l'utilisation de CD ou d'exosomes comme adjuvants de l'immunité.TOURS-BU Sciences Pharmacie (372612104) / SudocSudocFranceF

Microbiotes, poumon et aménagement des interfaces. Nouveaux regards sur l’immunologie, et peut-être sur l’homme ?

International audienc

Le neutrophile est-il à l’interface de la réponse immunitaire innée et de la réponse immunitaire adaptative dans l’infection par Toxoplasma gondii ?

National audienc

Immunosénescence : vieillissement « et » ou « du » système immunitaire

International audienceLa plus grande sensibilité aux infections, aux tumeurs, aux maladies auto-immunes et la moins bonne réponse vaccinale sont les caractéristiques de la réponse immunitaire du sujet âgé. Cette tranche de population en pleine expansion jusqu'en 2014 dans les sociétés industrielles, présente une plus grande fréquence de comorbidités, qui sont autant de facteurs aggravants de la déficience de la réponse immunitaire identifiée sous le vocable d'immunosénescence. Pour en rendre compte, il faut envisager la dialectique de la participation du système immunitaire au processus de vieillissement physiologique et les conséquences de ce dernier sur la réponse immunitaire dans ses branches innée et adaptative, avec des facteurs génétiques, épigénétiques et environnementaux intriqués. L'étude de nombreux paramètres immunitaires a permis d'identifier comme facteurs prédictifs de vieillissement du système immunitaire une plus grande fréquence de lymphocytes T CD8+CD28-, une faible réponse proliférative, un rapport CD4/CD8 bas (< 1), un nombre de lymphocytes B2 diminué et une séropositivité pour le CMV. Réponse immunitaire-télomère-vieillissement

Vaccins, adjuvants et réponse immunitaire post-vaccinale : bases immunologiques

International audienceLa vaccination a pour but d'induire une réponse immunitaire mémoire capable de protéger l'hôte contre la survenue d'une maladie liée à un agent infectieux. Au-delà de cette protection individuelle, les vaccins confèrent une protection collective en limitant le risque de transmission aux sujets qui ne peuvent être vaccinés ou ne répondent pas aux vaccins. La protection vaccinale repose sur les anticorps, qui neutralisent les toxines ou agents pathogènes ou favorisent la phago-cytose, mais également sur les cellules T helper nécessaires à la génération de lymphocytes B mémoires et de lymphocytes T cytotoxiques qui peuvent détruire les cellules infectées. Les principaux types de vaccins sont les vaccins vivants atténués, les vaccins inactivés à germes entiers et les vaccins inertes peptidiques. Les vaccins vivants atténués sont intrinsèquement immunogènes mais, du fait de leur potentiel réplicatif, sont contre-indiqués en cas d'immunosuppression. Les vaccins inactivés à germes entiers ne présentent plus ce risque mais nécessitent des rappels vaccinaux en raison d'une moindre immunogénicité. Les vaccins inertes peptidiques ne présentent plus de signaux de danger mais seulement les épitopes antigéniques et requièrent donc l'ajout d'adjuvants. Les effets secondaires avérés des vaccins correspondent à la réaction inflammatoire induite initialement et qui participe à la génération d'une réponse immunitaire mémoire cellulaire efficiente. La détermination d'un lien de causalité entre un effet indésirable et un vaccin repose sur la consistance, la force de l'association, la spécificité de l'évènement indésirable, de la relation temporelle et de la vraisemblance biologique entre l'injection vaccinale et l'évènement indésirable. Les effets secondaires sévères des vaccins restent exceptionnels

Analyses de diagnostic rapide en immunologie

International audienceCertaines pathologies, relevant d'un dysfonctionnement de la réponse immunitaire, peuvent rapidement compromettre le pronostic fonctionnel de certains organes, voire le pronostic vital, car le plus souvent ce sont des maladies systémiques, de diagnostic difficile au début quand elles sont pauci-symptomatiques alors qu'elles peuvent flamber subitement. C'est pourquoi le laboratoire d'immunologie, aux techniques encore non automatisées pour certaines, et qui travaille majoritairement en série, se doit de bousculer son organisation pour répondre à la demande argumentée d'un clinicien confronté à une urgence diagnostique. Il s'agit de la recherche d'auto-anticorps dans le cadre des glomérulonéphrites rapidement progressives et des syndromes pneumo-rénaux, du dosage des médiateurs de l'allergie dans le contexte des chocs anaphylactiques, du diagnostic de l'infection tuberculeuse latente en pédiatrie, de la recherche des lymphocytes T activés en cas de syndrome d'activation macrophagique et enfin de l'analyse qualitative et quantitative des immunoglobulines, notamment devant une suspicion de syndrome d'hyper-viscosité ou d'insuffisance rénale aiguë d'origine myélomateuse

Diagnostic biologique des déficits immunitaires primitifs

International audienceLe diagnostic précoce des déficits immuni-taires primitifs (DIP) est un élément clé pour une prise en charge adéquate des patients, afin de limiter la survenue de complications. Les manifestations cliniques et biologiques des DIP sont variées, incluant les infections récurrentes, mais aussi des manifestations oncologiques ou auto immunes. Des exa-mens biologiques simples, tels que l'hémo-gramme, le dosage pondéral des immuno-globulines et les sérologies post-vaccinales, peuvent permettre d'orienter le diagnostic étiologique. Des analyses plus spécialisées, comme le phénotypage lymphocytaire ou le dosage des sous classes d'IgG peuvent être réalisées en seconde intention. L'ensemble de ces examens nécessitent une interpré-tation rigoureuse en tenant notamment compte de l'âge du patient et du spectre infectieux

Protective Mucosal Th2 Immune Response against Toxoplasma gondii by Murine Mesenteric Lymph Node Dendritic Cells

Toxoplasma gondii, an obligate intracellular parasite pathogen which initially invades the intestinal epithelium before disseminating throughout the body, may cause severe sequelae in fetuses and life-threatening neuropathy in immunocompromised patients. Immune protection is usually thought to be performed through a systemic Th1 response; considering the route of parasite entry it is important to study and characterize the local mucosal immune response to T. gondii. Despite considerable effort, Toxoplasma-targeted vaccines have proven to be elusive using conventional strategies. We report the use of mesenteric lymph node dendritic cells (MLNDCs) pulsed ex vivo with T. gondii antigens (TAg) as a novel investigation approach to vaccination against T. gondii-driven pathogenic processes. Using a murine model, we demonstrate in two genetically distinct mouse strains (C57BL/6 and CBA/J) that adoptively transferred TAg-pulsed MLNDCs elicit a mucosal Toxoplasma-specific Th2-biased immune response in vivo and confer strong protection against infection. We also observe that MLNDCs mostly traffic to the intestine where they enhance resistance by reduction in the mortality and in the number of brain cysts. Thus, ex vivo TAg-pulsed MLNDCs represent a powerful tool for the study of protective immunity to T. gondii, delivered through its natural route of entry. These findings might impact the design of vaccine strategies against other invasive microorganisms known to be delivered through digestive tract

Apport de l’immunologie à la prise en charge diagnostique et thérapeutique des glomérulonéphrites extramembraneuses

International audienceLa glomérulonéphrite extra-membraneuse idiopathique peut désormais être qualifiée de maladie autoimmune glomérulaire. Un certain nombre d’autoanticorps a été décrit contre des composants glomérulaires ou contre des protéines alimentaires usuelles. Certains de ces autoanticorps, tel que les anticorps anti-PLA2R et les anticorps anti-THSD7A sont utiles pour suivre l’activité de la maladie et la réponse au traitement. Il existe certainement une susceptibilité génétique pour l’apparition de la maladie. La meilleure connaissance de la physiopathologie est le support rationnel à de nouvelles approches thérapeutiques en cours d’évaluation