Identificação bacteriana rápida por MALDI-TOF VITEK MS ® e teste de suscetibilidade rápido : reduzindo o tempo de liberação dos laudos de hemoculturas

Resumo não disponíve

Avaliação da tecnologia de MALDI-TOF para determinação da suscetibilidade à polimixina B em bacilos gram negativos

Infecções causadas por microrganismos multirresistentes tem se tornado cada vez mais comuns em ambientes hospitalares de todo o mundo. Os bacilos gram-negativos se destacam entre as bactérias multirresistentes pela produção de enzimas carbapenemases capazes de degradar os antibióticos de última geração. Como último recurso, as polimixinas foram reintroduzidas na clínica médica para o tratamento destas bactérias. No entanto, os métodos de determinação da suscetibilidade in vitro às polimixinas são limitados, tendo apenas a microdiluição em caldo (método trabalhoso e demorado) como padrão-ouro. Entre as infecções causadas por bactérias multirresistentes, as infecções de corrente sanguínea são as mais preocupantes pois podem levar à sepse e ao choque séptico, as quais têm alta taxa de mortalidade. Este trabalho objetivou desenvolver um método rápido de determinação da suscetibilidade às polimixinas, tanto de colônias crescidas em ágar como diretamente dos frascos positivos de hemoculturas, utilizando a tecnologia de MALDI-TOF. Para isso, foi utilizada a técnica de “microgotas direto na placa” (DOT-MGA) com algumas modificações (DOT-MGA Adaptado) para adaptar às características deste fármaco e com a utilização da placa reutilizável de MALDI-TOF. Para a padronização da técnica foram utilizados 122 isolados bacterianos recuperados de pacientes atendidos no Hospital de Clínicas de Porto Alegre para o teste direto da colônia e 117 isolados para a avaliação direto de hemoculturas, incluindo Enterobacterales e Bacilos gram-negativos não-fermentadores (Pseudomonas aeruginosa e Acinetobacter spp). O DOT-MGA Adaptado apresentou 95% e 100% de concordância categórica entre isolados de colônias crescidas em placas de ágar e direto de hemoculturas, respectivamente. Com isso, o teste DOT-MGA Adaptado demonstrou ser uma ótima alternativa para a determinação da suscetibilidade às polimixinas em laboratórios de microbiologia que possuem o equipamento de MALDI-TOF. O método DOT-MGA Adaptado é uma técnica simples, de baixo custo de materiais de consumo e, principalmente, rápida (resultados em até 4 horas após as hemoculturas sinalizarem positivas) a qual pode fornecer resultados precoces podendo auxiliar mais efetivamente o clínico na escolha da melhor antibioticoterapia para bacilos gram-negativos multirresistentes.Infections caused by multidrug-resistant microorganisms have become increasingly common in hospital environments around the world. Gram-negative bacilli stands out among multidrug-resistant bacterias for the production of carbapenemase enzymes capable of degrading the latest generation of antibiotics. As a last resort, polymyxins were reintroduced in the clinic to try to combat the advance of these bacteria, but the methods for determining the in vitro susceptibility to polymyxins still remain limited, with only broth microdilution (a laborious and time-consuming method) as the gold standard. Among infections caused by multidrug-resistant bacteria, bloodstream infections are the most worrisome: they can lead to sepsis and septic shock, which have a high mortality rate. This work aimed to develop a faster method for determining the susceptibility to polymyxins, both in colonies grown on agar and directly from positive blood culture flasks, using the technology of MALDI-TOF. For this, the technique of “direct on target microdroplet growth assay” (DOT-MGA) was used with some modifications (Adapted DOT-MGA) to adapt the technique to the characteristics of this drug and with the use of the reusable MALDI-TOF target. For the standardization of the technique, 122 bacterial isolates recovered from patients attempted at Clinical Hospital of Porto Alegre were used for the evaluation from colonies grown on agar plates and 117 isolates for the evaluation directly from blood cultures, including Enterobacterales and non-fermenting gram-negative bacilli (Pseudomonas aeruginosa and Acinetobacter spp). The Adapted DOT-MGA achieved 95% and 100% of categorical agreement between isolates from colonies grown on agar plates and directly from blood cultures, respectively. Thus, the Adapted DOT-MGA demonstrated to be a great alternative option for the determination of susceptibility to polymyxins in microbiology laboratories that have the MALDI-TOF equipment. The Adapted DOT-MGA is a simple technique, with low cost of consumables and, mainly, fast (results within 4 hours after blood cultures flags positive) which can provide early results and can more effectively assist the clinician in choosing the best antibiotic therapy for multidrug-resistant gram-negative bacilli

Evaluation of identification and susceptibility for Candida spp. isolated directly from positive blood culture bottles

Determination of the susceptibility profile of isolates of Candida from blood culture bottles is extremely important for correctly guiding patient pharmacotherapy. ,e aim of this study was to compare the results of analysis of Candida isolated directly from blood culture bottles by the VITEK MS MALDI-TOF identification system and the fluconazole disk diffusion assay with those of standard identification methods. Testing directly from the bottle allowed results 24 to 48 hours quicker than the standard method. ,ere was a categorical agreement of 51.64% (47 of 91 samples) between the results of analysis directly from the bottle and analysis by the standard method. Regarding species identification, there was 96.15% agreement for Candida parapsilosis (25 of 26 samples). Categorical agreement between the rapid and standard disk diffusion methods was 95%, and the agreement between the rapid disk diffusion method and the broth microdilution method was 97%. Only minor errors in the rapid method were observed: 3 (5%) in the standard disk diffusion method and 2 (3%) in the broth microdilution method. Our study concluded that the rapid disk diffusion method for fluconazole is a fast, easy, reproducible, and consistent method. Its timely implementation for testing antifungal agents in the clinical microbiology laboratory can help reduce profile release times, thus helping to determine the most appropriate antifungal treatment

AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE IN VITRO DE DELAFLOXACINO FRENTE A STAPHYLOCOCCUS AUREUS DE PACIENTES INTERNADOS EM HOSPITAL TERCIÁRIO NO SUL DO BRASIL

Introdução: Recentemente aprovado para uso no Brasil, o Delafloxacino - antimicrobiano da classe das quinolonas – é uma importante alternativa no combate à infecções por Staphylococcus aureus, inclusive aos resistentes à meticilina (MRSA). O Delafloxacino é indicado para infecções de pele e partes moles e também para pneumonia comunitária, porém ainda não há muitos estudos sobre a atividade in vitro deste antimicrobiano no Brasil. Este trabalho teve como objetivo avaliar a atividade in vitro de delafloxacino frente a isolados de Staphylococcus aureus obtidos de pacientes internados em hospital terciário no Sul do Brasil. Materiais e métodos: Foram selecionados aleatoriamente 44 isolados de Staphylococcus aureus (10 de infecções em partes moles, 28 de vias respiratórias e 6 de hemoculturas), que haviam sido testados por disco difusão para os antimicrobianos levofloxacino e oxacilina (discos de cefoxitina) conforme rotina do laboratório de microbiologia. Foi determinada a concentração inibitória mínima (MIC) pelo teste de fita de gradiente de concentração com delafloxacino na faixa de 0,002-32 mg/L. A interpretação foi realizada de acordo com o BrCAST. Resultados: S.aureus obtidos de partes moles apresentaram sensibilidade ao delafloxacino (MIC ≤ 0,25 mg/L). Destes, 20% (2/10) eram resistentes à oxacilina e ao levofloxacino. S.aureus das vias respiratórias apresentaram 60,7% (17/28) de sensibilidade ao delafloxacino e 100% apresentaram sensibilidade à oxacilina e sensibilidade aumentando exposição ao levofloxacino. Em relação as amostras de hemoculturas, a maior MIC foi de 0,004 mg/L. Embora não existam pontos de corte clínicos nem pontos de corte pK/pD para este tipo de amostra clínica, há ponto de corte epidemiológico (ECOFF), que indicaria a ausência de mecanismos de resistência quando a MIC é ≤ 0,016 mg/L. Conclusão: Em comparação com levofloxacino, o delafloxacino demonstrou ter boa atividade in vitro em infecções de partes moles por Staphylococcus aureus. Já para isolados de amostras respiratórias, não foi possível observar o mesmo. Embora poucos isolados MRSA tenham sido detectados, o delafloxacino poderia ser uma boa alternativa no tratamento de infecções por Staphylococcus aureus isolados principalmente de partes moles