Vaginal cytology for estrus detection in ocelot (Leopardus pardalis)

Utilizou-se a citologia vaginal por meio de diferentes métodos de coloração para detecção de cio em jaguatirica, Leopardus pardalis, pela estimulação hormonal exógena e pela avaliação das estruturas ovarianas por videolaparoscopia. Cinco fêmeas foram tratadas com eCG/hCG e FSH/LH a cada quatro meses pelo período de dois anos. Videolaparoscopia foi realizada após cada tratamento utilizando-se cetamina-xilazina e isoflurano. Esfregaços vaginais foram obtidos 15 dias antes e após a videolaparoscopia. As lâminas foram analisadas ao microscópio de luz quanto aos tipos celulares predominantes. Todos os animais apresentaram folículos maduros (>2mm) e corpos lúteos recentes em todas as intervenções. Não houve diferença significativa entre os resultados obtidos na mesma coloração de acordo com os tratamentos utilizados. Todas as técnicas mostraram-se eficientes na detecção de células superficiais queratinizadas anucleadas e nucleadas, intermediárias, parabasais e basais. Foi possível determinar a fase de estro em Leopardus pardalis por meio da citologia vaginalVaginal cytology was evaluated for estrus detection using different stains after hormonal stimulation with exogenous gonadotrophin (eCG/hCG, FSH/LH) and videolaparoscopy for ovarian structure evaluation. Five L. pardalis were treated four times during two years. After each treatment, videolaparoscopy was performed using Ketamine-Xylazine and Isoflurane. Vaginal cytology was made 15 days before and after videolaparoscopy. Three stains were used: Diff Quick, Papanicolaou, and Shorr. The slides were analyzed for the typical cell predominance. All the animals showed mature follicles (>2mm) and recent corpus luteum in all procedures. No significative difference was observed between the results in the same stain according to the treatment eCG/hCG and FSH/LH. All stains were efficient in detection of nucleated and anuclear superficial keratinized cells; intermediated, parabasal, and basal cells. Vaginal cytology can be used for estrus detection in Leopardus pardalisFAPES

Eletroejaculação e características seminais em chinchila (Chinchilla laniger)

O método da eletroejaculação foi utilizado em chinchila através de eletrodo introduzido a 3 cm no reto do animal, obtendo-se os melhores resultados com uma série de 9 choques de 12,5 mA, 6 choques de 25,0 mA e 19 choques de 50,0 mA. O sêmen obtido nestas condições foi considerado de boa qualidade, comportando-se satisfatoriamente tanto no processo de congelamento, quanto no descongelamento.Semen collection in Chinchilla was attained through electroejaculation with an electrode inserted 3cm deep in the rectum, utilizing a series of 9 shocks of 12.5 mA, 6 shocks of 25.0 mA and 19 shocks of 50.0 mA. Material obtained was considered of good quality, both for freezing and thawing

Análise citogenética de oócitos de jaguatirica (Leopardus pardalis) e gato-do-mato-pequeno (Leopardus tigrinus) coletados após estimulação ovariana

Este estudo representa a primeira avaliação da maturação nuclear de oócitos por análise citogenética realizada em duas espécies de felídeos brasileiros ameaçados de extinção: L. pardalis (n=5) e L. tigrinus (n=4). Os animais foram submetidos à estimulação ovariana alternada com eCG-hCG e pFSH-pLH a cada quatro meses pelo período de dois anos, perfazendo um total de 6 intervenções. Os oócitos foram recuperados por vídeo-laparoscopia, caracterizados quanto à morfologia e utilizados para determinação dos estágios do ciclo meiótico por análise citogenética e maturação pela caracterização de metáfase II. Dos 33 oócitos de jaguatirica avaliados 12% (n=4) apresentaram cromossomos condensados em seu interior e dos 11 oócitos de gato-do-mato-pequeno avaliados 36% (n=4) apresentaram cromossomos condensados em seu interior, no entanto, nenhum oócito encontrava-se em metáfase II. Avaliação morfológica dos oócitos mostrou as mesmas características encontradas em outros mamíferos. Comparando os tratamentos, não houve diferença significativa (p>;0,05) no número total de estruturas ovarianas (folículos e corpos lúteos recentes) observadas em estimulações alternadas sucessivas, nas duas espécies estudadas. Também não houve diferença significativa em relação ao total de estruturas ovarianas encontradas em cada tratamento (5,7±1,2 eCG/hCG; 7,9±0,9 pFSH/pLH) para L. pardalis e (2,6±0,7 eCG/hCG; 2,0±0,5 pFSH/pLH) para L. tigrinus. Apesar das limitações deste experimento e do número reduzido de oócitos avaliados podemos sugerir que a aspiração folicular após estimulação ovariana com eCG/hCG e pFSH/pLH alternadamente resulta na recuperação de oócitos imaturos, que necessitam de cultivo em meios específicos para atingir o estágio de Metáfase II.This study represents the first assessment of oocyte's nuclear maturation by cytogenetical analysis in two endangered Brazilian felids: L. pardalis (n=5) and L. tigrinus (n=4). Females were treated 6 times with alternating eCG/hCG and pFSH/pLH protocols using an interval of 4 months between each treatment. Ovarian follicular development and oocytes recovery were performed through laparoscopy. Recovered oocytes were submitted to the morphological and cytogenetical analysis in order to evaluate the meiotic cycle and maturation (metaphase II), respectively. In 33 ocelot's oocytes observed 12% (n=4) showed condensed chromosomes and in 11 tigrinu's oocytes observed 36% (n=4) showed condensed chromosomes. However no oocytes in metaphase II were observed. Oocytes morphological evaluation showed the same characteristics were observed in others mammals. Our results suggest that L. pardalis and L. tigrinus do not show a decrease (p>;0.05) in ovarian response after repeated and alternate exposure to different gonadotropin treatments. In both L. pardalis and L. tigrinus, no differences (p>;0.05) were found regarding to the number of total ovarian structures (total follicles and CL) during successive gonadotropin treatments. There were no differences (p>;0.05) regarding to the total number of ovarian structures in L. pardalis (5.7 ± 1.2 eCG/hCG and 7.9 ± 0.9 pFSH/ pLH) or L. tigrinus (2.6 ± 0.7 eCG/hCG and 2.0 ± 0.5 pFSH/pLH). With these results we can suggest that follicular aspiration after ovarian stimulation with exogenous gonadotrophins results in immature oocytes, needing in vitro culture in specific mediums for metaphase II stage was observed

Concentrações de testosterona no soro sangüíneo de búfalos durante 24 horas, no inverno e no verão

Concentrações de testosterona foram determinadas por radioimunoensaio em 30 amostras de soro sangüíneo obtidas cinco vezes durante 24 horas, de 6 búfalos adultos Jaffarabadi x Mediterrâneo. As amostras foram obtidas durante um dia do inverno e um dia do verão de 1991. As concentrações de testosterona variaram de 0,10 a 1,36 ng/ml no inverno e de 0,10 a 2,454 ng/ml no verão. Valores máximos foram obtidos às 6,00 horas (0,52 ng/ml) no verão e 0,82 ng/ml no inverno, ocorrendo então duas quedas abruptas, a primeira às 12 horas (0,37 ng/ml) no verão e 0,21 ng/ml no inverno e a segunda 24 horas (0,17 ng/ml) no verão e 0,49 ng/ml no inverno. No verão, níveis mais altos de testosterona sérica foram observados durante o dia

Efeitos do hormônio folículo estimulante (FSH) e da gonadotrofina da menopausa humana (hMG) como agentes superovulantes em tratamentos sucessivos de vacas da raça holandesa, variedade preta e branca, utilizadas em transferência de embriões

Ten Holstein cows were used as embryo donors in an experiment to compare two superovulatory hormones: FSH (38mg) and hMG (2.400 U.I. = 1.200 U.I. FSH + 1.200 U.I. LH), in decreasing twice daily doses, for 4 days following day 10th of the estrous cycle. On 3rd day after treatments had started, prostaglandin F2 alfa (500µg) was applied for synchronization of oestrus. A.I. was performed 12 and 24 hours after first signs of oestrus. Same procedure was repeated for 5 times, with 60 days interval, in the same cows, to verify possible changes in superovulatory response. Embryos were recovered by non surgical procedure on 7th day after oestrus, through a Neustadt Ad-Aisch catheter. Each uterine horn was washed with 500 ml of modified Dulbecco’s medium plus 1% fetal bovine serum. Recovered medium was allowed to rest during half an hour, then supernatant was siphoned. Detailed examination of the embryos was performed in remaining 100 ml medium, with a stereomicroscope (10 to 40 x magnification). From 105 structures obtained with FSH and 43 obtained with hMG, 79 (75%) and 31 (72%) embryos were able, respectively, for transfer to uterine horn ipsilaterally to corpora lutea, also through non surgical procedure. Pregnancy diagnosis was performed by rectal palpation 45-60 days after embryo transfers. The pregnancy rates were 43% (34/79) for FSH treatment and 55% (17/31) for hMG treatment.Para verificar o efeito superovulante de 38mg de FSH e de 2400 U.I. de hMG (1200 U.l. de FSH + 1200 U.l. de LH) em doses diárias decrescentes durante 4 dias consecutivos, a partir do 10º. dia do ciclo estral, foram utilizadas 10 vacas Holandesas, variedade preta e branca. No 3º. Dia após o início do tratamento, os animais receberam 500µg de Cloprostenol para sincronização do ciclo estral, sendo inseminados 12 e 24 horas após o início do cio. O processo de superovulação foi repetido por 5 vezes, com intervalo de 60 dias, empregando-se os mesmos animais e as mesmas doses hormonais para verificar as possíveis alterações das respostas superovulatórias. Realizaram-se as colheitas dos embriões no 7º. dia após o cio, através do método não cirúrgico, em sistema fechado e com o auxílio de catéter Neustadt Ad-Aisch. Utilizaram-se, para cada corno uterino, 500ml do meio de Dulbecco modificado (PBS), aquecidos a 37°C e enriquecidos com 1% de soro fetal bovino. O meio recuperado permaneceu em repouso por 30 minutos, sifonando-se o sobrenadante. Os l00ml restantes foram colocados em placas de Petri quadriculadas para localização das estruturas, empregando-se estereomicroscópio com aumentos de 10 e 40 vezes. Das 105 estruturas obtidas com FSH e 43 com hMG, 79 (75%) e 31 (72%) eram viáveis, sendo os embriões inovulados nos cornos uterinos ipsolaterais aos corpos lúteos através do método não cirúrgico. O diagnóstico de gestação foi realizado através de palpação retal, 45-60 dias após as transferências, obtendo-se taxas de 43% (34/79) para o FSH e 55% (17/31) para o hMG

Testosterone concentration in blood serum of buffalo bulls during 24 hours in winter and summer seasons

Testosterone concentration was measured by radioimmunoassay in 30 samples of blood serum obtained five times at each 6 hour’s interval during 24 hours from 6 Jaffarabadi x Mediterranean buffalo bulls. Blood samplings were carried out twice, respectively, in one day of summer and one day of winter season. Testosterone concentration ranged from 0.10 to 1.36 ng/ml in the winter day and from 0.10 to 2.54 ng/ml in the summer day. Maximum values were obtained at 6:00 p.m. (0.52) in summer and 0.82 ng/ml in winter, then abrupt drops occurred, first at 12 m. (0.37) in summer and 0.21 in winter, and the second one at 24 p.m. (0.17) in summer and 0.49 ng/ml in winter. In summer, higher serum testosterone levels were observed during the day.Concentrações de testosterona foram determinadas por radioimunoensaio em 30 amostras de soro sangüíneo obtidas cinco vezes durante 24 horas, de 6 búfalos adultos Jaffarabadi x Mediterrâneo. As amostras foram obtidas durante um dia do inverno e um dia do verão de 1991. As concentrações de testosterona variaram de 0,10 a 1,36 ng/ml no inverno e de 0,10 a 2,454 ng/ml no verão. Valores máximos foram obtidos às 6,00 horas (0,52 ng/ml) no verão e 0,82 ng/ml no inverno, ocorrendo então duas quedas abruptas, a primeira às 12 horas (0,37 ng/ml) no verão e 0,21 ng/ml no inverno e a segunda 24 horas (0,17 ng/ml) no verão e 0,49 ng/ml no inverno. No verão, níveis mais altos de testosterona sérica foram observados durante o dia

Influence of osteopontin in bovine uterine tube fluid on sperm binding and fertilization in RCA-1 lectin-treated oocytes

This study was conducted to determine the effect of pre-exposure of oocytes to Ricinus communis (RCA-1) lectin and osteopontin (OPN) in uterine tube fluid (UTF) on in vitro sperm egg binding and fertilization. In vitro-matured bovine oocytes were incubated (39°C, 5% CO2 in air) for 2 h in the following treatments: (i) 500 ?l of fertilization medium (FM); (ii) 250 ?l of FM with 0.25 ml of non-luteal ampullary uterine tube fluid (NLAUTF); (iii) 250 ?l of FM with 250 l of NLAUTF and 4 ?l of RCA-1 lectin; (iv) 250 ?l of FM with 250 ?l of NLAUTF, a rabbit polyclonal antibody (1:200) against purified bovine milk OPN, and RCA-1 lectin; (v) 500 ?l of FM and RCA-1 lectin. Following incubation, oocytes were washed, placed in FM with 2 ?g heparin, and incubated with 1 × 105 frozen thawed spermatozoa per 10 oocytes. Oocytes used to assess sperm binding were stained with Hoescht 33342, and the number of sperm bound per zona pellucida counted. The remaining oocytes were fixed in acid alcohol, stained with 1% acetate-orcein and observed to determine the presence of pronuclei. More sperm bound to the zona pellucida (mean ± SEM) when oocytes were incubated in treatment 3 (59.0 ± 5.5) than in treatments 2 (46.4 ± 5.6), 4 (18.1 ± 5.4), 5 (33.4 ± 5.6) or 1 (32.5 ± 5.6). More oocytes were fertilized when incubated in treatment 3 (91% ± 3.0) than in 2 (84% ± 3.0), 4 (40% ± 3.0), 5 (77% ± 3.0) or 1 (76% ± 3.0). As in previous studies, this study suggests that RCA-1 lectin enhances binding of UTF-derived OPN to bovine oocytes, resulting in increased sperm egg binding and fertilization in vitro and a possible role in fertilizatio

Cytogenetic analyses of ocelot (Leopardus pardalis) and tigrinus (Leopardus tigrinus) oocytes collected after ovarian stimulation

Este estudo representa a primeira avaliação da maturação nuclear de oócitos por análise citogenética realizada em duas espécies de felídeos brasileiros ameaçados de extinção: L. pardalis (n=5) e L. tigrinus (n=4). Os animais foram submetidos à estimulação ovariana alternada com eCG-hCG e pFSH-pLH a cada quatro meses pelo período de dois anos, perfazendo um total de 6 intervenções. Os oócitos foram recuperados por vídeo-laparoscopia, caracterizados quanto à morfologia e utilizados para determinação dos estágios do ciclo meiótico por análise citogenética e maturação pela caracterização de metáfase II. Dos 33 oócitos de jaguatirica avaliados 12% (n=4) apresentaram cromossomos condensados em seu interior e dos 11 oócitos de gato-do-mato-pequeno avaliados 36% (n=4) apresentaram cromossomos condensados em seu interior, no entanto, nenhum oócito encontrava-se em metáfase II. Avaliação morfológica dos oócitos mostrou as mesmas características encontradas em outros mamíferos. Comparando os tratamentos, não houve diferença significativa (p>0,05) no número total de estruturas ovarianas (folículos e corpos lúteos recentes) observadas em estimulações alternadas sucessivas, nas duas espécies estudadas. Também não houve diferença significativa em relação ao total de estruturas ovarianas encontradas em cada tratamento (5,7±1,2 eCG/hCG; 7,9±0,9 pFSH/pLH) para L. pardalis e (2,6±0,7 eCG/hCG; 2,0±0,5 pFSH/pLH) para L. tigrinus. Apesar das limitações deste experimento e do número reduzido de oócitos avaliados podemos sugerir que a aspiração folicular após estimulação ovariana com eCG/hCG e pFSH/pLH alternadamente resulta na recuperação de oócitos imaturos, que necessitam de cultivo em meios específicos para atingir o estágio de Metáfase IIThis study represents the first assessment of oocyte's nuclear maturation by cytogenetical analysis in two endangered Brazilian felids: L. pardalis (n=5) and L. tigrinus (n=4). Females were treated 6 times with alternating eCG/hCG and pFSH/pLH protocols using an interval of 4 months between each treatment. Ovarian follicular development and oocytes recovery were performed through laparoscopy. Recovered oocytes were submitted to the morphological and cytogenetical analysis in order to evaluate the meiotic cycle and maturation (metaphase II), respectively. In 33 ocelot's oocytes observed 12% (n=4) showed condensed chromosomes and in 11 tigrinu's oocytes observed 36% (n=4) showed condensed chromosomes. However no oocytes in metaphase II were observed. Oocytes morphological evaluation showed the same characteristics were observed in others mammals. Our results suggest that L. pardalis and L. tigrinus do not show a decrease (p>0.05) in ovarian response after repeated and alternate exposure to different gonadotropin treatments. In both L. pardalis and L. tigrinus, no differences (p>0.05) were found regarding to the number of total ovarian structures (total follicles and CL) during successive gonadotropin treatments. There were no differences (p>0.05) regarding to the total number of ovarian structures in L. pardalis (5.7 ± 1.2 eCG/hCG and 7.9 ± 0.9 pFSH/pLH) or L. tigrinus (2.6 ± 0.7 eCG/hCG and 2.0 ± 0.5 pFSH/pLH). With these results we can suggest that follicular aspiration after ovarian stimulation with exogenous gonadotrophins results in immature oocytes, needing in vitro culture in specific mediums for metaphase II stage was observe