Saliva as a noninvasive biological sample to compare bioavailability of phenytoin formulations by LC-MS/MS

The use of noninvasive biological samples such as saliva, it is of great interest for therapeutic drug monitoring (TDM), including the anticonvulsants Phenytoin (PHT). A simple analytical methodology by liquid chromatography-tandem mass spectrometry was developed and validated to carry out a relative comparative bioavailability (RBA) study of two PHT formulations in human plasma and saliva and the subsequent correlation between both matrixes. A single-dose, randomized-sequence, open-label, two-way crossover study, was conducted in 24 healthy Latin American male volunteers. The bioequivalence of 200 mg PHT tablet was evaluated using plasma and saliva to determine Cmax, Tmax, AUC0-t and AUC0-∞. Figures of merit of the proposed methodology were as follows: linear ranges of 40-5055 ng/mL and 5-1340 ng/mL for plasma and saliva, respectively, with a correlation coefficient of (r)>0.999. The LOD and LOQ were 15 ng/mL -40ng/mL for plasma and 1.5 ng/mL – 5.0 ng/mL for saliva. Accuracy, precision (as %CV) and recovery were accepted according the bioequivalence criteria. Stability showed %bias<15%. The PHT saliva/PHT plasma ratios for all parameters were: 5.4, 2.2, 1.4 for Cmax, and 1.7, 1.2, 1.1 for AUC. Plasma and saliva results were correlated (R=0.9889 and R=0.9947 for Reference and Test, respectively). Saliva not only is a suitable matrix for RBA studies and TDM, but also a more convenient tool since it provides analogous information with mayor analytical, ethical, and biosafety advantages. However, an additional pre-study of product dissolution in oral cavity is suggested before carrying out complete RBA studies for prompt-release drugsFil: Baldo, Matias Nicolas. Dominguez Lab; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral; ArgentinaFil: Hunzicker, Gabriel Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Dominguez Lab; ArgentinaFil: Altamirano, Jorgelina Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto Argentino de Nivología, Glaciología y Ciencias Ambientales. Provincia de Mendoza. Instituto Argentino de Nivología, Glaciología y Ciencias Ambientales. Universidad Nacional de Cuyo. Instituto Argentino de Nivología, Glaciología y Ciencias Ambientales; ArgentinaFil: Murguia, Marcelo Cesar. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Hein, Gustavo Juan. Dominguez Lab; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral; Argentin

Bioequivalence study of Binap®, ibrutinib 140 mg capsules manufactured by Laboratorio Varifarma S.A., compared to the reference product Imbruvica®

El ibrutinib es un fármaco antineoplásico que se encuentra indicado principalmente en el tratamiento del linfoma de células del manto y leucemia linfocítica crónica. La acción terapéutica del ibrutinib es ejercida al reducir la actividad de la enzima tirosina quinasa de Bruton. En el presente estudio se reporta la bioequivalencia de Binap®, una nueva formulación de ibrutinib 140 mg, de Laboratorio Varifarma S.A., respecto del producto de referencia Imbruvica® 140 mg, de Janssen Cilag Farmacéutica S.A. La investigación consistió en un estudio abierto a dosis única de 140 mg de ibrutinib, en ayunas, en 36 voluntarios sanos masculinos. Se estableció un diseño cruzado, pareado, replicado, de dos secuencias y cuatro períodos (2 x 4) y con un período de lavado de 7 días entre cada período. El ibrutinib plasmático se determinó por medio de una metodología validada empleando cromatografía líquida de alta performance acoplado a un detector de espectrometría de masas de triple cuadrupolo en tándem (HPLC-MS/MS). Los resultados obtenidos indican que cuando se administra a sujetos sanos una dosis única de 140 mg, ambas formulaciones muestran en promedio perfiles farmacocinéticos prácticamente idénticos. Los parámetros farmacocinéticos evaluados fueron concentración máxima plasmática (Cmax), área bajo la curva farmacocinética a último tiempo de muestreo y extrapolada a infinito (ABC0-T y ABC0-∞), tiempo al cual se alcanza la concentración máxima plasmática (Tmax), tiempo medio de eliminación (T1/2) y constante de eliminación (Kel). El análisis estadístico de los datos para demostrar bioequivalencia se realizó sobre los parámetros farmacocinéticos Cmax, ABC0-T y ABC0-∞, conforme criterios de bioequivalencia nacionales e internacionales para un intervalo de confianza del 90% (IC90%). El análisis de varianza (ANOVA) con los datos logarítmicamente transformados arroja un coeficiente de variabilidad intra-sujeto (CVintra) similar tanto para Binap® como para Imbruvica®, del orden del 60% para Cmax y 46% para ABC0-T. Para el parámetro ABC0-T el punto medio estimado es 96,4 % (IC90% de 85,4 a 108,9 %), para ABC0-∞ el punto medio estimado es de 99,4 % (IC90% de 88,7 a 111,4 %), ambos dentro del rango de bioequivalencia de 80-125%, y para Cmax el punto medio estimado es de 85,1 % (IC90% de 72,2 a 100,2%), dentro del rango de bioequivalencia expandido de 69,8-143,2%, en función del CVintra obtenido (>50%). Los resultados de este estudio permiten concluir que Binap® (ibrutinib 140 mg) de Laboratorios Varifarma S.A. es bioequivalente a Imbruvica® 140 mg de Janssen Cilag S.A., por lo que ambos medicamentos pueden considerarse intercambiables en la práctica médica.Fil: Hunzicker, Gabriel Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Empresa Dominzguezlab S.r.l.; ArgentinaFil: Rodriguez Romero, María Pía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Empresa Dominzguezlab S.r.l.; ArgentinaFil: Baldo, Matias Nicolas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Empresa Dominzguezlab S.r.l.; ArgentinaFil: Acevedo, María Cecilia. Empresa Dominzguezlab S.r.l.; ArgentinaFil: Lorenzon, Guillermina. Empresa Dominzguezlab S.r.l.; ArgentinaFil: Fritz, María Carolina. Empresa Dominzguezlab S.r.l.; ArgentinaFil: Mansilla, Carolina. Empresa Dominzguezlab S.r.l.; ArgentinaFil: Vergara, Soledad. Empresa Dominzguezlab S.r.l.; ArgentinaFil: Rosenbrock, Luisina. Empresa Dominzguezlab S.r.l.; ArgentinaFil: Gossis, Silvina. Laboratorio Varifarma S.A; ArgentinaFil: Cembal, Sebastián. Laboratorio Varifarma S.A; ArgentinaFil: Dominguez, Mario C.. Empresa Dominzguezlab S.r.l.; ArgentinaFil: Bertoncini, Carlos Walter. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Empresa Dominzguezlab S.r.l.; Argentin

Pharmacokinetic and bioequivalence study of Tenofovir Disoproxil Fumarate under fasting conditions on Argentine healthy-volunteers. Optimization and validation of SPE-LC-MS/MS for determination of Emtricitabine, Lamivudine and Tenofovir in human plasma

A pharmacokinetic study based on single oral administration of Tenofovir disoproxil fumarate 300 mg (tablets) to Argentinean male volunteers under fasting conditions is presented. The obtained values for test and reference products were 238±62 and 261±73 ng mL-1 for Cmax; 1658±466 and 1801±529 ng mL-1 h for AUC0–48h; 1845±579 and 2015±639 ng mL-1 h for AUC0–∞, respectively. The 90% confidence intervals obtained by analysis of variance were 85.0-97.2% for ln-Cmax, 87.2-97.9% for ln-AUC0–48h and 85.5-98.1% for ln-AUC0–∞, which are within the acceptance range of 80-125%. Both products were bioequivalent in terms of rate and extent of drug absorption and therefore interchangeable. The analytical methodology was optimized and validated for determination of Emtricitabine (FTC), Lamivudine (3TC) and Tenofovir (TFV) in human plasma samples; which is the pharmaceutical combination most commonly used for treating HIV-infected patients. The analytical methodology was based on solid phase extraction (SPE) using Oasis® MCX mixed-mode cartridges coupled to Liquid Chromatography and electrospray tandem mass spectrometry (LC-ESI-MS/MS). The analytical methodology was validated according to the US Food and Drug Administration guidelines. Under optimized conditions, the analytical methodology lead to work within a clinical of 11-5434, 11-5452 and 13-397 ng mL-1 for FTC, 3TC and TFV, respectively; resulting wider than others previously reported. The intra and inter batch precision (%RSD) across three validation runs was less than 14%. The accuracy determined at four QC levels (LOQ, Low, Middle and High) was within 13%, in terms of percent relative error.Fil: Hunzicker, Gabriel Alejandro. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; ArgentinaFil: Hein, Gustavo Juan. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral; ArgentinaFil: Baldo, Matias Nicolas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral; ArgentinaFil: Hernández, Silvia Raquel. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; ArgentinaFil: Altamirano, Jorgelina Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto Argentino de Nivología, Glaciología y Ciencias Ambientales. Provincia de Mendoza. Instituto Argentino de Nivología, Glaciología y Ciencias Ambientales. Universidad Nacional de Cuyo. Instituto Argentino de Nivología, Glaciología y Ciencias Ambientales; Argentin

Liquid chromatography tandem-mass spectrometry (LC-MS/MS) and dried blood spot sampling applied to pharmacokinetics studies in animals: Correlation of classic and block design

A relative bioavailability study (RBA) of two phenytoin (PHT) formulations was conducted in rabbits, in order to compare the results obtained from different matrices (plasma and blood from dried blood spot (DBS) sampling) and different experimental designs (classic and block). The method was developed by liquid chromatography tandem-mass spectrometry (LC-MS/MS) in plasma and blood samples. The different sample preparation techniques, plasma protein precipitation and DBS, were validated according to international requirements. The analytical method was validated with ranges 0.20–50.80 and 0.12–20.32 mg ml1 , r> 0.999 for plasma and blood, respectively. Accuracy and precision were within acceptance criteria for bioanalytical assay validation (< 15 for bias and CV% and< 20 for limit of quantification (LOQ)). PHT showed long-term stability, both for plasma and blood, and under refrigerated and room temperature conditions. Haematocrit values were measured during the validation process and RBA study. Finally, the pharmacokinetic parameters (Cmax, Tmax and AUC0–t) obtained from the RBA study were tested. Results were highly comparable for matrices and experimental designs. A matrix correlation higher than 0.975 and a ratio of (PHT blood) ¼ 1.158 (PHT plasma) were obtained. The results obtained herein show that the use of classic experimental design and DBS sampling for animal pharmacokinetic studies should be encouraged as they could help to prevent the use of a large number of animals and also animal euthanasia. Finally, the combination of DBS sampling with LC-MS/MS technology showed to be an excellent tool not only for therapeutic drug monitoring but also for RBA studies.Fil: Baldo, Matias Nicolas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral; ArgentinaFil: Angeli, Emmanuel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral; ArgentinaFil: Gareis, Natalia Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral; ArgentinaFil: Hunzicker, Gabriel Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral; ArgentinaFil: Murguia, Marcelo Cesar. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; ArgentinaFil: Ortega, Hugo Hector. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral; ArgentinaFil: Hein, Gustavo Juan. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral; Argentin

Present status of Accelerator-Based BNCT

Aim: This work aims at giving an updated report of the worldwide status of Accelerator-Based BNCT (AB-BNCT). Background: There is a generalized perception that the availability of accelerators installed in hospitals, as neutron sources, may be crucial for the advancement of BNCT. Accordingly, in recent years a significant effort has started to develop such machines. Materials and methods: A variety of possible charged-particle induced nuclear reactions and the characteristics of the resulting neutron spectra are discussed along with the worldwide activity in suitable accelerator development. Results: Endothermic 7Li(p,n)7Be and 9Be(p,n)9B and exothermic 9Be(d,n)10B are compared. In addition to having much better thermo-mechanical properties than Li, Be as a target leads to stable products. This is a significant advantage for a hospital-based facility. 9Be(p,n)9B needs at least 4-5 MeV bombarding energy to have a sufficient yield, while 9Be(d,n)10B can be utilized at about 1.4 MeV, implying the smallest possible accelerator. This reaction operating with a thin target can produce a sufficiently soft spectrum to be viable for AB-BNCT. The machines considered are electrostatic single ended or tandem accelerators or radiofrequency quadrupoles plus drift tube Linacs. Conclusions: 7Li(p,n)7Be provides one of the best solutions for the production of epithermal neutron beams for deep-seated tumors. However, a Li-based target poses significant technological challenges. Hence, Be has been considered as an alternative target, both in combination with (p,n) and (d,n) reactions. 9Be(d,n)10B at 1.4 MeV, with a thin target has been shown to be a realistic option for the treatment of deep-seated lesions.Fil: Kreiner, Andres Juan. Comisión Nacional de Energía Atómica. Centro Atómico Constituyentes. Gerencia de Investigación y Aplicaciones; Argentina. Universidad Nacional de San Martín. Escuela de Ciencia y Tecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Bergueiro, Rodolfo Javier. Comisión Nacional de Energía Atómica. Centro Atómico Constituyentes. Gerencia de Investigación y Aplicaciones; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Cartelli, Daniel Enrique. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de San Martín. Escuela de Ciencia y Tecnología; Argentina. Comisión Nacional de Energía Atómica. Centro Atómico Constituyentes. Gerencia de Investigación y Aplicaciones; ArgentinaFil: Baldo, Matias Nicolas. Comisión Nacional de Energía Atómica. Centro Atómico Constituyentes. Gerencia de Investigación y Aplicaciones; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Castello, Walter Braulio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Comisión Nacional de Energía Atómica. Centro Atómico Constituyentes. Gerencia de Investigación y Aplicaciones; ArgentinaFil: Asoia, Javier Gomez. Comisión Nacional de Energía Atómica. Centro Atómico Constituyentes. Gerencia de Investigación y Aplicaciones; ArgentinaFil: Padulo, Javier. Comisión Nacional de Energía Atómica. Centro Atómico Constituyentes. Gerencia de Investigación y Aplicaciones; ArgentinaFil: Suárez Sandín, Juan Carlos. Comisión Nacional de Energía Atómica. Centro Atómico Constituyentes. Gerencia de Investigación y Aplicaciones; ArgentinaFil: Igarzabal, Marcelo. Comisión Nacional de Energía Atómica. Centro Atómico Constituyentes. Gerencia de Investigación y Aplicaciones; ArgentinaFil: Erhardt, Julian. Comisión Nacional de Energía Atómica. Centro Atómico Constituyentes. Gerencia de Investigación y Aplicaciones; ArgentinaFil: Mercuri, Daniel. Comisión Nacional de Energía Atómica. Centro Atómico Constituyentes. Gerencia de Investigación y Aplicaciones; ArgentinaFil: Valda, Alejandro A.. Comisión Nacional de Energía Atómica. Centro Atómico Constituyentes. Gerencia de Investigación y Aplicaciones; Argentina. Universidad Nacional de San Martín. Escuela de Ciencia y Tecnología; ArgentinaFil: Minsky, Daniel Mauricio. Comisión Nacional de Energía Atómica. Centro Atómico Constituyentes. Gerencia de Investigación y Aplicaciones; Argentina. Universidad Nacional de San Martín. Escuela de Ciencia y Tecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Debray, Mario Ernesto. Comisión Nacional de Energía Atómica. Centro Atómico Constituyentes. Gerencia de Investigación y Aplicaciones; Argentina. Universidad Nacional de San Martín. Escuela de Ciencia y Tecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Somacal, Héctor Rubén. Comisión Nacional de Energía Atómica. Centro Atómico Constituyentes. Gerencia de Investigación y Aplicaciones; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de San Martín. Escuela de Ciencia y Tecnología; ArgentinaFil: Capoulat, Maria Eugenia. Universidad Nacional de San Martín. Escuela de Ciencia y Tecnología; Argentina. Comisión Nacional de Energía Atómica. Centro Atómico Constituyentes. Gerencia de Investigación y Aplicaciones; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Herrera, Maria Silvia. Universidad Nacional de San Martín. Escuela de Ciencia y Tecnología; Argentina. Comisión Nacional de Energía Atómica. Centro Atómico Constituyentes. Gerencia de Investigación y Aplicaciones; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: del Grosso, Mariela Fernanda. Comisión Nacional de Energía Atómica. Centro Atómico Constituyentes. Gerencia de Investigación y Aplicaciones; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Gagetti, Leonardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de San Martín. Escuela de Ciencia y Tecnología; Argentina. Comisión Nacional de Energía Atómica. Centro Atómico Constituyentes. Gerencia de Investigación y Aplicaciones; ArgentinaFil: Suarez Anzorena, Manuel. Comisión Nacional de Energía Atómica. Centro Atómico Constituyentes. Gerencia de Investigación y Aplicaciones; ArgentinaFil: Canepa, Nicolas. Comisión Nacional de Energía Atómica. Centro Atómico Constituyentes. Gerencia de Investigación y Aplicaciones; ArgentinaFil: Real, Nicolas. Comisión Nacional de Energía Atómica. Centro Atómico Constituyentes. Gerencia de Investigación y Aplicaciones; ArgentinaFil: Gun, Marcelo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ingeniería; ArgentinaFil: Tacca, Hernán Emilio. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ingeniería; Argentin

Present status of Accelerator-Based BNCT

AimThis work aims at giving an updated report of the worldwide status of Accelerator-Based BNCT (AB-BNCT).BackgroundThere is a generalized perception that the availability of accelerators installed in hospitals, as neutron sources, may be crucial for the advancement of BNCT. Accordingly, in recent years a significant effort has started to develop such machines.Materials and methodsA variety of possible charged-particle induced nuclear reactions and the characteristics of the resulting neutron spectra are discussed along with the worldwide activity in suitable accelerator development.ResultsEndothermic 7Li(p,n)7Be and 9Be(p,n)9B and exothermic 9Be(d,n)10B are compared. In addition to having much better thermo-mechanical properties than Li, Be as a target leads to stable products. This is a significant advantage for a hospital-based facility. 9Be(p,n)9B needs at least 4–5[[ce:hsp sp="0.25"/]]MeV bombarding energy to have a sufficient yield, while 9Be(d,n)10B can be utilized at about 1.4[[ce:hsp sp="0.25"/]]MeV, implying the smallest possible accelerator. This reaction operating with a thin target can produce a sufficiently soft spectrum to be viable for AB-BNCT. The machines considered are electrostatic single ended or tandem accelerators or radiofrequency quadrupoles plus drift tube Linacs.Conclusions7Li(p,n)7Be provides one of the best solutions for the production of epithermal neutron beams for deep-seated tumors. However, a Li-based target poses significant technological challenges. Hence, Be has been considered as an alternative target, both in combination with (p,n) and (d,n) reactions. 9Be(d,n)10B at 1.4[[ce:hsp sp="0.25"/]]MeV, with a thin target has been shown to be a realistic option for the treatment of deep-seated lesions

The clinical and molecular spectrum of the KDM6B-related neurodevelopmental disorder

International audienceDe novo variants are a leading cause of neurodevelopmental disorders (NDDs), but because every monogenic NDD is different and usually extremely rare, it remains a major challenge to understand the complete phenotype and genotype spectrum of any morbid gene. According to OMIM, heterozygous variants in KDM6B cause "neurodevelopmental disorder with coarse facies and mild distal skeletal abnormalities." Here, by examining the molecular and clinical spectrum of 85 reported individuals with mostly de novo (likely) pathogenic KDM6B variants, we demonstrate that this description is inaccurate and potentially misleading. Cognitive deficits are seen consistently in all individuals, but the overall phenotype is highly variable. Notably, coarse facies and distal skeletal anomalies, as defined by OMIM, are rare in this expanded cohort while other features are unexpectedly common (e.g., hypotonia, psychosis, etc.). Using 3D protein structure analysis and an innovative dual Drosophila gain-of-function assay, we demonstrated a disruptive effect of 11 missense/in-frame indels located in or near the enzymatic JmJC or Zn-containing domain of KDM6B. Consistent with the role of KDM6B in human cognition, we demonstrated a role for the Drosophila KDM6B ortholog in memory and behavior. Taken together, we accurately define the broad clinical spectrum of the KDM6B-related NDD, introduce an innovative functional testing paradigm for the assessment of KDM6B variants, and demonstrate a conserved role for KDM6B in cognition and behavior. Our study demonstrates the critical importance of international collaboration, sharing of clinical data, and rigorous functional analysis of genetic variants to ensure correct disease diagnosis for rare disorders