Identificação de actinobacterias patogênicas em queijo por PCR e MALDI-TOF.

No Brasil é comum o consumo de queijo do tipo Minas artesanal produzido a partir de leite cru, contudo este fato pode representar risco para a saúde pública, pois muitos microorganismos patogênicos têm sido identificados nestes produtos. O objetivo deste trabalho foi identificar actinobactérias patogênicas em queijo por métodos de PCR e MALDI-TOF. Foram analisadas 54 amostras de queijo tipo Minas oriundos da região do Serro de Minas Gerais, Brasil

Matrix Assisted Laser Desorption Ionization-Time-of-Flight mass spectrometry identification of Mycobacterium bovis in Bovinae.

In this study, Matrix Assisted Laser Desorption Ionization-Time-of-Flight (MALDITOF) mass spectrometry was used to identify Mycobacterium bovis from cattle and buffalo tissue isolates from the North and South regions of Brazil, grown in solid medium and previously identified by Polymerase Chain Reaction (PCR) based on Region of Difference 4 (RD4), sequencing and spoligotyping. For this purpose, the protein extraction protocol and the mass spectra reference database were optimized for the identification of 80 clinical isolates of mycobacteria. As a result of this optimization, it was possible to identify and differentiate M. bovis from other members of the Mycobacterium tuberculosis complex with 100% specificity, 90.91% sensitivity and 91.25% reliability. MALDI-TOF MS methodology described herein provides successful identification of M. bovis within bovine/bubaline clinical samples, demonstrating its usefulness for bovine tuberculosis diagnosis in the future

Diagnóstico de tuberculose bovina: avanços na identificação de Mycobacterium bovis por espectrometria de massas MALDI-TOF.

bitstream/item/215558/1/COT-146-Final-em-Alta.pd

Avaliação de métodos para extração de dna de culturas de micobactérias.

molecular. O objetivo deste trabalho foi avaliar diferentes métodos para extração de DNA utilizando culturas de micobactérias

Produção de proteínas recombinantes para avaliação de resposta celular contra Mycobacterium bovis.

Tuberculose bovina é uma enfermidade infecciosa, causada pela bactéria Mycobacterium bovis. Esta enfermidade tem acometido rebanhos de vários países, inclusive do Brasil, causando problemas econômicos e de saúde pública. Animais infectados com M. bovis, primariamente, apresentam resposta imune celular e, devido a isso, o teste intradérmico com PPD (Purified Protein Derivative) é amplamente utilizado nos programas de controle da doença. Entretanto, a tuberculinização possui algumas desvantagens, como a detecção de reações cruzadas e necessidade de imobilização dos animais em dois momentos distintos. Além disso, bovinos submetidos à intradermorreação tornam-se temporariamente anérgicos, e em casos de reações inconclusivas, não podem ser re-testados por pelo menos 60 dias. Uma forma de minimizar esses problemas é o desenvolvimento de testes de diagnósticos in vitro, nos quais a capacidade de antígenos estimularem a liberação de citocinas é mensurada. O objetivo deste trabalho foi produzir as proteínas PE5 e ESAT-6 de M. bovis em sistema heterólogo de expressão para posterior avaliação da indução de resposta celular de bovinos. Os genes pe5 e esat-6 foram amplificados por PCR (Polymerase Chain Reaction), clonados em plasmídeo pGEM-T Easy e subclonados em plasmídeo pRSet-C. A expressão dos genes foi verificada por eletroforese em gel de SDS-poliacrilamida, bem como por Western blot com anticorpo monoclonal anti-histidina. Foi possível observar proteínas de 15 e 16 kDa, que correspondem, respectivamente, às massas moleculares estimadas das proteínas recombinantes PE5 e ESAT-6 fusionadas a cauda de histidina. No Western blot, as proteínas recombinantes foram reconhecidas pelo anticorpo monoclonal. ESAT-6 é um dos antígenos de M. bovis mais bem documentados, demonstrando sensibilidade de moderada a alta em diversos testes de diagnóstico e a proteína PE-5 demonstrou anteriormente alta especificidade. Portanto, a utilização destas proteínas, individualmente ou em conjunto, poderá incrementar o diagnóstico da tuberculose bovina em testes de tuberculinização intradérmica e de dosagem de interferon-γ

Molecular diagnosis of Anaplasma marginale in cattle: quantitative evaluation of a real-time PCR (Polymerase Chain Reaction) based on msp5 gene. 1

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MALDI-TOF mass spectrometry identification and detection of relevant pathogens in beef cattle.

Mycobacterium bovis, Brucella abortus and Salmonella species account for significant economic losses in cattle production worldwide, besides being public health threats. We have established MALDI-TOF (Matrix Assisted Laser Desorption Ionization ? Time-of-Flight) mass spectrometry with modified protein extraction methods and improved the presently available reference spectra libraries, in order to effectively detect those pathogens from bovine samples.Oral communications