Rôle des récepteurs Fgfs dans la formation des cartilages crâniens du zebrafish

Les récepteurs des « fibroblast growth factor » (Fgfrs) sont des récepteurs membranaires à domaine tyrosine kinase. On en dénombre 5 jusqu’à présent. C’est l’interaction ligand-récepteur qui permet le passage de l’information et, entre autres, l’activation de facteurs de transcription impliqués dans le développement cellulaire et/ou dans la morphogenèse. Notre étude concerne la fonction des Fgfrs dans le développement des cartilages crâniens chez le zebrafish. Le profil d’expression de 4 récepteurs a été étudié à différents stades du développement par hybridation in situ. Ces résultats suggèrent que, au niveau de la région pharyngienne, les Fgfr1a et Fgfr2 sont exprimés dans l’endoderme de 24 hpf à 3 dpf. Le Fgfr3 est également exprimé dans l’endoderme pharyngien aux mêmes stades mais dans le cartilage à 3 dpf. La fonction des récepteurs 1a, 2 et 3 a été étudiée par l’injection de morpholinos dirigés contre leur ARNm. Le marquage des cartilages par l’Alcian Blue montre qu’à 4 dpf, l’absence de chacun des récepteurs engendre des modifications dans la structure et la morphologie des cartilages pharyngiens. L’utilisation d’un transgénique dominant négatif pour les récepteurs nous a permis de déterminer que la signalisation Fgf est cruciale aux alentours de 30 hpf pour la chondrogenèse pharyngienne. Nous avons mis en évidence que les Fgfr1a et Fgfr2 participent à la chondrogenèse pharyngienne via le contrôle d’une cascade génétique endodermique Runx3-Egr1-Sox9b-Fsta sans affecter la différenciation et migration des CCNc/chondrocytes. De plus, notre étude préliminaire portant sur le Fgfr3 nous permet d’émettre l’hypothèse que ce récepteur est impliqué dans le processus de chondrogenèse et que celui-ci joue son rôle avant la migration des CCNc à 24 hpf

ICSI diagnostic: a way to prevent total fertilization failure after 4 unsuccessful IUI

Résumé Contexte L’objectif de cette étude rétrospective est. de montrer la pertinence de répartir les ovocytes ponctionnés entre deux méthodes de fécondation, la fécondation classique (IVF) et l’injection de sperme intra cytoplamisque (ICSI), lors d’un premier cycle de stimulation après 4 essais insémination intra-utérine (IUI) infructueuses. Méthodes Cette étude rétrospective inclut les patientes ayant réalisés 4. inséminations intra utérine sans grossesse entre 2008 et 2015. Les paramètres du sperme sont normaux. Nous avons analysé les cycles de stimulation de rang 1 des patientes où minimum 4 ovocytes ont été prélevés et un seul embryon transféré. Résultats Répartir les ovocytes entre les deux techniques de fécondation réduit le taux d’échec de fécondation total lors du premier cycle de stimulation. Aucune différence statistique n’a été observée entre les taux de 2 pronuclei (PN) pour les deux méthodes de fécondation. Toutefois une réduction significative est. observée pour les taux de 3 PN, 1 PN et 0 PN en faveur de l’ICSI. Conclusion La répartition des ovocytes lors d’un premier essai de fécondation in vitro réalisé après 4 échecs d’insémination intra-utérine, permet d’augmenter les chances d’aboutir à un transfert d’embryons. Cette procédure réduit les risques d’avoir un échec total de fécondation chez des couples infertile et permet d’obtenir des informations pour les essais ultérieurs

Etude fonctionelle du facteur d'épissage SR, SRSF5a, durant le développement embryonnaire du zebrafish

To investigate the role of the splicing factor SRSF5a during zebrafish embryonic development, we performed SRSF5a knockdown by morpholino microinjection and we analysed control and morphant transcriptomes using RNA sequencing.Functional study of SR splicing factors during zebrafish embryonic development using molecular and genetic approache

RUNX3, EGR1 and SOX9B form a regulatory cascade required to modulate BMP-signaling during cranial cartilage development in zebrafish

The cartilaginous elements forming the pharyngeal arches of the zebrafish derive from cranial neural crest cells. Their proper differentiation and patterning are regulated by reciprocal interactions between neural crest cells and surrounding endodermal, ectodermal and mesodermal tissues. In this study, we show that the endodermal factors Runx3 and Sox9b form a regulatory cascade with Egr1 resulting in transcriptional repression of the fsta gene, encoding a BMP antagonist, in pharyngeal endoderm. Using a transgenic line expressing a dominant negative BMP receptor or a specific BMP inhibitor (dorsomorphin), we show that BMP signaling is indeed required around 30 hpf in the neural crest cells to allow cell differentiation and proper pharyngeal cartilage formation. Runx3, Egr1, Sox9b and BMP signaling are required for expression of runx2b, one of the key regulator of cranial cartilage maturation and bone formation. Finally, we show that egr1 depletion leads to increased expression of fsta and inhibition of BMP signaling in the pharyngeal region. In conclusion, we show that the successive induction of the transcription factors Runx3, Egr1 and Sox9b constitutes a regulatory cascade that controls expression of Follistatin A in pharyngeal endoderm, the latter modulating BMP signaling in developing cranial cartilage in zebrafish.status: publishe

RUNX3, EGR1 and SOX9B Form a Regulatory Cascade Required to Modulate BMP-Signaling during Cranial Cartilage Development in Zebrafish

<div><p>The cartilaginous elements forming the pharyngeal arches of the zebrafish derive from cranial neural crest cells. Their proper differentiation and patterning are regulated by reciprocal interactions between neural crest cells and surrounding endodermal, ectodermal and mesodermal tissues. In this study, we show that the endodermal factors Runx3 and Sox9b form a regulatory cascade with Egr1 resulting in transcriptional repression of the <em>fsta</em> gene, encoding a BMP antagonist, in pharyngeal endoderm. Using a transgenic line expressing a dominant negative BMP receptor or a specific BMP inhibitor (dorsomorphin), we show that BMP signaling is indeed required around 30 hpf in the neural crest cells to allow cell differentiation and proper pharyngeal cartilage formation. Runx3, Egr1, Sox9b and BMP signaling are required for expression of <em>runx2b</em>, one of the key regulator of cranial cartilage maturation and bone formation. Finally, we show that e<em>gr1</em> depletion leads to increased expression of <em>fsta</em> and inhibition of BMP signaling in the pharyngeal region. In conclusion, we show that the successive induction of the transcription factors Runx3, Egr1 and Sox9b constitutes a regulatory cascade that controls expression of Follistatin A in pharyngeal endoderm, the latter modulating BMP signaling in developing cranial cartilage in zebrafish.</p> </div

Bmp signaling is down-regulated in <i>egr1</i> morphants.

<p>Pharyngeal cartilage precursor cells were visualized by immunohistochemistry using anti-GFP antibodies (green) in <i>fli-</i>GFP embryos. Activity of the BMP signaling pathway was assessed using antibodies against phospho-Smad1/5/8 (red) in 32 hpf embryos. Ventral view of pharyngeal arches, scale bar 40 µm. (A–F) Pharyngeal cartilage precursor cells were visualized by immunohistochemistry using anti-GFP antibodies (green) in <i>fli1-</i>GFP embryos. Activity of the BMP signaling pathway was assessed using antibodies against phospho-Smad1/5/8 (red) in 32 hpf embryos. Ventral view of pharyngeal arches, scale bar 40 µm. (A,B,C) 4 ng MOcon injected embryos, (D, E, F) 4 ng MOegr1 spl injected embryos. <i>fli1-</i>GFP embryos express the GFP transgene in cartilage precursors and endothelial cells in control (A) and in e<i>gr1</i> morphants (D). In contrast, phospho-Smad1/5/8 is is clearly down regulated in e<i>gr1</i> morphants (E) compared to control embryos (B). (C,F) Overlay images of the two anti-body signals clearly show that phospho-Smad1/5/8 is present in GFP-epressing cartilage precursor cells in control embryos (C), while no colocalization is observed in e<i>gr1</i> morphants (F). (a1) first arch, (a2) second arch, (a3) third arch, (a4) fourth arch, (bv) blood vessel.</p