Rangelia vitalii infection in a dog from São Paulo city, Brazil: case report

Canine rangeliosis is an extravascular hemolytic disease caused by the protozoan Rangelia vitalii, which is transmitted by ticks of the species Amblyomma aureolatum. Te most common clinical signs are apathy, hyperthermia and spontaneous bleeding. Anemia and thrombocytopenia are the most common hematological fndings. Tis work reports a clinical case of canine Rangeliosis treated at a private veterinary hospital, in São Paulo city in 2017. A dog was treated at a veterinary hospital in the north of São Paulo, with progressive weight loss, apathy and tail injury. Anemia and thrombocytopenia were observed on the hemogram. Rangelia vitalii DNA was detected in animal blood by real-time PCR (qPCR). In addition to the supportive treatment, doxycycline and subcutaneous imidocarb applications were used. Te sample collected afer treatment with the antibiotic continued to present protozoal DNA. Te disease should be considered as a diferential diagnosis and there is a great need for further studies about the therapy used.A rangeliose canina é uma doença hemolítica extravascular causada pelo protozoário Rangelia vitalii, o qual é transmitido por carrapatos da espécie Amblyomma aureolatum. Os sinais clínicos mais comuns são apatia, hipertermia e sangramentos espontâneos. Os achados hematológicos mais comuns são anemia e trombocitopenia. Este trabalho teve como objetivo relatar um caso clínico de Rangeliose canina tratada em um hospital veterinário particular, na cidade de São Paulo no ano de 2017. Um cão foi atendido em um hospital veterinário da zona norte de São Paulo, com emagrecimento progressivo, apatia e lesão na cauda. No hemograma foram observadas anemia e trombocitopenia. Através da PCR em tempo real (qPCR) do sangue do animal constatou-se a presença de DNA de Rangelia vitalii. Além do tratamento de suporte, utilizou-se doxiciclina e aplicações subcutâneas de imidocarb. A amostra coletada após o tratamento com o antibiótico continuou apresentando DNA do protozoário. A enfermidade deve ser considerada como diagnóstico diferencial e há uma grande necessidade de maiores estudos acerca da terapia utilizada

Ornithodoros faccinii n. sp. (Acari: Ixodida: Argasidae) parasitizing the frog Thoropa miliaris (Amphibia: Anura: Cycloramphidae) in Brazil

Abstract\ud \ud Background\ud Most argasid ticks from the Neotropical region are parasites of mammals and birds, with a few records from reptiles. Many species of the genus Ornithodoros are known only through larval descriptions, and their chaetotaxy and morphological characteristics have been used to separate the taxa. In the present study, we describe the larva and the nymph of first instar of a new species of the genus Ornithodoros that was collected from frogs of the species Thoropa miliaris.\ud \ud \ud Methods\ud Larvae of Ornithodoros were collected from frogs of the species T. miliaris at waterfalls in the state of Rio de Janeiro, southeastern Brazil. The larval and nymphal description was based on optical and scanning electron microscopy. Molecular analysis using the argasid 16S rRNA sequences available in GenBank was also conducted.\ud \ud \ud Results\ud \ud Ornithodoros faccinii sp. n. is closely related to Ornithodoros clarki Jones & Clifford, Ornithodoros marinkellei Kohls, Clifford & Jones, Ornithodoros capensis Neumann and Ornithodoros sawaii Kitaoka & Susuki. However, the larval morphology of the new species is unique. The mitochondrial 16S rDNA partial sequence of O. faccinii generated in the present study was deposited in GenBank under the number KP861242.\ud \ud \ud Conclusions\ud The larvae collected from Thoropa miliaris are a new species, Ornithodoros faccinii n. sp. This is the first report of argasid ticks on frogs in Brazil, the second on frogs and the third on Amphibia in the Neotropical region

Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Leishmania amazonensis antibodies in domestic dogs in the western Brazilian Amazon region

Amostras de sangue de 99 cães domiciliados foram coletadas no meio urbano (n = 33) e rural (n = 66) do município de Lábrea, estado do Amazonas, Brasil. Dentre as amostras rurais, 40 foram obtidas em comunidades ribeirinhas e 26 em comunidades indígenas, ambas ao longo do rio Purus. Durante a amostragem foi aplicado um questionário com informações sobre sexo, idade, viver em áreas secas ou alagadiças, acesso ou não às ruas (cães urbanos) e acesso à floresta. A presença de anticorpos contra Toxoplasma gondii, Neospora caninum, Leishmania infantum chagasi e Leishmania amazonensis foi detectada pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI) com ponto de corte de, respectivamente, 16, 50, 40 e 40. Associação entre as variáveis qualitativas e a positividade para cada um dos parasitos foi avaliada pelo teste do χ2 (p < 0,05). A ocorrência de animais com anticorpos contra T. gondii, N. caninum e L. amazonensis foi de, respectivamente, 61,6%; 7,1% e 8,1%. Nenhuma amostra foi positiva para L. infantum chagasi. A variável viver em área urbana (p=0,041) apresentou associação com ocorrência de T. gondii e o número de cães positivos a T. gondii aumentou com a idade (p = 0,0006). A variável sexo (machos) apresentou associação com N. caninum (p = 0,018) e nenhuma variável apresentou associação com L. amazonensis. Os títulos de anticorpos contra T. gondii variaram de 64 a 32.768; contra N. caninum de 100 a 800 e contra L. amazonensis de 40 a 640. T. gondii e L. amazonensis são dois agentes de importantes zoonoses e encontram-se ativos na região. O município estudado, especialmente as comunidades ribeirinhas, possuem peculiaridades geográficas, sociais e ecológicas distintas e necessitam maior atenção das autoridades para o controle desses agentes.Blood samples from 99 domestic dogs were collected in the urban area (n = 33) and rural area (n = 66) of the municipality of Lábrea, state of Amazonas, Brazil. Among the rural samples, 40 were collected in riverine communities and 26 were collected in Indian communities, both along the Purus River. During the sampling, a questionnaire was applied to obtain information relating to sex, age, living in dryland or seasonally flooded areas, access to the streets (for urban dogs) and access to forests. The presence of antibodies against Toxoplasma gondii, Neospora caninum, Leishmania infantum chagasi and Leishmania amazonensis was detected by means of the indirect fluorescent antibody test (IFAT) with cutoffs of 16, 50, 40 and 40, respectively. The association of each qualitative variable, with each parasite and positivity for each of them, were evaluated using the χ2 test (p < 0.05). T. gondii, N. caninum and L. amazonensis antibodies were found, respectively, in 61.6%, 7.1% and 8.1% of the animals examined. None of the samples were positive for L. infantum chagasi. The variable of living in an urban area (p = 0.041) presented an association with occurrence of T. gondii and the positivity for T. gondii increased with age of the dogs (p = 0.0006). The variable of male sex presented an association with N. caninum (p = 0.018) and no variable presented any association with L. amazonensis. The antibody titers against T. gondii ranged from 64 to 32,768; against N. caninum from 100 to 800; and against L. amazonensis from 40 to 640. Both T. gondii and L. amazonensis are important zoonotic agents and are active in this region. The municipality studied, and especially its riverine communities, has geographic, social and ecological peculiarities. This region requires greater attention from the authorities for controlling these agents

Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Leishmania amazonensis antibodies in domestic dogs in the western Brazilian Amazon region

Amostras de sangue de 99 cães domiciliados foram coletadas no meio urbano (n = 33) e rural (n = 66) do município de Lábrea, estado do Amazonas, Brasil. Dentre as amostras rurais, 40 foram obtidas em comunidades ribeirinhas e 26 em comunidades indígenas, ambas ao longo do rio Purus. Durante a amostragem foi aplicado um questionário com informações sobre sexo, idade, viver em áreas secas ou alagadiças, acesso ou não às ruas (cães urbanos) e acesso à floresta. A presença de anticorpos contra Toxoplasma gondii, Neospora caninum, Leishmania infantum chagasi e Leishmania amazonensis foi detectada pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI) com ponto de corte de, respectivamente, 16, 50, 40 e 40. Associação entre as variáveis qualitativas e a positividade para cada um dos parasitos foi avaliada pelo teste do χ2 (p < 0,05). A ocorrência de animais com anticorpos contra T. gondii, N. caninum e L. amazonensis foi de, respectivamente, 61,6%; 7,1% e 8,1%. Nenhuma amostra foi positiva para L. infantum chagasi. A variável viver em área urbana (p=0,041) apresentou associação com ocorrência de T. gondii e o número de cães positivos a T. gondii aumentou com a idade (p = 0,0006). A variável sexo (machos) apresentou associação com N. caninum (p = 0,018) e nenhuma variável apresentou associação com L. amazonensis. Os títulos de anticorpos contra T. gondii variaram de 64 a 32.768; contra N. caninum de 100 a 800 e contra L. amazonensis de 40 a 640. T. gondii e L. amazonensis são dois agentes de importantes zoonoses e encontram-se ativos na região. O município estudado, especialmente as comunidades ribeirinhas, possuem peculiaridades geográficas, sociais e ecológicas distintas e necessitam maior atenção das autoridades para o controle desses agentes.Blood samples from 99 domestic dogs were collected in the urban area (n = 33) and rural area (n = 66) of the municipality of Lábrea, state of Amazonas, Brazil. Among the rural samples, 40 were collected in riverine communities and 26 were collected in Indian communities, both along the Purus River. During the sampling, a questionnaire was applied to obtain information relating to sex, age, living in dryland or seasonally flooded areas, access to the streets (for urban dogs) and access to forests. The presence of antibodies against Toxoplasma gondii, Neospora caninum, Leishmania infantum chagasi and Leishmania amazonensis was detected by means of the indirect fluorescent antibody test (IFAT) with cutoffs of 16, 50, 40 and 40, respectively. The association of each qualitative variable, with each parasite and positivity for each of them, were evaluated using the χ2 test (p < 0.05). T. gondii, N. caninum and L. amazonensis antibodies were found, respectively, in 61.6%, 7.1% and 8.1% of the animals examined. None of the samples were positive for L. infantum chagasi. The variable of living in an urban area (p = 0.041) presented an association with occurrence of T. gondii and the positivity for T. gondii increased with age of the dogs (p = 0.0006). The variable of male sex presented an association with N. caninum (p = 0.018) and no variable presented any association with L. amazonensis. The antibody titers against T. gondii ranged from 64 to 32,768; against N. caninum from 100 to 800; and against L. amazonensis from 40 to 640. Both T. gondii and L. amazonensis are important zoonotic agents and are active in this region. The municipality studied, and especially its riverine communities, has geographic, social and ecological peculiarities. This region requires greater attention from the authorities for controlling these agents

Serological survey of Rickettsia in equids from Vale do Paraíba, São Paulo, Brazil, and their tick identification and molecular investigation of Rickettsia

A febre maculosa brasileira é uma doença grave e letal para seres humanos causada pela bactéria Rickettsia rickettsii. No estado de São Paulo, SP, Brasil, o agente etiológico desta enfermidade é transmitido pelo carrapato Amblyomma sculptum. Conforme descrito na literatura científica, os cavalos infectados com esta bactéria produzem uma forte resposta imune e podem ser importantes sentinelas para a detecção da doença. A presente investigação realizou um levantamento sorológico em cavalos de cinco fazendas do Vale do Paraíba, São Paulo, Brasil, à procura de anticorpos contra Rickettsia rickettsii, Rickettsia parkeri, Rickettsia amblyommatis, Rickettsia rhipicephali e Rickettsia bellii. Em cada fazenda, também foram coletados carrapatos identificados taxonomicamente e examinados por PCR em tempo real para o DNA de Rickettsia spp. Foram coletadas amostras de sangue de 206 cavalos e coletados 334 carrapatos desses animais entre os meses de janeiro e dezembro de 2017. Oitenta carrapatos foram identificados como A. sculptum e 254 Dermacentor nitens. Das amostras de sangue, 7,3% soroconverteram para Rickettsia spp., sendo que, 0,97% apresentaram soropositividade homóloga para R. bellii. Nenhum dos 80 carrapatos de A. sculptum foi positivo com o emprego de PCR em tempo real para Rickettsia spp. Embora não tenham sido detectados carrapatos infectados por Rickettsia spp em cinco fazendas do Vale do Paraíba, os animais apresentaram reações sorológicas positivas para este agente. Assim, outros estudos abrangentes deverão ser realizados na área investigando hospedeiros e vetores, gerando dados para medidas de controle da transmissão da febre maculosa brasileira.Brazilian spotted fever is a serious and lethal illness for humans and is caused by the Rickettsia rickettsii bacteria. In the state of São Paulo/SP (Brazil), the etiological agent of this disease is transmitted by the Amblyomma sculptum tick. It was already shown that horses infected with this bacteria produce a strong immune response and could be important sentinels for the detection of the disease in a proper region. The present investigation performed a serological survey in horses from five farms of Vale do Paraíba, São Paulo state, Brazil, searching for antibodies against, Rickettsia rickettsii, Rickettsia parkeri, Rickettsia amblyommatis, Rickettsia rhipicephali, and Rickettsia bellii. In each farm, ticks were also collected that were taxonomically identified and examined by real-time PCR for Rickettsia spp DNA. Blood samples were collected from 206 horses, and 334 ticks were picked up from these animals from January to December 2017. Eighty ticks wereA. sculptum and 254 Dermacentor nitens. Of the blood samples, 7.3% seroconverted to Rickettsia spp. Of these, 0.97% had a positive serological response to R. bellii. None of the 80 A. sculptum ticks were positive through real-time PCR for Rickettsia spp. Although there was no detection of ticks infected by Rickettsia spp in five farms of Paraíba Valley, the horses presented serological positive reactions against this agent. Thus, further large studies should be conducted in the area targeting hosts and vectors to generate data for control measures of the transmission of Brazilian spotted fever.&nbsp

Rural area of the Brazilian Pantanal wetlands associated with the occurrence of anti-Leishmania spp. antibodies in dogs

Neste trabalho foi realizada uma avaliação sobre a presença de anticorpos anti-Leishmania infantum chagasi em cães domésticos das áreas urbanas e rurais da região do Pantanal brasileiro usando técnicas sorológicas. Um total de 429 cães foram amostrados em três áreas do bioma do Pantanal, incluindo os municípios de Poconé, Santo Antônio de Leverger e Barão de Melgaço, em Mato Grosso, e o município de Corumbá, em Mato Grosso do Sul. A reação de imunofluorescência indireta (RIFI) foi utilizada para detectar anticorpos (ponto de corte de 40) de Leishmania infantum chagasi como antígeno. Devido à possibilidade de reação cruzada entre as espécies do gênero Leishmania, as amostras positivas na RIFI para L. infantum chagasi foram também avaliadas na RIFI utilizando L. amazonensis e L. braziliensis como antígenos. As amostras positivas na RIFI para L. infantum chagasi foram avaliadas utilizando o ensaio de imunoadsorção ligado à enzima (ELISA). Os resultados mostraram a presença de anticorpos contra L. infantum chagasi em 23 (5,36%; IC 95%: 3,50% -8,05%) cães e pelo menos um cão soro-reativo foi encontrado em todos os municípios avaliados neste estudo. Os títulos de anticorpos variaram de 40 a 5.120 e todas as amostras positivas na RIFI foram positivas no ELISA. Entre os 23 cães positivos, nove também reagiram para L. amazonensis e L. braziliensis. A ocorrência de anticorpos anti-L. infantum chagasi em cães foi maior nas áreas rurais (7,06%) do que nas áreas urbanas (2,50%) (P < 0,05). Com base neste estudo, concluímos que cães de áreas rurais do Pantanal tiveram contato com espécies de Leishmania, o que é uma informação relevante, dada a sua importância para a saúde pública.An evaluation was made of the presence of anti-Leishmania infantum chagasi antibodies in domestic dogs from the urban and rural areas of Brazil’s Pantanal wetland region using serological techniques. A total of 429 dogs were sampled in three areas of the Pantanal biome, including the municipalities of Poconé, Santo Antônio de Leverger, and Barão de Melgaço, in the state of Mato Grosso, and in the municipality of Corumbá, in the state of Mato Grosso do Sul. The immunofluorescence assay (IFA) was used to detect antibodies (cut-off point 40) using Leishmania infantum chagasi antigen. Because of the possibility of cross-reactivity between species of the genus Leishmania, samples that were positive in the IFA against L. infantum chagasi were also tested by IFA in the same conditions, using L. amazonensis and L. braziliensis antigens. IFA-positive samples to L. infantum chagasi were also evaluated using Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA). The results showed the presence of antibodies against L. infantum chagasi in 23 (5.36%; 95% CI: 3.50%-8.05%) dogs and at least one seroreactive dog was found in each of the municipalities evaluated in this study. Antibody titers ranged from 40 to 5,120, and all IFA positive samples were positive in the ELISA. Among the 23 positive dogs, nine were also were seroreactive for L. amazonensis and L. braziliensis antigens. The occurrence of anti- L. infantum chagasi antibodies in dogs was higher in rural areas (7.06%) than in urban areas (2.50%) (P < 0.05). Based on this study, we concluded that dogs from rural areas of the Pantanal wetlands were in contact with Leishmania species, which is relevant information given their importance to public health

Presence of anti-Toxoplasma gondii, -Neospora caninum, -Leishmania spp. and -Ehrlichia canis antibodies in free-ranging maned wolves (Chrysocyon brachyurus) in the northeastern region of the state of São Paulo, Brazil

O lobo-guará (Chrysocyon brachyurus) habita o ecossistema de Cerrado e é considerado o maior canídeo da América do Sul e uma espécie ameaçada de extinção pela "International Union for Conservation of Nature" (IUNC). O objetivo desse estudo foi investigar a presença de anticorpos anti-Toxoplasma gondii, -Neospora caninum, -Leishmania spp. e -Ehrlichia canis em lobos-guará da região nordeste do estado de São Paulo, Brasil. Das 17 amostras de soro testadas por meio da reação de imunofluorescência indireta (RIFI), 88,2% (15/17), 17,6% (3/17) e 52,9% (9/17) apresentaram anticorpos anti-T. gondii, -Leishmania spp. e -E. canis, respectivamente. Todos os animais testados foram soronegativos para N. caninum. Esses resultados indicam a exposição dos lobos-guará dessa região aos agentes pesquisados. A presença de um complexo industrial, agricultura extensiva e fragmentação de habitat na região nordeste do estado de São Paulo, favorece a proximidade desses animais silvestres a ambientes urbanos o que pode contribuir para a transmissão de doenças entre os animais silvestres, domésticos e o homem.The maned wolf (Chrysocyon brachyurus), an inhabitant of the Brazilian savanna, is considered the largest canid of South America and is classified as a near-threatened species by the International Union for Conservation of Nature (IUNC). The purpose of this study was to investigate the presence of antibodies against Toxoplasma gondii, -Neospora caninum, -Leishmania spp., and -Ehrlichia canis in free-ranging maned wolves in the northeastern region of the state of São Paulo, Brazil. Of the 17 serum samples tested by the indirect fluorescent antibody test (IFAT), 88.2% (15/17), 17.6% (3/17) and 52.9% (9/17) showed anti-T. gondii, -Leishmania spp., and -E. canis antibodies, respectively. None of the studied maned wolves tested positive for N. caninum antibodies. Our results indicated the exposure of free-ranging maned wolves to the agents in question. The presence of industrial complexes, extensive agriculture and habitat fragmentation in the northeastern region of the state of São Paulo puts these wild animals in proximity to urban areas, possibly contributing to the transmission of diseases between wild and domestic animals and human beings

Ornithodoros brasiliensis Aragão (Acari: Argasidae): description of the larva, redescription of male and female, and neotype designation

Ornithodoros brasiliensis is an endemic tick from Brazil and is very aggressive to humans, resulting in pain, fever and intense inflammatory response. After more than 50 years without report, this species was recently found in rural areas of São Francisco de Paula municipality, State of Rio Grande do Sul, southern Brazil, from where it was originally described. Herein, we describe the larva and redescribe the adults of O. brasiliensis based on scanning electron microscopy. Since the type was lost we designate the neotype specimen under the number IBSP 10409. In addition, the relationship between O. brasiliensis and other species from the Neotropical region that share the morphological characteristics of Ornithodoros with dorsal humps on tarsi, and also live under the soil and feed on hosts other than bats, are discussed. Molecular analysis inferred from a portion of the 16S rRNA mitochondrial gene is also provided and it placed O. brasiliensis in a cluster supported by a maximal bootstrap value (100%) with Ornithodoros parkeri, Ornithodoros rostratus, and Ornithodoros turicata.Fil: Barros Battesti, Darci M.. Governo do Estado de Sao Paulo. Secretaria da Saude. Instituto Butantan; BrasilFil: Onofrio, Valeria C.. Governo do Estado de Sao Paulo. Secretaria da Saude. Instituto Butantan; BrasilFil: Nieri Bastos, Fernanda A.. Universidade de São Paulo. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal; BrasilFil: Soares, João Fábio. Universidade de São Paulo. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal; BrasilFil: Marcili, Arlei. Universidade de São Paulo. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal; BrasilFil: Famadas, Kátia M.. Universidad Federal Rural de Rio de Janeiro; BrasilFil: Faccini, Joao Luiz H.. Universidad Federal Rural de Rio de Janeiro; BrasilFil: Ramirez, Diego G.. Universidade de São Paulo. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal; BrasilFil: Doyle, Rovaina L.. Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor; BrasilFil: Martins, João Ricardo. Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor; BrasilFil: Junior, José R.. Universidade Federal do Rio Grande do Sul; BrasilFil: Guglielmone, Alberto Alejandro. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Santa Fe. Estación Experimental Agropecuaria Rafaela; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe; ArgentinaFil: Labruna, Marcelo B.. Universidade de São Paulo. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal; Brasi

Ticks and rickettsiae from wildlife in Belize, Central America

Abstract\ud \ud Background\ud The agents of spotted fevers in Latin America are Rickettsia rickettsii, R. parkeri, Rickettsia sp. strain Atlantic rainforest, and R. massiliae. In Continental Central America, R. rickettsii remains the only known pathogenic tick-borne rickettsia. In the present study, ticks were collected from wild mammals in natural areas of Belize. Besides providing new data of ticks from Belize, we investigated rickettsial infection in some of these ticks. Our results provide ticks harboring rickettsial agents for the first time in Central America.\ud \ud \ud Methods\ud Between 2010 and 2015, wild mammals were lived-trapped in the tropical broadleaf moist forests of central and southern Belize. Ticks were collected from the animals and identified to species by morphological and molecular analysis (DNA sequence of the tick mitochondrial 16S RNA gene). Some of the ticks were tested for rickettsial infection by molecular methods (DNA sequences of the rickettsial gltA and ompA genes).\ud \ud \ud Results\ud A total of 84 ticks were collected from 8 individual hosts, as follows: Amblyomma pacae from 3 Cuniculus paca; Amblyomma ovale and Amblyomma coelebs from a Nasua narica; A. ovale from an Eira Barbara; A. ovale, Amblyomma cf. oblongoguttatum, and Ixodes affinis from a Puma concolor; and A. ovale, A. coelebs, A. cf. oblongoguttatum, and I. affinis from two Panthera onca. Three rickettsial agents were detected: Rickettsia amblyommii in A. pacae, Rickettsia sp. strain Atlantic rainforest in A. ovale, and Rickettsia sp. endosymbiont in Ixodes affinis.\ud \ud \ud Conclusions\ud The present study provides unprecedented records of ticks harboring rickettsial agents in the New World. An emerging rickettsial pathogen of South America, Rickettsia sp. strain Atlantic rainforest, is reported for the first time in Central America. Besides expanding the distribution of 3 rickettsial agents in Central America, our results highlight the possible occurrence of Rickettsia sp. strain Atlantic rainforest-caused spotted fever human cases in Belize, since its possible vector, A. ovale, is recognized as one of the most important human-biting ticks in the Neotropical region.This work was supported by Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de\ud São Paulo (FAPESP) and Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de\ud Nível Superior (CAPES), Brazil. Field-work was funded by the UK Darwin\ud Initiative and Panther