In vitro embryo production in ovine: critical vision of the method and of the field results

A metodologia de produção in vitro de embriões de ovinos implica no desenvolvimento de meios de maturação, fertilização e cultivo que permitam aumentar a taxa de clivagem e desenvolvimento, tanto para o investimento biotecnológico em programas comerciais, quanto para sua utilização em clonagem e transgenia dessa espécie animal. Do ponto de vista da pesquisa, os ovócitos podem ser obtidos pelas técnicas de punção e slicing a partir de ovários oriundos de matadouros, ou através de aspiração folicular por laparoscopia. Como vantagem, este método permite o uso de uma mesma doadora estimulada hormonialmente em intervalos periódicos, mantida sob rigoroso controle sanitário, o que é de vital importância para a produção de biofármacos em programas que utilisem os ovinos como modelo biológico. Por outro lado, em nosso país a demanda pela multiplicação de animais de alto valor genético, seja pela produtividade ou pelo elevado valor comercial dos mesmos, impõe o desenvolvimento, adaptação e otimização das diferentes metodologias desenvolvidas ao longo dos ultimos anos em laboratórios de referência mundiais. Nesse contexto, cresce de importância o perfeito conhecimento da fisiologia dessa espécie e das raças criadas em nosso país, e da problemática da produção in vitro de seus embriões. Respeitando essas premissas, gerar o desenvolvimento de protocolos que permitam não apenas aumentar a população de ovócitos passíveis de maturação in vitro, mas de sua competência ao desenvolvimento ao estágio de blastocisto, ou, alternativamente, sua transferência a receptoras em estágios precoces do desenvolvimento, evitando assim as conhecidas perdas durante o desenvolvimento in vitro, e o baixo percentual de gestações que chegam a termo, com cordeiro saudáveis. Trata-se de um desafio, que já apresenta os primeiros resultados em nosso país, tanto na produção comercial de embriões produzidos in vitro, quanto em programas de clonagem e transgenia.The methodology of in vitro embryo production in ovine requires the development of maturation, fertilization and culture media, in order to increase cleavage and development rates. This, in turn, would improve the implement of biotechnological programs for commercial purposes, as well as the use of this technique for cloning and transgenesis in this species. From the point of view of research, the oocytes can be obtained by puncture or slicing of ovaries collected from abattoirs, or by laparospic follicular aspiration (LOPU). One of the advantages of the LOPU is allowing the use of the same hormonally stimulated donor several times in periodic intervals. This could be extremely important, for instance, when using the ovine as a biological model for the production of biodrugs, as long as animals are submitted to a strict sanitary control. On the other hand, in Brazil, due to their improved productivity or high commercial value, there is a demand for animals of high genetic value, which requires the development, adaptation and maximization of the different methodologies designed throughout the last years in reference laboratories worldwide. In this context, the perfect knowledge of the ovine physiology, especially from the breeds raised in Brazil, as well as the problems of the ovine in vitro embryo production are becoming more and more important. Therefore, it is fundamental to create protocols to allow not only the increase on the population of oocytes with enough quality to undergo in vitro maturation, but competence to reach the blastocyst stage, or alternatively, the transference of early stages embryos to the recipients, avoiding the common embryo losses during the in vitro development and the low rates of full-term pregnancies, with healthy lambs. The first results of this challenge are already being observed in Brazil, not only in the in vitro embryo production for commercial purposes, but in programs of cloning and transgenesis

Chorioptic mange in a flock of goats in Brazil

The authors report the first finding of Chorioptes bovis parasiting a flock of goats in Brazil. They also add commentaries about the current taxonomic status of the genus and about some of the comparative morphologic features of the two species of choriopticmites found associated with goats until now.Os autores relatam o primeiro encontro noBrasil de Chorioptes bovis, parasitando um rebanho decaprinos. Acrescentam também comentários sobre a situação taxonômica atual do gênero e sobre algumas das características morfológicas comparativas das dua sespécies de Chorioptes até o presente momento,encontradas associadas com caprinos

Sarna corióptica em rebanho de caprinos no Brasil

Os autores relatam o primeiro encontro noBrasil de Chorioptes bovis, parasitando um rebanho decaprinos. Acrescentam também comentários sobre a situação taxonômica atual do gênero e sobre algumas das características morfológicas comparativas das dua sespécies de Chorioptes até o presente momento,encontradas associadas com caprinos

Mecanismos endócrinos e moleculares envolvidos na formação do corpo lúteo e na luteólise: revisão de literatura

The corpus luteum (CL) is a transitory endocrinal structure formed by steroidogenic small luteal cells (SLC) and large luteal cells (LLC) that associated with fibroblast and a wide web of capillaries form a structure specialized in synthesis of progesterone (P4). In general, for the synthesis of P4 in the steroidogenic luteal cells, cholesterol joints specific receptors on the cellular membrane and is transported to the cytosol. Later, cholesterol goes to an internal mitochondrial membrane and by the action of the enzyme P450scc is transformed into pregnenolone. In the smooth endoplasmic reticulum pregnenolone is converted to P4 by the enzyme 3²-hydroxysteroid dehydrogenase (3²-HSD). The steroidogenic acute regulatory protein (StAR), the peripheral benzodiazepine receptor (PBR) and endozepine participate in the transport of cholesterol to the different mitochondrial compartments. Therefore, it is supposed that the capacity of synthesis of P4 in the CL is related to the cellular concentration of receptors that catch cholesterol, to the enzymes P450scc and 3²-HSD and to the cholesterol cellular transport proteins. In bovine, the LLC are responsible for more than 80% of P4 production in the CL. The lowest concentration of cholesterol transport proteins in the mitochondria seems to limit the synthesis of P4 in the SLC. P4 supports a proper uterine environment for the development of conceptuses, depending on the specie. In most species, the lack of fertilization or the conceptus incapacity to signalize its presence in the uterus establishes luteolysis. This physiological event is characterized by the functional and structural regression of the CL. For the establishment and maintenance of pregnancy it is necessary to block luteolysis through different mechanisms among species. In primates and equids it occurs by the secretion of specific gonadotropins and in ruminants by antiluteolytic factors. This review has the objective to characterize the endocrine and molecular mechanisms involved in the formation of the corpus luteum and luteolysis.O corpo lúteo (CL) é uma estrutura endócrina transitória formada por células luteais esteroidogênicas pequenas (SLC) e grandes (LLC), que associadas aos fibroblastos e a uma ampla rede de capilares constituem uma estrutura especializada na síntese de progesterona (P4). De maneira geral, para a síntese de P4 nas células luteais esteroidogênicas, o colesterol se liga a receptores específicos na membrana celular e é transportado ao citosol. Posteriormente, o colesterol dirige-se a membrana mitocondrial interna e por ação da enzima P450scc transforma-se em pregnenolona. No retículo endoplasmático liso a pregnenolona é convertida a P4 pela enzima 3²-hidroxiesteróide deidrogenase (3²-HSD). A proteína de regulação aguda da esteroidogênese (StAR), o receptor benzodiazepínico tipo periférico (PBR) e a endozepina participam no transporte do colesterol para os diferentes compartimentos mitocondriais. Assim, supõe-se que a capacidade de síntese de P4 no CL esteja relacionada à concentração celular de receptores que captam o colesterol, às enzimas P450scc e 3²-HSD, e às proteínas celulares transportadoras de colesterol. Na espécie bovina, as LLC são responsáveis por mais de 80% da produção deste hormônio no CL. A menor concentração de proteínas transportadoras de colesterol na mitocôndria parecem limitar a síntese de P4 nas SLC. A P4 favorece um meio ambiente uterino apropriado para o desenvolvimento do(s) concepto(s), dependendo da espécie. Na maioria das espécies, a ausência da fertilização ou a incapacidade do concepto em sinalizar sua existência no útero estabelecem a luteólise. Tal evento fisiológico caracteriza-se pela regressão funcional e estrutural do(s) corpo(s) lúteo(s). Para o estabelecimento e a manutenção da prenhez torna-se necessário o bloqueio da luteólise por mecanismos que diferem entre as espécies. Em primatas e equídeos esse reconhecimento ocorre pela secreção de gonadotrofinas específicas e em ruminantes pela presença de fatores anti-luteolíticos. Esta revisão tem como objetivo caracterizar os mecanisnos endócrinos e moleculares envolvidos na formação do corpo lúteo e na luteólise

Controle da síntese de prostaglandina F2± no endométrio bovino in vitro

Synthesis of endometrial prostaglandin F2± (PGF2±) results from a complex cascade of highly coordinated intracellular events. Production of PGF2± can be stimulated by mellitin and 12, 13 phorbol dibutyrate (PDBu). Objective of the present study was to verify whether basal or stimulated synthesis of PGF2± was dependent on de novo protein synthesis. In Experiment 1, endometrial explants from cyclic, non-lactating cross-bred beef cows (n=2) on day 15 of the estrous cycle were incubated in quadruplicate in culture KHB culture medium or medium supplemented with 10-6M PDBu, 10-6M melittin or 10-5M melittin. Medium samples were collected immediately and 60 minutes after treatment administration and concentration of PGF2± in medium were measured by radioimmunoassay. Concentrations of PGF2± in medium were higher (P<0.06) after treatment with PDBu in comparison with control and melittin. In Experiment 2, endometrial explants from cyclic, non-lactating cross-bred beef cows (n=4) on day 17 of the estrous cycle were incubated in quadruplicate in medium supplemented with 0, 50, 100 or 200mg cyclohexamide (CHX) and 0 or 100ng/ml PDBu, in a 4 x 2 factorial arrangement. Medium samples were collected immediately and 60 minutes after administration of treatments and concentrations of PGF2± measured by radioimmunoassay. Endometrial integrity was was evaluated by histology. Treatment with PDBu stimulated production of PGF2± (P<0.01), regardless of concentration of CHX used. The CHX did not affect production of PGF2±, either in the presence or absence of PDBu. Histological integrity of explants was preserved. It was concluded that both basal and PDBu-stimulated PGF2± production are not dependent on new protein sythesis.A síntese de prostaglandina F2± (PGF2±) endometrial, resulta de uma complexa cascata de eventos intracelulares que ocorrem de maneira altamente coordenada. A síntese de PGF2± pode ser estimulada na presença da melitina e do forbol 12,13 dibutirato (PDBu). O objetivo do presente estudo foi verificar se a produção basal e a estimulação aguda de PGF2± são dependentes da síntese de proteínas. No experimento 1, explantes obtidos de fêmeas bovinas (n=2), cíclicas, não lactantes, no dia 15 do ciclo estral foram incubados em quadruplicata, com meio de cultivo (KHB) ou KHB suplementado com PDBu 10-6M, melitina 10-6M ou melitina 10-5M. Amostras do meio foram coletadas 0 e 60 minutos após os tratamentos e as concentrações de PGF2± foram mensuradas por radioimunoensaio. Com 60 minutos após os tratamentos houve aumento das concentrações médias de PGF2± (P<0,06) em resposta ao tratamento com PDBu comparado ao grupo KHB e melitina. No experimento 2, explantes endometriais de fêmeas bovinas (n=4), não gestantes, no 17° dia do ciclo estral, pesando de 80 a 100mg foram incubados em KHB suplementado com 0, 50, 100 ou 200mg/mL de CHX e 0 ou 100ng/mL de PDBu em um arranjo fatorial 2 x 4, em quadruplicata. Amostras do meio foram coletadas 0 e 60 minutos após os tratamentos e as concentrações de PGF2± foram mensuradas por radioimunoensaio. A integridade dos explantes endometriais tratados com CHX foi avaliada por cortes histológicos. Foi observado aumento na produção de PGF2± em resposta ao tratamento com PDBu (P<0,01), entretanto, não houve diferenças na produção de PGF2± pelos tecidos tratados com diferentes concentrações de CHX, associadas ou não ao PDBu. A integridade histológica dos explantes foi preservada. Conclui-se que a produção basal e a estimulação aguda da síntese de PGF2± não são dependentes da síntese de novas proteínas

Chronic pancreatits in goats: first report in South America

This study reports the clinical and laboratory profile of an adult Saanen goat with chronic pancreatitis admitted in the Cattle and Small Ruminant Practice. The main complaint was loss of weight in the absence of dysphagia and anorexia. Physical examination showed normal vital function, cachexia, body condition score equal (ECC) to 2 (1 to 5), and polyphagia. Parasitological examination of feces and radial immunodiffusion for caprine arthritis encephalitis presented negative results. Laboratory exams showed fasting hyperglycemia, glucosuria, ketonuria and aciduria. Serum amylase activity was 10.5U/L, lower than the values obtained from two healthy animals kept in the CBPR (21.2U/L and 52.2U/L), once reference values for amylase in goats are not available. Insulin assessment, however, was not carried out because there are no laboratories in Brazil that work with goat insulin. After two episodes of bronchopneumonia, the animal was euthanized and necropsied. Hystopathological examination of the pancreas showed serious chronic-active pancreatitis, with marked acinar fibrosis and atrophy associated to rarefaction of islets of Langerhans. Besides, there were ductal hyperplasia with irregularities, and mucoid metaplasia. Thus, clinical, laboratorial and histopathological findings indicate that the animal presented primary chronic pancreatitis, compromising the endocrine and exocrine pancreas.Trabalho apresentado ao 9º Congresso Brasileiro de Buiatria, Goiânia, 2011

Efficient recovery of in vivo mature and immature oocytes from jaguars (Panthera onca) and pumas (Puma concolor) by Laparoscopic Ovum Pick-Up (LOPU)

The jaguar and the puma play an essential role in balancing the ecosystem. Developing reproductive biotechnologies for such species could permit the exchange of genetic material across in situ and ex situ populations, encompassing the concept of One Conservation. Therefore, the purpose of the current study was to compare different gonadotropin stimulation strategies in conjunction with laparoscopic ovum pick-up (LOPU) technology for the recovery of immature and mature oocytes from these species. Adult female pumas (n = 10) and jaguars (n = 11) underwent 12 and 16 LOPU treatments, respectively. Hormonal stimulation was performed with eCG (750 IU for pumas; 800 IU for jaguars; im), and they were randomized into two treatment groups: Group 1 (G1) received hCG (500 IU, im) approximately 85 h after eCG administration to promote oocyte maturation and recover in vivo matured oocytes; and Group 2 (G2) did not receive hCG to recover immature oocytes. Between the two treatments, a total of 416 and 160 viable oocytes were recovered, 205 and 80 from G1 and 211 and 80 from G2-treated females from pumas and jaguars, respectively. We found that LOPU is a safe technique for getting high-quality oocytes from wild cats, such as pumas and jaguars, and that it may be included in conservation efforts. In pumas and jaguars, protocols employing eCG for ovarian stimulation are effective, as is the use of hCG to stimulate in vivo oocyte maturation prior to collection