12 research outputs found

    Atividade imunomodulatória de complexos altamente diluídos sobre células de medula óssea murina e linhagem leucêmica humana

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    Orientadora : Profa. Drª Dorly de Freitas BuchiTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Defesa: Curitiba, 31/08/2010Bibliografia: 93-109Resumo: A medula óssea apresenta uma vascularização especial e um microambiente altamente protegido, o que proporciona um habitat ideal para a manutenção das células-tronco hematopoiéticas (HSCs) e sua diferenciação. Além das HSCs, outro grupo celular muito importante presente nesse microambiente é o das células-tronco mesenquimais (MSCs), as quais compõem, juntamente com outros grupos celulares e moléculas, o estroma medular. Nosso laboratório estuda complexos altamente diluídos há mais de 10 anos e, no presente trabalho, foram utilizados os seguintes compostos: Chelidonium majus e associações (M1); Cinnamon ou Cinnamomum verum e associações (M2); Curcuma longa e associações (M4); Gelsemium sempervirens e associações (M5); Aconitum napellus e associações (M6) e Calcarea carbonica e associações (M8), todos preparados segundo técnicas homeopáticas. Esse trabalho tem como objetivo o aprofundamento dos mecanismos de ação de diferentes complexos de medicamentos altamente diluídos e, para isso, realizamos experimentos utilizando células de medula óssea de camundongos saudáveis, portadores de tumores de melanoma e células humanas da linhagem eritroblástica leucêmica K-562, sendo que os tratamentos foram administrados in vitro e in vivo. Após as análises verificamos que os complexos agiram sobre as células medulares de camundongos, mas não alteraram as células leucêmicas, nos parâmetros analisados. As alterações observadas demonstraram que os complexos modificaram o perfil das populações medulares indicando a ocorrência de proliferação e/ou diferenciação, recrutamento, homing (retorno para o microambiente medular) e manutenção das células, contribuindo para a manutenção de uma situação de equilíbrio.Abstrac: The bone marrow has a specialized vascular anatomy and the bone shield environment provides an ideal milieu for hematopoietic stem-cell (HSCs) maintenance and development into mature cells. This microenvironment comprises macrophages, endothelial cells, fibroblasts, adipocytes, osteogenic cells, mesenchymal stem cells (MSCs), cytokines, and extracellular matrix. The primary bone marrow stroma function is to provide structural support upon which hematopoiesis occurs. Our lab has been working with highly diluted complexes for over 10 years and in this work we have used the following products: Chelidonium majus and associations (M1), Cinnamon or Cinnamomum verum and associations (M2), Curcuma longa and associations (M4), Gelsemium sempervirens and associations (M5), Aconitum napellus and associations (M6), and Calcarea carbonica and associations (M8). We have evaluated the in vitro and in vivo effects of treatment in mice bone marrow cells and human leukemic lineage K-562 by several assays. After data analysis we observed that treatment alters bone marrow populations profile but does not modify any of tested parameters from leukemic lineage cells. The results indicate that treatment induces cell proliferation and/or differentiation, recruitment, homing, maintenance, and contribution to homeostasis

    Atividade biológica de diversos carboidratos sobre macrófagos "in vitro"

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    Orientador: Marcello IacominiMonografia(Bacharelado) - Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciencias Biológicas. Curso de Graduaçao em Ciencias BiológicasResumo : Estudos recentes têm demonstrado que polissacarídeos isolados de plantas, fungos liquenizados e frutos podem apresentar algum tipo de atividade biológica, como por exemplo, atividade bactericida (COHN, 1978), antiviral (DAMONTE et ai., 1994), anticoagulante (NISHINO et aJ., 1991) e antitumoral (MA et ai., 1991). Também tem sido estudada a atividade biológica de oligossacarídeos, como exemplo a heparina, o qual apresentam atividade anticoagulante e antitrombótica (PANGRAZZI et ai., 1985).Neste trabalho foram utilizados vários polímeros de origens diferentes e com características químicas diversificadas para tornar possível a verificação da diferença de estrutura na atividade biológica. Os experimentos foram realizados com objetivo de verificar a viabilidade celular e a produção de metabólitos pelos macrófagos, os quais indicam a ativação celular. Os polímeros utilizados foram a galactoglucomanana nativa e sulfatada de Cladonia ibitipocae, a fração etanólica 5% extraída de Phy/lantus niruri, a fração alcalina 2% extraída de Agaricus blazei, o sobrenadante etanólico obtido de Spondias cytherea, a arabinogalactana extraída do exudato vegetal de Anadenanthera colubrina e a arabinoxilana ácida obtida da degradação do exsudato vegetal de Lívistona chinensis. Para os experimentos biológicos, as células foram obtidas por lavagem da cavidade peritoneal de camundongos Mus musculus e então foram centrifugadas, contadas e plaqueadas. Após o plaqueamento as células foram incubadas por 2 horas em atmosfera de CO2 5% para que ocorresse a adesão. Após este período, os poços foram lavados com PBS morno para que as células não aderidas fossem retiradas e então foram adicionadas as soluções com as drogas. Para o experimento de produção do H20 2, durante a incubação das células juntamente com as drogas. foram retiradas alíquotas nos tempos O, 30, 90 e 150 minutos para que fosse possível a quantificação do H20 2 formado. O resultado obtido foi diferente em cada material utilizado, sendo que em alguns materiais observou-se um aumento da produção deste metabólito proporcional às concentrações das drogas utilizadas e ao tempo de incubação (C. ibitipocae nativa e sulfatada e P. niruri 5%), já em outros materiais utilizados observou-se uma diminuição desta produção com o passar do tempo de experimento (A. blazei 2% e S. cytherea). Alguns dos materiais utilizados demonstraram uma inibição da produção deste metabólito causada pelo polímero (C. ibitipocae nativa, A. colubrina e L. chinensis degradada). Para os experimentos para a medida da produção de NO, foram utilizados os polímeros que apresentaram estimulação dos macrófagos para a produção de H20 2. e mais o polissacarídeo da galactoglucomana nativa de Cladonia. furcata. O polissacarídeo nativo de C. ibitipocae não apresentou aumento da produção de NO em nenhuma das concentrações utilizadas, já o material sulfatado apresentou estimulação na concentração de 200llg mL. O material nativo de C. furcata apresentou uma alta estimulação na concentração de 10llg/mL, sendo que nas maiores concentrações utilizadas essa estimulação não foi mais demonstrada. Este dado parece indicar uma inibição da produção de NO pelo polissacarídeo quando este é utilizado em altas concentrações. O oligossacarídeo de P. niruri 5%, como o material de C. ibitipocae nativa não apresentou aumento da produção de NO em nenhuma das concentrações utilizadas. A principal conclusão retirada deste trabalho foi que os polímeros que mais estimularam os macrófagos, tanto para a produção de H20 2 como de NO sem causar inibição desta atividade foram o polissacarídeo sulfatado de C. ibitipocae e o oligossacarídeo de P. niruri 5%

    Perspectivas e desafios regulatórios no uso de células-tronco em métodos alternativos ao uso de animais

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    Introduction: The use of stem cells for toxicological evaluations seems to be a promising strategy since it allows a greater prediction of human effects. However, in Brazil, there is no specific legislation regulating the use of stem cells for non-therapeutic purposes, technological development, diagnosis or as an alternative method to animal testing. Objective: To review the literature and to provide an overview of the current situation of the non-therapeutic use of stem cells in Brazil and in the world. Method: A non-systematic bibliographic survey was carried out bringing together scientific articles and legislation. Results: This review brings the current approach of Brazilian legislation regarding the non-therapeutic use of human material and briefly discusses international regulatory approaches that allow the non-therapeutic use of stem cells. On the other hand, the Brazilian legislation for use of blood and blood products is quite broad and mature and could serve as a model for the non-therapeutic use of stem cells or other materials of human origin. Conclusions: The encouragement of the debate by the interested bodies and entities is the first step to initiate the development of specific legislation that could allow the scientific and technological development of Brazil in order to follow the world’s biotechnological advances.Introdução: Utilizar células-tronco para avaliações toxicológicas parece ser uma estratégia promissora para permitir uma maior predição de efeitos em humanos. Entretanto, no Brasil, não existe legislação específica que regulamente o uso de células-tronco para fins não terapêuticos de desenvolvimento tecnológico, diagnóstico ou como método alternativo ao uso de animais. Objetivo: Revisar a literatura e fundamentar um panorama da situação atual do uso não terapêutico de células-tronco no Brasil e no mundo. Método: Realizado levantamento bibliográfico não sistemático reunindo artigos científicos e legislação. Resultados: Essa revisão traz a abordagem atual da literatura científica e da legislação brasileira e discorre brevemente sobre abordagens regulatórias internacionais no que concerne ao uso não terapêutico de células-tronco. Em contrapartida, a legislação brasileira é bastante abrangente e madura na regulamentação de sangue e hemoderivados e pode servir de modelo para o uso não terapêutico de células-tronco ou outros materiais de origem humana. Conclusões: O incentivo do debate pelos órgãos e entidades interessadas é o primeiro passo para iniciar o desenvolvimento de uma legislação específica que permita o desenvolvimento científico-tecnológico do Brasil de maneira a acompanhar os avanços biotecnológicos mundiais

    Atividade imunomodulatória de complexos altamente diluídos sobre células de medula óssea murina e linhagem leucêmica humana

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    Orientadora : Profa. Drª Dorly de Freitas BuchiTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Defesa: Curitiba, 31/08/2010Bibliografia: 93-109Resumo: A medula óssea apresenta uma vascularização especial e um microambiente altamente protegido, o que proporciona um habitat ideal para a manutenção das células-tronco hematopoiéticas (HSCs) e sua diferenciação. Além das HSCs, outro grupo celular muito importante presente nesse microambiente é o das células-tronco mesenquimais (MSCs), as quais compõem, juntamente com outros grupos celulares e moléculas, o estroma medular. Nosso laboratório estuda complexos altamente diluídos há mais de 10 anos e, no presente trabalho, foram utilizados os seguintes compostos: Chelidonium majus e associações (M1); Cinnamon ou Cinnamomum verum e associações (M2); Curcuma longa e associações (M4); Gelsemium sempervirens e associações (M5); Aconitum napellus e associações (M6) e Calcarea carbonica e associações (M8), todos preparados segundo técnicas homeopáticas. Esse trabalho tem como objetivo o aprofundamento dos mecanismos de ação de diferentes complexos de medicamentos altamente diluídos e, para isso, realizamos experimentos utilizando células de medula óssea de camundongos saudáveis, portadores de tumores de melanoma e células humanas da linhagem eritroblástica leucêmica K-562, sendo que os tratamentos foram administrados in vitro e in vivo. Após as análises verificamos que os complexos agiram sobre as células medulares de camundongos, mas não alteraram as células leucêmicas, nos parâmetros analisados. As alterações observadas demonstraram que os complexos modificaram o perfil das populações medulares indicando a ocorrência de proliferação e/ou diferenciação, recrutamento, homing (retorno para o microambiente medular) e manutenção das células, contribuindo para a manutenção de uma situação de equilíbrio.Abstrac: The bone marrow has a specialized vascular anatomy and the bone shield environment provides an ideal milieu for hematopoietic stem-cell (HSCs) maintenance and development into mature cells. This microenvironment comprises macrophages, endothelial cells, fibroblasts, adipocytes, osteogenic cells, mesenchymal stem cells (MSCs), cytokines, and extracellular matrix. The primary bone marrow stroma function is to provide structural support upon which hematopoiesis occurs. Our lab has been working with highly diluted complexes for over 10 years and in this work we have used the following products: Chelidonium majus and associations (M1), Cinnamon or Cinnamomum verum and associations (M2), Curcuma longa and associations (M4), Gelsemium sempervirens and associations (M5), Aconitum napellus and associations (M6), and Calcarea carbonica and associations (M8). We have evaluated the in vitro and in vivo effects of treatment in mice bone marrow cells and human leukemic lineage K-562 by several assays. After data analysis we observed that treatment alters bone marrow populations profile but does not modify any of tested parameters from leukemic lineage cells. The results indicate that treatment induces cell proliferation and/or differentiation, recruitment, homing, maintenance, and contribution to homeostasis

    Açao in vitro do medicamento homeopático canova em células de medula óssea de camundongos

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    Orientadora : Dorly de Freitas BuchiDissertaçao (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciencias Biológicas, Programa de Pós-Graduaçao em Biologia Celular e Molecular. Defesa: Curitiba, 2005Inclui bibliografia e anexosÁrea de concentraçao: Biologia celular e molecularA medula óssea vermelha presente em ossos como o esterno, ossos ilíacos, costelas e fêmures, é altamente vascularizada e apresenta uma estrutura anatômica especial que permite a proliferação e diferenciação das células pluripotentes. Esse microambiente especial é formado pelas células do estroma medular, que sustentam a sobrevivência, proliferação, diferenciação e maturação das células tronco e seus sucessores e são produtoras de citocinas. Esse microambiente também contém moléculas de matriz extracelular. Existe então um verdadeiro sistema regulador que garante a hematopoiese in vivo. O medicamento Canova é uma especialidade farmacêutica desenvolvida a partir de tinturas conhecidas na farmacopéia: Aconitum napellus, Bryonia alba, Thuya occidentalis, Lachesis muta e Arsenicum album diluídos em água destilada e menos de 1% de álcool. Os fêmures de camundongos suíços, apresentando três meses de idade, foram dissecados e limpos. As epífises foram removidas e a medula óssea foi obtida através de lavagem com Dulbecco’s modified eagle medium (DMEM) contendo 10% de soro bovino fetal com antibióticos. As células foram contadas em câmera de Neubauer. Esse trabalho tem como objetivo verificar os efeitos do composto medicamentoso homeopático Canova sobre células da medula óssea de camundongos, cultivadas in vitro. O Canova agiu sobre as células aderentes da medula óssea promovendo a ativação e o espraiamento. Também foram encontrados, em grande quantidade, agrupamentos de células sobre as aderentes (ninhos) nas culturas tratadas. O tratamento com o Canova não alterou a expressão dos marcadores de superfície analisados, CD45R, CD11b, CD11c, Ly-6G, CD3e e TER-119. O que ocorreu foi uma flutuação de alguns desses marcadores (CD45R, CD11c, CD3e e TER-119) ao longo do desenvolvimento da cultura, indicando diferenciação celular. Esse medicamento também não alterou a concentração de citocinas presentes no sobrenadante da cultura. Nesse trabalho não encontramos alterações em vários tipos celulares com exceção dos macrófagos. Essas células são a primeira linha de defesa do organismo, sendo mais suscetíveis a responderem a alguns estímulos. O medicamento imunomodulador Canova atua comprovadamente sobre macrófagos. palavras-chave: medula óssea, CanovaThe medullar cavity of long bones and the interstices between trabeculae of spongy bones house the soft, gelatinous, highly vascular and cellular tissue known as marrow. It shows a special anatomic structure that allows proliferation and differentiation of progenitors cells. This microenvironment is composed by marrow stromal cells, extracellular matrix, progenitors cells which differentiate into mature blood cells and growth factors. Canova is a homeopathic medication resulted from the combination of widely used homeopathic tinctures derived from the following substances: Aconitum napellus, Thuya occidentalis, Bryonia alba, Lachesis muta and Arsenicum album in alcoholic solution. Femurs from three months swiss mice were dissected and cleaned. Epiphyses were removed and the marrow was flushed with Dulbecco’s modified eagle medium (DMEM) containing 10% fetal bovine serum with antibiotics. Cells were counted in Neubauer chamber. This study aimed to know the effects of Canova medication on in vitro mice bone marrow cells. This medication acts on bone marrow adherent cells improving its activation and spread. Canova seems to increase cell clusters on adherent cells. Flow cytometry analysis showed no differences on the expression of tested surface markers among the groups. It was observed that culture periods have influences on expression of some markers. CD11c and CD3 increased the expression after 72 hours and decreased after 96 hours. CD45R decreased expression after 72 and increased after 96 hours. TER-119 increased the expression after 72 hours and it was maintained after 96 hours of culture, and this is an indication of cell differentiation. This medication did not modify the cytokines concentration on culture supernatant. In this work no alterations in some cellular lineages were detected except for the monocytic lineage. Macrophages are the first defense line of an organism thus being more susceptible to respond a stimulus. The immunemodulator medication called Canova acts on macrophages

    Açao in vitro do medicamento homeopático canova em células de medula óssea de camundongos

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    Orientadora : Dorly de Freitas BuchiDissertaçao (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciencias Biológicas, Programa de Pós-Graduaçao em Biologia Celular e Molecular. Defesa: Curitiba, 2005Inclui bibliografia e anexosÁrea de concentraçao: Biologia celular e molecularA medula óssea vermelha presente em ossos como o esterno, ossos ilíacos, costelas e fêmures, é altamente vascularizada e apresenta uma estrutura anatômica especial que permite a proliferação e diferenciação das células pluripotentes. Esse microambiente especial é formado pelas células do estroma medular, que sustentam a sobrevivência, proliferação, diferenciação e maturação das células tronco e seus sucessores e são produtoras de citocinas. Esse microambiente também contém moléculas de matriz extracelular. Existe então um verdadeiro sistema regulador que garante a hematopoiese in vivo. O medicamento Canova é uma especialidade farmacêutica desenvolvida a partir de tinturas conhecidas na farmacopéia: Aconitum napellus, Bryonia alba, Thuya occidentalis, Lachesis muta e Arsenicum album diluídos em água destilada e menos de 1% de álcool. Os fêmures de camundongos suíços, apresentando três meses de idade, foram dissecados e limpos. As epífises foram removidas e a medula óssea foi obtida através de lavagem com Dulbecco’s modified eagle medium (DMEM) contendo 10% de soro bovino fetal com antibióticos. As células foram contadas em câmera de Neubauer. Esse trabalho tem como objetivo verificar os efeitos do composto medicamentoso homeopático Canova sobre células da medula óssea de camundongos, cultivadas in vitro. O Canova agiu sobre as células aderentes da medula óssea promovendo a ativação e o espraiamento. Também foram encontrados, em grande quantidade, agrupamentos de células sobre as aderentes (ninhos) nas culturas tratadas. O tratamento com o Canova não alterou a expressão dos marcadores de superfície analisados, CD45R, CD11b, CD11c, Ly-6G, CD3e e TER-119. O que ocorreu foi uma flutuação de alguns desses marcadores (CD45R, CD11c, CD3e e TER-119) ao longo do desenvolvimento da cultura, indicando diferenciação celular. Esse medicamento também não alterou a concentração de citocinas presentes no sobrenadante da cultura. Nesse trabalho não encontramos alterações em vários tipos celulares com exceção dos macrófagos. Essas células são a primeira linha de defesa do organismo, sendo mais suscetíveis a responderem a alguns estímulos. O medicamento imunomodulador Canova atua comprovadamente sobre macrófagos. palavras-chave: medula óssea, CanovaThe medullar cavity of long bones and the interstices between trabeculae of spongy bones house the soft, gelatinous, highly vascular and cellular tissue known as marrow. It shows a special anatomic structure that allows proliferation and differentiation of progenitors cells. This microenvironment is composed by marrow stromal cells, extracellular matrix, progenitors cells which differentiate into mature blood cells and growth factors. Canova is a homeopathic medication resulted from the combination of widely used homeopathic tinctures derived from the following substances: Aconitum napellus, Thuya occidentalis, Bryonia alba, Lachesis muta and Arsenicum album in alcoholic solution. Femurs from three months swiss mice were dissected and cleaned. Epiphyses were removed and the marrow was flushed with Dulbecco’s modified eagle medium (DMEM) containing 10% fetal bovine serum with antibiotics. Cells were counted in Neubauer chamber. This study aimed to know the effects of Canova medication on in vitro mice bone marrow cells. This medication acts on bone marrow adherent cells improving its activation and spread. Canova seems to increase cell clusters on adherent cells. Flow cytometry analysis showed no differences on the expression of tested surface markers among the groups. It was observed that culture periods have influences on expression of some markers. CD11c and CD3 increased the expression after 72 hours and decreased after 96 hours. CD45R decreased expression after 72 and increased after 96 hours. TER-119 increased the expression after 72 hours and it was maintained after 96 hours of culture, and this is an indication of cell differentiation. This medication did not modify the cytokines concentration on culture supernatant. In this work no alterations in some cellular lineages were detected except for the monocytic lineage. Macrophages are the first defense line of an organism thus being more susceptible to respond a stimulus. The immunemodulator medication called Canova acts on macrophages

    Metabolic switches during the first steps of adipogenic stem cells differentiation

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    AbstractThe understanding of metabolism during cell proliferation and commitment provides a greater insight into the basic biology of cells, allowing future applications. Here we evaluated the energy and oxidative changes during the early adipogenic differentiation of human adipose tissue-derived stromal cells (hASCs). hASCs were maintained under differentiation conditions during 3 and 7days. Oxygen consumption, mitochondrial mass and membrane potential, reactive oxygen species (ROS) generation, superoxide dismutase (SOD) and catalase activities, non-protein thiols (NPT) concentration and lipid peroxidation were analyzed. We observed that 7days of adipogenic induction are required to stimulate cells to consume more oxygen and increase mitochondrial activity, indicating organelle maturation and a transition from glycolytic to oxidative energy metabolism. ROS production was only increased after 3days and may be involved in the differentiation commitment. ROS source was not only the mitochondria and we suggest that NOX proteins are related to ROS generation and therefore adipogenic commitment. ROS production did not change after 7days, but an increased activity of catalase and NPT concentration as well as a decreased lipid peroxidation were observed. Thus, a short period of differentiation induction is able to change the energetic and oxidative metabolic profile of hASCs and stimulate cytoprotection processes

    Alternative Methods as Tools for Obesity Research: In Vitro and In Silico Approaches

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    The study of adipogenesis is essential for understanding and treating obesity, a multifactorial problem related to body fat accumulation that leads to several life-threatening diseases, becoming one of the most critical public health problems worldwide. In this review, we propose to provide the highlights of the adipogenesis study based on in vitro differentiation of human mesenchymal stem cells (hMSCs). We list in silico methods, such as molecular docking for identification of molecular targets, and in vitro approaches, from 2D, more straightforward and applied for screening large libraries of substances, to more representative physiological models, such as 3D and bioprinting models. We also describe the development of physiological models based on microfluidic systems applied to investigate adipogenesis in vitro. We intend to identify the main alternative models for adipogenesis evaluation, contributing to the direction of preclinical research in obesity. Future directions indicate the association of in silico and in vitro techniques to bring a clear picture of alternative methods based on adipogenesis as a tool for obesity research

    Polysome profiling shows extensive posttranscriptional regulation during human adipocyte stem cell differentiation into adipocytes

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    Submitted by Manoel Barata ([email protected]) on 2017-08-18T12:45:14Z No. of bitstreams: 1 Spangenbergpoly.pdf: 1003715 bytes, checksum: 4e042c381ca6191b3ccac780cc2def23 (MD5)Approved for entry into archive by Manoel Barata ([email protected]) on 2017-08-18T14:28:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Spangenbergpoly.pdf: 1003715 bytes, checksum: 4e042c381ca6191b3ccac780cc2def23 (MD5)Made available in DSpace on 2017-08-18T14:28:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Spangenbergpoly.pdf: 1003715 bytes, checksum: 4e042c381ca6191b3ccac780cc2def23 (MD5) Previous issue date: 2013Institut Pasteur Montevideo. Unidad de Bioinformática. Montevideo, Uruguay.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Curitiba, PR, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Curitiba, PR, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Curitiba, PR, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Curitiba, PR, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Curitiba, PR, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Curitiba, PR, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Curitiba, PR, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Curitiba, PR, Brasil.Pontifícia Universidade Católica do Paraná. Núcleo de Tecnologia Celular. Curitiba, PR, Brasil.Pontifícia Universidade Católica do Paraná. Núcleo de Tecnologia Celular. Curitiba, PR, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Curitiba, PR, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Curitiba, PR, Brasil.Institut Pasteur Montevideo. Unidad de Bioinformática. Montevideo, Uruguay.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Curitiba, PR, Brasil.Adipocyte stem cells (hASCs) can proliferate and self-renew and, due to their multipotent nature, they can differentiate into several tissue-specific lineages, making them ideal candidates for use in cell therapy. Most attempts to determine the mRNA profile of self-renewing or differentiating stem cells have made use of total RNA for gene expression analysis. Several lines of evidence suggest that self-renewal and differentiation are also dependent on the control of protein synthesis by posttranscriptional mechanisms. We used adipogenic differentiation as a model, to investigate the extent to which posttranscriptional regulation controlled gene expression in hASCs. We focused on the initial steps of differentiation and isolated both the total mRNA fraction and the subpopulation of mRNAs associated with translating ribosomes. We observed that adipogenesis is committed in the first days of induction and three days appears as the minimum time of induction necessary for efficient differentiation. RNA-seq analysis showed that a significant percentage of regulated mRNAs were posttranscriptionally controlled. Part of this regulation involves massive changes in transcript untranslated regions (UTR) length, with differential extension/reduction of the 3'UTR after induction. A slight correlation can be observed between the expression levels of differentially expressed genes and the 3'UTR length. When we considered association to polysomes, this correlation values increased. Changes in the half lives were related to the extension of the 3'UTR, with longer UTRs mainly stabilizing the transcripts. Thus, changes in the length of these extensions may be associated with changes in the ability to associate with polysomes or in half-life
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