Ocorrência e infecção natural de flebotomíneos e pequenos mamíferos por Leishmania em matas de galeria do Distrito Federal

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Medicina Tropical, 2017.Texto parcialmente liberado pelo autor. Conteúdo restrito: Capítulo 5.O conhecimento relacionado à transmissão enzoótica de espécies de Leishmania no Distrito Federal ainda é escasso e a participação de flebotomíneos e mamíferos silvestres no ciclo de transmissão desses protozoários é objeto do presente estudo. As áreas estudadas foram as matas de galeria da Fazenda Água Limpa da Universidade de Brasília, Reserva Biológica da Contagem, Parque Nacional de Brasília e Jardim Botânico de Brasília em maio e setembro de 2014. O Capítulo 1 traz a atualização da lista de espécies de flebotomíneos no DF. Com esforço de captura de 1.280 armadilhas HP e 16 armadilhas do tipo Shannon, foram capturados 1.209 flebotomíneos pertencentes a 16 espécies. Bichromomyia flaviscutellata (n=668) foi a espécie mais capturada. Psathyromyia pradobarrientosi, Brumptomyia guimaraesi, Br. brumpti, Micropygomyia ferreirana e Evandromyia bourrouli foram registradas pela primeira vez no DF, ampliando a distribuição geográfica das mesmas e elevando para 35 o número de espécies registradas nessa unidade da federação. O Capítulo 2 analisou a infecção natural dos flebotomíneos capturados por Leishmania. DNA foi extraído de 569 fêmeas agrupadas em 87 “pools”. A integridade das amostras foi conferida por uma PCR designada à amplificação do gene cacophony da região IVS6. A detecção dos tripanossomatídeos foi feita pela amplificação das regiões SSU rRNA e ITS-1. Nenhuma amostra mostrou-se positiva para Leishmania spp., entretanto, os resultados do presente estudo não implicam na inexistência de vetores infectados nestas matas de galeria. O Capítulo 3 analisou a ocorrência e infecção em pequenos mamíferos (Rodentia e Didelphimorphia) por Leishmania spp. nas mesmas áreas dos flebotomíneos e nos mesmos períodos. Amostras de tecido (fragmentos de orelhas) foram obtidas dos mamíferos capturados e utilizadas para a detecção molecular dos parasitos a partir de Nested PCR SSU rRNA e PCR com alvo na região ITS em 153 amostras. Com um total de 5.120 armadilhas-noite, 172 pequenos mamíferos foram capturados, pertencentes à três espécies de marsupiais (Didelphis albiventris, Gracilinanus agilis e Monodephis americana) e seis espécies de roedores (Rhipidomys macrurus, Oecomys bicolor, Calomys expulsus, Hyleaemys megacephalus, Nectomys rattus e Necromys lasiurus). Vinte amostras (13,07%) foram positivas, considerando ambos os marcadores moleculares, quatro somente para SSU e quatro somente para ITS. As espécies infectadas por Leishmania spp. foram Rhipidomys macrurus, Gracilinanus agilis e Didelphis albiventris. Estas espécies devem participar da transmissão enzoótica de Leishmania na REBIO, FAL e JBB sendo este o primeiro relato de mamíferos silvestres infectados por este parasito nestas duas últimas áreas. Ao considerar todos os resultados obtidos conclui-se que as matas de galeria do DF abrigam hospedeiros e espécies incriminadas vetoras de Leishmania e teriam um papel importante na manutenção da transmissão enzoótica desses tripanossomatídeos.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES).Knowledge about the enzootic transmission of Leishmania in the FD is still scarce and the participation of wild mammals and sandflies in the leishmaniasis transmission cycle is the subject of this study. All samples were captured in gallery forests of four areas, Água Limpa Farm, Biological Reserve of Contagem, Brasilia’s National Park and Botanic Garden of Brasília, on May and September, 2014. Chapter 1 provides the updated list of sand fly species in the Federal District. The entire capture effort entailed 1.280 HP light traps and 16 Shannon traps, 16 species were identified. Bichromomyia flaviscutellata (n=668) was the most captured species. Psathyromyia pradobarrientosi, Brumptomyia guimaraesi, Br. brumpti, Micropygomyia ferreirana and Evandromyia bourrouli were registered for the first time in the Federal District, elevating to 35 the number of reported species at this federation unit. Chapter 2 follows up the study of Chapter 1 by detecting natural Leishmania infection in those captured sandflies. DNA was extracted from 569 females grouped into 87 pools. Fragments that corresponded to cacophony gene were amplified in all of the samples, demonstrating the quality of the extracted DNA. Trypanosomatids detection was performed by amplifying the SSU rRNA and ITS-1 regions. All samples tested negative for Leishmania spp. Therefore negative results in the present study do not implicate in the inexistence of infected vectors in these gallery forests and surroundings. Chapter 3 addresses occurrence and natural infection data of small mammals (Rodentia and Didelphimorphia) captured in the same areas of sandflies and during the same periods. Tissue samples (ear tips) were obtained from captured mammals and used to molecular parasite detection from Nested PCR SSU rRNA and PCR targeting the region ITS in 153 samples. The entire capture effort entailed 5.120 night-traps and 172 small mammals from three marsupials species (Didelphis albiventris, Gracilinanus agilis and Monodephis americana) and six rodents species (Rhipidomys macrurus, Oecomys bicolor, Calomys expulsus, Hyleaemys megacephalus, Nectomys rattus and Necromys lasiurus) were captured. Twenty samples (13,07%) were positive, considering both molecular markers, four samples only for SSU and four sampes only for ITS. Leishmania spp. infected species were: Rhipidomys macrurus, Gracilinanus agilis and Didelphis albiventris. These species might participate in the enzootic transmition of Leishmania at REBIO, FAL and JBB. This is the first report of Leishmania infected wild mammals in the last two cited areas. Considering all results obtained it is concluded that gallery forests of FD host hosts and species from possible Leishmania vectors and they might have an important role in the maintenance of enzootic transmission of these trypanosomatids

Lesões de isquemia arteriovenosa e reperfusão em jejuno de equinos: imunoistoquímica de proteínas de junção e histopatologia

Made available in DSpace on 2014-07-29T14:46:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Aline Machado Rapello do Nascimento.pdf: 1403008 bytes, checksum: d5736b2cde9e7188a689131927c1127c (MD5) Previous issue date: 2007-12-31To evaluate whether complete arteriovenous ischemia followed by reperfusion of mesenteric blood flow aggravates lesions involving small intestine of horses, β--catenin and occludin expressions were measured in jejune epithelia of seven equines, without definite breed. The animals had been submitted to aseptic ventral midline celiotomy and five jejune segments collected corresponding to a baseline segment, a five minutes segment subjected to ischemia, and three segments collected after being subjected to five, sixty and one hundred and twenty minutes of tecidual reperfusion, respectively. Experimentally induced lesions created by total arteriovenous occlusion followed by reperfusion were similar to naturally acquired lesions, as much in the period of ischemia as in the aggravation of the injuries observed during reperfusion. Changes that occur when ischemic intestine is reperfused are progressive, and include mucosal, submucosal, and serosal edema; polymorphonuclear and mononuclear cell infiltrates; and alterations in vascular patterns. Imunohistochemistry analyses have shown strong staining baseline segments for β-catenin in all animals and its progressive lack of staining during ischemia and reperfusion treatments. That indicates progressive lack of intercellular adherence. Similar results of specific decreases of total expression of Occludin, a tight junction protein, were observed. This protein is involved in regulating the movement of solutes in the paracellular pathway and also plays an important role in the maintenance of cell polarity. The reduction of expressions of both intercellular proteins measured directly demonstrates β-catenin injury due to progression of edema during ischemia and its aggravation during reperfusion and also shows an increase of the permeability of paracelular pathways and its related consequences to degradation of Ocludina.Realizou-se o estudo da patogenia da lesão por isquemia arteriovenosa completa dos vasos mesentéricos e reperfusão jejunal em eqüinos por meio da avaliação da expressão das proteínas β-catenina e ocludina presentes neste epitélio, em sete eqüinos, sem raça definida. Os animais foram submetidos á celiotomia asséptica na linha alba e coleta de cinco segmentos jejunais correspondestes á um segmento controle, um segmento tratado com isquemia por cinco minutos, e três segmentos coletados durante o período de reperfusão tecidual aos cinco, sessenta e cento e vinte minutos, respectivamente. As lesões induzidas experimentalmente por oclusão arteriovenosa total seguida por reperfusão foram similares às lesões adquiridas naturalmente tanto no período de isquemia quanto no agravamento das lesões observado nos tempos de reperfusão. As mudanças que ocorrem quando um intestino isquêmico sofre reperfusão são progressivas e incluem edema de mucosa, submucosa e serosa, infiltração polimorfonuclear e mononuclear e alterações nos padrões vasculares. A análise imunoistoquímica revelou forte expressão da β- catenina em todos os animais e a sua progressiva perda da expressão quando submetidos à isquemia e reperfusão. Isso indica perda progressiva da adesividade intercelular. Resultados similares de redução do total da expressão da Ocludina, uma proteína de junção de oclusão, foram observados. Esta proteína está envolvida na regulação dos movimentos dos solutos na via paracelular e também desempenha um importante papel na manutenção da polaridade celular. A diminuição da expressão de ambas as proteínas intercelulares demonstra a lesão à β-catenina devido à progressão do edema durante isquemia e o agravamento durante a reperfusão tecidual e também mostra um aumento na permeabilidade da via paracelular e suas conseqüências relacionadas à degradação da Ocludina

West Nile Virus in the State of Ceará, Northeast Brazil

In June 2019, a horse with neurological disorder was diagnosed with West Nile virus (WNV) in Boa Viagem, a municipality in the state of Ceará, northeast Brazil. A multi-institutional task force coordinated by the Brazilian Ministry of Health was deployed to the area for case investigation. A total of 513 biological samples from 78 humans, 157 domestic animals and 278 free-ranging wild birds, as well as 853 adult mosquitoes of 22 species were tested for WNV by highly specific serological and/or molecular tests. No active circulation of WNV was detected in vertebrates or mosquitoes by molecular methods. Previous exposure to WNV was confirmed by seroconversion in domestic birds and by the detection of specific neutralizing antibodies in 44% (11/25) of equids, 20.9% (14/67) of domestic birds, 4.7% (13/278) of free-ranging wild birds, 2.6% (2/78) of humans, and 1.5% (1/65) of small ruminants. Results indicate that not only equines but also humans and different species of domestic animals and wild birds were locally exposed to WNV. The detection of neutralizing antibodies for WNV in free-ranging individuals of abundant passerine species suggests that birds commonly found in the region may have been involved as amplifying hosts in local transmission cycles of WNV