Identification and dispersion of Leishmania infantum in South America's center-south region

Orientadora: Profa. Dra. Vanete Thomaz SoccolCoorientador: Prof. Dr. Rafael Antunes BaggioTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Tecnologia, Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia. Defesa : Curitiba, 29/03/2018Inclui referênciasResumo: Leishmaniose é uma zoonose causada por Leishmania Ross, 1903 protozoário que é transmitido aos hospedeiros vertebrados (mamíferos) por vetores (flebotomíneo). São doenças negligenciadas de grande importância em saúde pública e com ampla distribuição mundial. O presente trabalho teve por objetivo identificar a(s) espécie(s) de Leishmania responsável pela doença em cães, na região Extremo Oeste do estado do Paraná usando como ferramenta o marcador espaçador interno transcrito (ITS) e avaliar a dispersão de Leishmania (Leishmania) infantum na região Centro Sul da América do Sul com o uso de marcadores microssatélites. Após o isolamento do prasito em cães, estes foram analisados por Reação em Cadeia de Polimerase (PCR) usando como marcador o ITS. Todas as amostras de Leishmania foram identificadas como L. (L.) infantum. Para testar o poder de discriminação do marcador ITS, um total de 486 sequências de 13 espécies de Leishmania presentes no Novo Mundo, mais Leishmania donovani e L. (L.) infantum foram obtidas do Genbank, somadas aos nossos isolados de campo foram analisadas usando o método de agrupamento Neighbor-Joining. Nossos resultados sustentam que o marcador ITS foi capaz de discriminar dois grupos. O primeiro grupo inclui os complexos L. donovani e L. mexicana do subgênero Leishmania e no segundo grupo inclui todas as espécies do subgênero Viannia que se mostrou menos efetivo na separação das atuais espécies descritas no Novo Mundo. Os isolados do parasito obtidos na região oeste do Paraná agruparam-se no complexo L. donovani, entre L. donovani e L. (L.) infantum. Numa segunda etapa foram usados marcadores microssatélites que mostraram que na região oeste do Paraná circulam duas populações de L. (L.) infantum. A comparação com isolados provenientes de outros estados do Brasil e do Paraguai foi possível separar três populações de L. (L.) infantum. Os dados levantados na literatura associado aos dados obtidos neste estudo permitiram verificar que L. (L.) infantum teve quatro movimentos de expansão na região Centro Sul da América do Sul. O primeiro movimento foi graças à migração populacional humana do Nordeste para a região Sudeste. O segundo deu-se com a construção do gasoduto Bolívia-Brasil passando por três estados da região Centro-Oeste do Brasil. O terceiro movimento de expansão foi a entrada de LV na tríplice fronteira via Argentina?Brasil?Paraguai. E, enfim, foi possível constatar a entrada de uma "nova" população na região oeste de Santa Catarina e central do Paraná. Palavras-chave: 1. Dispersão 2. ITS 3. Leishmania (Leishmania) infantum 4. Leishmaniose visceral 5. Microssatélites.Abstract: Leishmaniasis is a zoonosis caused by Leishmania Ross, 1903 protozoan which is transmitted to vertebrate hosts (mammals) by vectors (sandfly). They are neglected diseases, of great importance in public health and with wide distribution worldwide. The objective of the present work was to identify the Leishmania species responsible for the disease in dogs in the extreme west region of the state of Paraná using the transcribed internal spacer marker (ITS) as a tool and to evaluate the dispersion of Leishmania (Leishmania) infantum South America's Center-South region with the use of microsatellite markers. After isolation of the prasite in dogs, these were analyzed by Polymerase Chain Reaction (PCR) using the ITS marker. All Leishmania samples were identified as L. (L.) infantum. To test the discriminating power of the ITS marker, a total of 486 sequences from 13 Leishmania species present in the New World plus Leishmania donovani and L. (L.) infantum were obtained from Genbank, plus our field isolates were analyzed using the Neighbor-Joining grouping method. Our results support that the ITS marker was able to discriminate two groups. The first group includes the L. donovani and L. mexicana complexes of the subgenus Leishmania and in the second group includes all species of the subgenus Viannia that proved less effective in separating the present species described in the New World. The isolates of the parasite obtained in the western region of Paraná were grouped in the L. donovani complex, between L. donovani and L. (L.) infantum. In a second step microsatellite marker were used that showed that in the western region of Paraná two populations of L. (L.) infantum circulate. Comparison with isolates from other states of Brazil and Paraguay allowed to separate three populations of L. (L.) infantum. The data collected in the literature associated with the data obtained in this study allowed us to verify that L. (L.) infantum had four expansion movements in the South America's Center-South region. The first movement was due to the human population migration from the Northeast to the Southeast region. The second occurred with the construction of the Bolivia-Brazil gas pipeline passing through three states of the Center-West region of Brazil. The third movement of expansion was the entrance of LV in the triple border via Argentina?Brazil?Paraguai. And, finally, it was possible to verify the entry of a "new" population in the western region of Santa Catarina and central Paraná. Keywords: 1. Dispersion 2. ITS 3. Leishmania (Leishmania) infantum 4. Microsatellites 5. Visceral Leishmaniasis

DIAGNÓSTICO PARASITOLÓGICO EM VERDURAS DE ESTABELECIMENTOS COMERCIAIS E AGRICULTURA FAMILIAR EM CAMPOS NOVOS - SC (DADOS PARCIAIS)

As modificações dos hábitos alimentares dos consumidores, como preferência por alimentos prontos ou semiprontos, consumo de refeições fora do domicílio e aumento do consumo de alimentos frescos ou in natura, são fatores que contribuem para o aumento de doenças transmitidas por alimentos (DTA), principalmente parasitoses. O hábito de consumir hortaliças in natura aumenta os riscos de DTA resultantes do ciclo de contaminação fecal/oral. Dessa forma, foram analisadas 3 amostras de alface de estabelecimentos comercias e 2 amostras de agricultura familiar entre novembro/2016 a março/2017 em Campos Novos - SC. As amostras foram submetidas ao processo de sedimentação por 24 horas e após visualizado no microscópio com objetiva de 10x a presença de parasitos. Todas as amostras apresentaram ovos que não foram possíveis as identificações. Assim, posteriormente, as amostras foram submetidas ao Método de flutuação em solução de sulfato de Zinco (Método de Faust), em que as mesmas amostras apresentaram a presença de oocistos de protozoários. As amostras foram armazenadas para, em futuros projetos, ocorrer à determinação da morfologia e micrometria – identificando as principais protozooses encontradas nas folhas de alface em Campos Novos – SC

LEISHMANIOSE VISCERAL - REVISÃO BIBLIOGRÁFICA

leishmaniose visceral é uma doença sistêmica grave com notificação compulsória, alta letalidade, causada pelo protozoário Leishmania infantum, parasito intracelular obrigatório das células do sistema fagocítico mononuclear. Acomete animais domésticos, selvagens e inclusive o homem, sendo o cão seu principal reservatório doméstico em áreas endêmicas. É caracterizada como umas das seis doenças infecciosas mais importantes do mundo, sua transmissão entre os mamíferos ocorre pela picada da fêmea hematófaga do flebotomíneo Lutzomyia longipalpis contendo as promastigotas, enquanto em animais vertebrados se encontram em forma de amastigotas. Os cães infectados podem levar um ou dois anos para manifestar seus sintomas ou serem assintomáticos. Os animais que manifestam os sinais clínicos podem apresentar sinais variados como alterações cutâneas, onicogrifose, emagrecimento progressivo, atrofia muscular, febre apatia, anemia, diáteses hemorrágicas, esplenomegalia, icterícias, alterações gastroentéricas, miocardites, entre outras afecções. Dentre os inúmeros métodos de diagnóstico, o mais específico é o parasitológico, onde pode ser observado o parasito no tecido do hospedeiro. Além deste, podem ser realizados testes sorológicos (TR DPP, ELISA e RIFI) ou testes moleculares (PCR). O tratamento é caro e tem por finalidade  melhor a qualidade de vida do animal e reduzir a carga parasitária. Contudo, devemos nos atentar à métodos preventivos, principalmente no controle dos flebotomineos para evitar novos casos de leishmaniose

DIAGNÓSTICO HEMATOLÓGICO EM CÃO COM SUSPEITA DE LEPTOSPIROSE

A leptospirose é uma  zoonose infectocontagiosa nos animais e homem com ocorrência mundial. Diversas espécies de animais silvestres atuam como reservatórios de Leptospira para outros animais silvestres ou domésticos e para o homem. O cão no meio urbano é fonte potencial na transmissão da leptospirose devido ao estreito convívio estabelecido com o ser humano. Um cão macho, 4 anos, SRD (sem raça definida), apresentou icterícia e suspeita de leptospirose. Foram realizados hemograma completo onde as alterações foram: anemia, deficiência de ferro, leucocitose, neutrofilia (com desvio a esquerda), linfocitose, monocitose e trombocitopenia e teste bioquímico onde as alterações foram valores aumentados de ALT (alanina amino transferase), confirmando a suspeita de leptospirose. Seria indicado realizar exames sorológico e PCR (reação em cadeia de polimerase) para confirmação e notificação a vigilância por ser uma zoonose. A leptospirose canina apresenta-se com variado polimorfismo clínico e deve ser considerada pelos médicos veterinários na interpretação do diagnóstico das principais doenças infecciosas que acometem esta espécie. Os sinais clínicos mais comuns são: letargia, depressão, anorexia, vômito, febre, poliúria, polidipsia, dor abdominal e/ou lombar, diarreia, mialgia, halitose, úlceras bucais, icterícia e petéquias. O tratamento da leptospirose consiste de terapia antibiótica e de suporte de acordo com a evolução de cada quadro clínico

FISIOTERAPIA E ACUPUNTURA VETERINÁRIA PARA PEQUENOS ANIMAIS

A fisioterapia veterinária é uma especialidade recente e vem crescendo no Brasil e em todo o mundo, devido ao crescente número de profissionais habilitados, assim como o número de eventos e estudos publicados. Esta prática surgiu para agregar na reabilitação dos animais, principalmente animais de companhia com lesão espinhal, pois auxilia no retorno da funcionalidade da região afetada. Ela pode ser associada ao tratamento conservador ou cirúrgico. Para paciente pós-cirúrgicos a fisioterapia tem como objetivo de reduzir a dor, melhorar os movimentos, prevenir atrofia muscular e em muitos casos, recuperar a função neuromotora. Os pacientes se beneficiam da fisioterapia pois é um tratamento que proporciona menos sofrimento, menos incomodo, maior agilidade e até menos desconforto psicológico do proprietário, ao ver seu animal novamente reabilitado. A fisioterapia é indicada para qualquer espécie, porém para cada uma delas há técnicas mais recomendadas, levando em consideração características do animal. Utiliza –se uma variedade de tratamentos, como terapias manuais, exercícios terapêuticos e aparelhos de eletroterapia, fototerapia, magnetoterapia, e ainda a acupuntura. Como técnicas mais empregadas a cinesioterapia se destaca, pois é uma terapia que consiste através do próprio movimento do animal, sendo que o este pode ser ativo, realizado pelo paciente ou passivo através da ajuda do terapeuta para executar o exercício. O uso de exercícios terapêuticos depende das possibilidades clínicas de cada animal e do conhecimento do terapeuta em cada caso

TRISTEZA PARASITÁRIA BOVINA EM BOVINO DE HERVAL D' OESSTE, SANTA CATARINA - RELATO DE CASO

A tristeza parasitária bovina é uma importante afecção causadora de prejuízos para a pecuária. Essa doença tem como agentes etiológicos a Babesia sp. (protozoário) e Anaplasma sp.  (Rickettsia intracelular obrigatória), ambos agentes transmitidos por carrapatos. Este trabalho teve por objetivo verificar a presença ou ausência da doença e suas alterações hematológicas. Para isso foi realizada a coleta de sangue de um bovino de aproximadamente um ano de idade e duzentos e cinquenta quilos. O animal apresentava-se apático, com redução de ingesta, anorexia, mucosas hipocoradas, presença de ectoparasitos (Boophilus microplus) e hipertermia (40,2°C). Posteriormente foram realizados exames, tais como: hematócrito, pesquisa de hemoparasitoses, leucograma total e diferenciado, ureia, creatinina e aspartato transaminase (AST). Os resultados apontaram a positividade à doença, com presença de Anaplasma marginalle no interior das hemácias, diminuição do hematócrito indicando anemia, leucocitose por neutrofilia sugerindo processo infeccioso, ureia abaixo dos valores de referência, alteração por aumento de creatinina e AST. Ao fim dos exames foi possível afirmar a ocorrência da doença e que esta provocou diversas e importantes alterações hematológicas. É de grande importância a descoberta do agente causar da doença, para realização de tratamentos evitando possíveis perdas econômicas

ANAPLASMOSE EM BOVINOS DE LEITE - RELATO DE CASO

Anaplasmose e babesiose são duas enfermidades distintas responsáveis por causar tristeza parasitária bovina (TPB), tendo como principal sinal clínico anemia. A TPB é causada por Babesia e Anaplasma e transmitida pelo carrapato Boophilus microplus. O objetivo deste trabalho foi relatar o caso de bovinos com sintomatologia de TPB. Foram coletadas amostras de sangue e carrapatos de quatro bovinos de raças holandesa e jersey, tendo em média de 5-7 anos no Oeste de Santa Catarina. As amostras coletadas foram enviados ao laboratório de Parasitologia do curso de Medicina Veterinária da Unoesc Campus Aproximado de Campos Novos. Foi realizado esfregaço sanguíneo corado com panótico rápido, hematócrito e identificação do carrapato. Ao avaliarmos o esfregaço sanguíneo, foi observado presença de hemácias parasitadas com Anaplasma. Os animais apresentavam hematócrito baixo, indicando anemia. Os carrapatos foram identificacom como Boophilus microplus.  Diante dos achados parasitológicos o diagnóstico final condiz que a propriedade possui infestação de carrapatos Boophilus microplus e animais com anaplasmose.  O controle de carrapatos e tratamento dos animais doentes é a forma mais eficaz de prevenção para TBP

TOXOPLASMOSE EM PEQUENOS ANIMAIS: REVISÃO DE LITERATURA

A toxoplasmose é uma doença de grande relevância por acometer mamíferos, aves, répteis, anfíbios e o homem. É causada pelo Toxoplasma gondii, protozoário intracelular.  Os felídeos são considerados como os únicos hospedeiros definitivos da doença. Todas as demais espécies acometidas são hospedeiros intermediários tendo o parasito nos músculo, sangue e leite. A prevalência em cães no estado de Santa Catarina varia em torno de 22,3 a 26%. As principais formas de transmissão são: ingestão de oocistos esporulados no ambiente,  solo, água e alimentos; ingestão de cistos teciduais em carnes e alimentos crus ou mal cozidos;  transfusões sanguíneas; infecção transplacentária, transplante de órgão, entre outros. Toxoplasmose normalmente é assintomática, porém em alguns casos o animal pode apresentar sintomas associados à sistema respiratório, digestório e fígado. O diagnóstico é realizado por método direto na identificação do parasito ou por método indireto pela detecção de anticorpos através do teste de ELISA (Ensaio Imunoenzimático Indireto) , RIFI (Reação de Imunofluorescência indireta) e HAI (Hemoaglutinação indireta) ou detecção de DNA por PCR (Reação em Cadeia de Polimerase). A prevenção é através da remoção das fezes dos felinos diariamente com o auxílio de luvas, lavar bem os alimentos, cozinhar adequadamente os alimentos, entre outras maneiras afim de precaver o aparecimento da doença