Pesquisa de enterocinas produzidas por isolados de enterococcus faecium de amostras de água e fezes de suínos

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Molecular characterization and detection of resistance genes in isolates of Acinetobacter spp. from clinical specimens and hospital wastewater

O gênero Acinetobacter tem emergido como um importante patógeno nosocomial que apresenta, não apenas resistência intrínseca a muitos antimicrobianos, como também uma grande habilidade de adquirir novos mecanismos de resistência. É de grande importância o conhecimento da epidemiologia local dos isolados para que se possa estabelecer o melhor tratamento a ser adotado e as medidas de controle epidemiológico mais adequadas para evitar a disseminação destes microrganismos. O objetivo deste trabalho foi de comparar isolados de Acinetobacter spp. provenientes de amostras clínicas e de efluente hospitalar quanto ao perfil de suscetibilidade a antimicrobianos e a presença de genes de resistência aos carbapenêmicos, assim como determinar a relação clonal destes isolados. Para isso isolados clínicos e amostras de efluente hospitalar de cinco hospitais em Porto Alegre, RS, Brasil foram coletadas. Os isolados bacterianos foram identificados como pertencentes ao gênero Acinetobacter através da amplificação do rDNA16S. O perfil de suscetibilidade a antimicrobianos foi avaliado pela técnica de disco-difusão e a presença dos genes blaIMP, blaVIM, blaSPM, blaOXA-23, blaOXA-51 foi analisada por PCR em todos os isolados resistentes a carbapenêmicos. A relação clonal dos isolados foi avaliada pela amplificação de seqüências repetitivas do genoma (ERIC-PCR) e análise de macrorestrição do genoma (PFGE). Foram analisados 577 isolados, sendo 274 clínicos e 303 de efluente hospitalar. Foram encontrados 68% de isolados clínicos e 30% de isolados de efluente multirresistentes. Não foram identificados isolados com genes para metalo-b-lactamases, mas 61,2% dos isolados clínicos e três isolados de efluente hospitalar apresentaram o gene blaOXA-23. O gene blaOXA-51 foi identificado em 84% dos isolados clínicos e 56% de efluente. As técnicas de ERIC-PCR e PFGE indicaram uma disseminação de isolados clones entre os diferentes hospitais analisados, assim como uma similaridade genética entre isolados de efluente hospitalar e isolados clínicos, indicando a disseminação dos últimos através do efluente.The genus Acinetobacter has emerged as an important nosocomial pathogen that presents not only intrinsic resistance to many antibiotics, but also a great ability to acquire new resistance mechanisms. It is very important to study local epidemiology of bacterial isolates so the best treatment and the most appropriate epidemic control measurements to prevent the spread of these microorganisms can be determined. The aim of this study was to compare isolates of Acinetobacter spp. from clinical specimens and hospital wastewater on their antibiotic susceptibility profile and the presence of resistance genes to carbapenems, as well as to determine the clonal relationship of these isolates. Clinical isolates and hospital wastewater samples from five hospitals in Porto Alegre, RS, Brazil were collected. The isolates were identified as belonging to the genus Acinetobacter by amplification of the rDNA16S. The susceptibility profile was determined by the disk-diffusion method and the presence of the blaIMP, blaVIM, blaSPM, blaOXA-23, blaOXA-51 genes were screened by PCR. The clonal relationship of the isolates was evaluated by amplification of repetitive sequences from the genome (ERIC-PCR) and macrorestriction analysis of the genome (PFGE). We analyzed 577 isolates, where 274 were of clinical origin and 303 from the hospital wastewater samples. We found that 68% of the clinical isolates and 30% of the wastewater isolates were multiresistant. None of the isolates presented genes of metallo-β-lactamase, in other hand, 61.2% of the clinical isolates and three from the hospital wastewater had the gene blaOXA-23. The gene blaOXA-51 was identified in 84% of the clinical isolates and in 56% of the hospital wastewater ones. The PFGE and ERIC-PCR analysis showed a possible dissemination of clones strains among the hospitals studied, and a genetic similarity among the hospital sewage and clinical isolates, indicating their dissemination through the wastewater

Molecular characterization and detection of resistance genes in isolates of Acinetobacter spp. from clinical specimens and hospital wastewater

O gênero Acinetobacter tem emergido como um importante patógeno nosocomial que apresenta, não apenas resistência intrínseca a muitos antimicrobianos, como também uma grande habilidade de adquirir novos mecanismos de resistência. É de grande importância o conhecimento da epidemiologia local dos isolados para que se possa estabelecer o melhor tratamento a ser adotado e as medidas de controle epidemiológico mais adequadas para evitar a disseminação destes microrganismos. O objetivo deste trabalho foi de comparar isolados de Acinetobacter spp. provenientes de amostras clínicas e de efluente hospitalar quanto ao perfil de suscetibilidade a antimicrobianos e a presença de genes de resistência aos carbapenêmicos, assim como determinar a relação clonal destes isolados. Para isso isolados clínicos e amostras de efluente hospitalar de cinco hospitais em Porto Alegre, RS, Brasil foram coletadas. Os isolados bacterianos foram identificados como pertencentes ao gênero Acinetobacter através da amplificação do rDNA16S. O perfil de suscetibilidade a antimicrobianos foi avaliado pela técnica de disco-difusão e a presença dos genes blaIMP, blaVIM, blaSPM, blaOXA-23, blaOXA-51 foi analisada por PCR em todos os isolados resistentes a carbapenêmicos. A relação clonal dos isolados foi avaliada pela amplificação de seqüências repetitivas do genoma (ERIC-PCR) e análise de macrorestrição do genoma (PFGE). Foram analisados 577 isolados, sendo 274 clínicos e 303 de efluente hospitalar. Foram encontrados 68% de isolados clínicos e 30% de isolados de efluente multirresistentes. Não foram identificados isolados com genes para metalo-b-lactamases, mas 61,2% dos isolados clínicos e três isolados de efluente hospitalar apresentaram o gene blaOXA-23. O gene blaOXA-51 foi identificado em 84% dos isolados clínicos e 56% de efluente. As técnicas de ERIC-PCR e PFGE indicaram uma disseminação de isolados clones entre os diferentes hospitais analisados, assim como uma similaridade genética entre isolados de efluente hospitalar e isolados clínicos, indicando a disseminação dos últimos através do efluente.The genus Acinetobacter has emerged as an important nosocomial pathogen that presents not only intrinsic resistance to many antibiotics, but also a great ability to acquire new resistance mechanisms. It is very important to study local epidemiology of bacterial isolates so the best treatment and the most appropriate epidemic control measurements to prevent the spread of these microorganisms can be determined. The aim of this study was to compare isolates of Acinetobacter spp. from clinical specimens and hospital wastewater on their antibiotic susceptibility profile and the presence of resistance genes to carbapenems, as well as to determine the clonal relationship of these isolates. Clinical isolates and hospital wastewater samples from five hospitals in Porto Alegre, RS, Brazil were collected. The isolates were identified as belonging to the genus Acinetobacter by amplification of the rDNA16S. The susceptibility profile was determined by the disk-diffusion method and the presence of the blaIMP, blaVIM, blaSPM, blaOXA-23, blaOXA-51 genes were screened by PCR. The clonal relationship of the isolates was evaluated by amplification of repetitive sequences from the genome (ERIC-PCR) and macrorestriction analysis of the genome (PFGE). We analyzed 577 isolates, where 274 were of clinical origin and 303 from the hospital wastewater samples. We found that 68% of the clinical isolates and 30% of the wastewater isolates were multiresistant. None of the isolates presented genes of metallo-β-lactamase, in other hand, 61.2% of the clinical isolates and three from the hospital wastewater had the gene blaOXA-23. The gene blaOXA-51 was identified in 84% of the clinical isolates and in 56% of the hospital wastewater ones. The PFGE and ERIC-PCR analysis showed a possible dissemination of clones strains among the hospitals studied, and a genetic similarity among the hospital sewage and clinical isolates, indicating their dissemination through the wastewater

Estudo de bacteriocinas produzidas por espécies de Enterococcus

As enterocinas são compostos de natureza protéica que apresentam atividade antimicrobiana contra bactérias patogênicas e deteriorantes de alimentos. Por esta razão, nos últimos anos, o interesse por estas substâncias tem aumentado devido ao seu uso potencial como biopreservante de alimentos. Realizando uma triagem com 352 cepas de Enterococcus spp para detectar atividade antimicrobiana, foram encontradas 18 cepas (5%) produtoras de enterocinas, pertencentes às espécies E. faecalis, E. faecium e E. mundtii todas provenientes de amostras de fezes de humanos. Destas cepas foram produzidos sobrenadantes livres de células e realizados testes para caracterização das enterocinas produzidas. As enterocinas produzidas pelas 18 cepas apresentaram o mesmo espectro de atividade antimicrobiana, inibindo 4 espécies do gênero Listeria, Lactobacillus plantarum e Salmonella Enteritidis. Todas foram parcialmente estáveis ao aquecimento (121ºC por 10 minutos), a variações de pH de 2 a 10 e a estocagem por 60 dias a 4ºC e a -20ºC. A sensibilidade a proteases confirmou a natureza protéica destas substâncias antimicrobianas. Com cinco sobrenadantes livres de células foram realizadas curvas de produção de enterocinas e todas iniciaram a produção na fase logarítmica de crescimento, indicando cinética de metabólito primário. Com estes sobrenadantes foi determinado o peso molecular aproximado de 3 KDa, utilizando a técnica de SDS-PAGE. As cepas com atividade antimicrobiana no sobrenadante livre de células não apresentaram os genes para produção das enterocinas A e B, mas 14 cepas de E. faecium apresentaram o gene para enterocina A e 9 para enterocina B, sendo que apenas uma cepa apresentou ambos os genes. Nenhuma das 18 cepas produtoras de enterocinas apresentou atividade hemolítica e presença de adesinas, todas apresentaram cápsula. Os resultados obtidos neste trabalho indicam que estas enterocinas demonstram um potencial aplicabilidade em novos estudos relacionados aos biopreservantes

Estudo de bacteriocinas produzidas por espécies de Enterococcus

As enterocinas são compostos de natureza protéica que apresentam atividade antimicrobiana contra bactérias patogênicas e deteriorantes de alimentos. Por esta razão, nos últimos anos, o interesse por estas substâncias tem aumentado devido ao seu uso potencial como biopreservante de alimentos. Realizando uma triagem com 352 cepas de Enterococcus spp para detectar atividade antimicrobiana, foram encontradas 18 cepas (5%) produtoras de enterocinas, pertencentes às espécies E. faecalis, E. faecium e E. mundtii todas provenientes de amostras de fezes de humanos. Destas cepas foram produzidos sobrenadantes livres de células e realizados testes para caracterização das enterocinas produzidas. As enterocinas produzidas pelas 18 cepas apresentaram o mesmo espectro de atividade antimicrobiana, inibindo 4 espécies do gênero Listeria, Lactobacillus plantarum e Salmonella Enteritidis. Todas foram parcialmente estáveis ao aquecimento (121ºC por 10 minutos), a variações de pH de 2 a 10 e a estocagem por 60 dias a 4ºC e a -20ºC. A sensibilidade a proteases confirmou a natureza protéica destas substâncias antimicrobianas. Com cinco sobrenadantes livres de células foram realizadas curvas de produção de enterocinas e todas iniciaram a produção na fase logarítmica de crescimento, indicando cinética de metabólito primário. Com estes sobrenadantes foi determinado o peso molecular aproximado de 3 KDa, utilizando a técnica de SDS-PAGE. As cepas com atividade antimicrobiana no sobrenadante livre de células não apresentaram os genes para produção das enterocinas A e B, mas 14 cepas de E. faecium apresentaram o gene para enterocina A e 9 para enterocina B, sendo que apenas uma cepa apresentou ambos os genes. Nenhuma das 18 cepas produtoras de enterocinas apresentou atividade hemolítica e presença de adesinas, todas apresentaram cápsula. Os resultados obtidos neste trabalho indicam que estas enterocinas demonstram um potencial aplicabilidade em novos estudos relacionados aos biopreservantes