Applicability of PCR-based clonality assay in dogs with multicentric lymphoma

RESUMO Linfoma multicêntrico apresenta alta prevalência dentre as neoplasias em cães, e o diagnóstico rotineiro não é eficaz para avaliação de prognóstico. A PCR para rearranjos de receptores de antígeno (PRRA) apresenta potencial para classificação e estadiamento de linfomas. Este trabalho objetiva relatar o desenvolvimento de um protocolo de PRRA para aplicação em cães, baseando-se em condições e primers descritos na literatura. Foram coletados aspirados de linfonodo de 10 cães com linfoma multicêntrico e 15 lâminas de linfonodo positivas para linfoma já secas ao ar, fixadas e coradas. O protocolo utilizado demonstrou-se eficaz na amplificação de DNA das amostras frescas e das lâminas, com sensibilidade de 75%, similar à de estudos anteriores. Resultados parciais sugerem prevalência de linfomas de células B (60%) sobre células T (40%). O presente estudo abre precedentes para uma série de novos estudos com diagnóstico molecular de linfomas

Avaliação dos níveis plasmáticos do peptídeo natriurético NT-proBNP em cães da raça Poodle em diferentes estágios da doença valvar crônica mitral

RESUMO A doença valvar crônica mitral (DVCM) é comum em cães e pode não causar sintomas clínicos da insuficiência cardíaca (IC) durante anos. O peptídeo natriurético tipo B (BNP) é armazenado nos miócitos ventriculares e secretado para circulação com seu fragmento NT-proBNP, quando ocorre aumento. Este estudo avaliou os níveis plasmáticos do peptídeo natriurético NT-proBNP em cães da raça Poodle em diferentes estágios da DVCM, seguindo as diretrizes do American College of Veterinary Internal Medicine (ACVIM, 2009). Amostras de sangue foram coletadas para determinação do biomarcador NT-proBNP para comparação entre grupos. As medianas do NT-proBNP nos grupos estudados foram: 551pmol/L (controle), 302pmol/L (grupo B1), 1.033pmol/L (grupo B2), 954pmol/L (grupo C) e 5.541pmol/L (grupo D). Mediante o uso de um ponto de corte ideal de >709pmol/L, foi possível identificar os cães com aumento cardíaco verdadeiro daqueles sem aumento cardíaco, com sensibilidade de 75% e especificidade de 100%. O NT-proBNP aumentou de acordo com o avanço dos estágios da DVCM, sendo os estágios B2, C e D aqueles com valores mais elevados desse biomarcador. Para o estágio B2, a mensuração do NT-proBNP mostrou ser uma excelente ferramenta para diagnosticar precocemente o aumento cardíaco em cães da raça Poodle

Metabolismo oxidativo de neutrófilos em ovelhas naturalmente infectadas por nematódeos gastrintestinais e correlação entre nível sérico de cortisol e carga parasitária Neutrophils oxidative metabolism in sheep naturally infected by gastrointestinal nematodes and correlation between serum level of cortisol and parasitary burden

Estudaram-se as relações entre o metabolismo oxidativo dos neutrófilos, os níveis séricos de cortisol e a carga parasitária estimada pela contagem de ovos por grama de fezes (OPG) no final da gestação, durante a lactação e após o desmame de ovelhas naturalmente infectadas por nematódeos gastrintestinais. Utilizaram-se 22 ovelhas da raça Suffolk, homogêneas quanto à idade (três a quatro anos), número de parições (terceira) e época de parição. O cortisol sérico foi determinado por radioimunoensaio e o metabolismo oxidativo dos neutrófilos pelo teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT). Os maiores valores de OPG foram observados na quinta semana de lactação, e as maiores taxas de cortisol e de redução do NBT ocorreram na quarta semana pós-desmame. Verificou-se correlação positiva (r = 0,52; P<0,05) entre a capacidade dos neutrófilos reduzirem o NBT e a concentração sérica de cortisol no período pré-parto. Próximo ao parto o metabolismo oxidativo dos neutrófilos diminuiu. Após o desmame a correlação entre o OPG e o teste de redução do NBT foi negativa (r = -0,39; P<0,01). A diminuição do OPG observada após o desmame coincidiu com o aumento da capacidade de os neutrófilos reduzirem o NBT, indicando que animais com melhor resposta imune pós-desmame possuem neutrófilos com metabolismo oxidativo maior e menor carga parasitária.<br>The relationships between neutrophils oxidative metabolism, cortisol serum levels and worm burden, estimated by fecal egg count (EPG), were studied in sheep naturally infected by gastrointestinal parasites at the end of pregnancy, during lactation, and after weaning. Twenty-two Suffolk sheep three to four year-old, of same parity and season of parturition were used. Serum cortisol was determined by radioimmunoassay and the neutrophils oxidative metabolism by the nitroblue tetrazolium (NBT) reduction test. The highest EPG values were observed on the fifth week of lactation while the highest rates of cortisol and reduction of NBT occurred on the fourth week after weaning. A positive correlation (r = 0.52; P<0.01) was observed between the neutrophils capacity to reduce the NBT and the serum cortisol concentration in the pre-parturition period. Otherwise, the neutrophils oxidative metabolism decreased near to the parturition. A negative correlation (r = -0.39; P<0.01) between EPG and NBT reduction test was observed after weaning, which was coincident with the increase in the neutrophils capacity to reduce NBT, indicating that animals showing better immune response after weaning have neutrophils with higher oxidative metabolism and lower worm burden

Aspectos morfológicos, morfométricos e ultraestruturais do baço de ratos após o clampeamento total do pedículo hepático Morphologic, morphometric, and ultrastructural aspects of the spleen of rats after hepatic pedicle total clamping

Avaliaram-se as alterações morfológicas, morfométricas e ultraestruturais que ocorreram no baço devido à isquemia produzida pelo clampeamento total do pedículo hepático. Para tanto, foram utilizados 40 ratos machos, distribuídos em quatro grupos de 10 animais. O grupo-controle (C) não foi submetido à isquemia, e os grupos tratados (E1, E2e E3) foram submetidos ao clampeamento por 10, 20 e 30 minutos, respectivamente. Fragmentos do baço foram retirados e analisados histologicamente pela microscopia de luz (hematoxilina-eosina, ferrocianeto-férrico) e pela microscopia eletrônica de transmissão. Os resultados demonstraram que 10 minutos de clampeamento do pedículo hepático são suficientes para apresentar sinais de congestão esplênica e 20 e 30 minutos promovem intensa digestão de hemácias pelos macrófagos, com presença de grânulos de ferro (hemossiderina) no parênquima esplênico.<br>The macro and microscopic alterations that occurred in the spleen during an ischemia produced by the hepatic pedicle total clamping were studied. Forty male rats were distributed in four groups of 10 animals each. The control group (C) was not submitted to ischemia and the treated groups (E1, E2, and E3) were submitted to the clamping during 10, 20, and 30 minutes, respectively. Spleen fragments were collected and histologically analyzed by the light microscopy (eosin-hematoxilin and ferric ferrocyanide) and by the transmission electron microscopy. The results showed that 10 minutes of hepatic pedicle total clamping was enough produce signs of splenic congestion and 20 and 30 minutes promoted intense red bood cels digestion by the macrophages with the presence of iron granules (hemosiderin) in the splenic parenchyma

Avaliação da resposta inflamatória hematológica em cascavéis (Crotalus durissus Linnaeus, 1758) inoculadas com BCG Assessment of blood inflammatory response in BCG stimulated rattlesnakes (Crotalus durissus Linnaeus, 1758)

A criação de serpentes peçonhentas em cativeiro para produção de soros antipeçonhas possui crescente importância para a saúde pública devido ao aumento do número de notificações de acidentes ofídicos a cada ano no Brasil. Iniciado no século XX, ainda hoje essa atividade apresenta alguns desafios como a instalação de doenças no plantel. O hemograma é um exame de triagem clínica que auxilia no diagnóstico de diversas moléstias que acometem diferentes espécies de animais, no entanto ainda pouco estudado em serpentes. A caracterização das alterações hematológicas em cascavéis inoculadas experimentalmente com BCG pode servir de base na utilização deste exame no auxílio ao diagnóstico de infecções bacterianas na espécie. Dessa forma, foram realizados exames hematológicos em 10 serpentes da espécie Crotalus durissus pertencentes ao plantel da Divisão de Herpetologia do Instituto Vital Brazil. Os animais foram divididos em dois grupos (Grupos 1 e 2), homogêneos entre si em relação ao peso e proporção sexual. Os dois grupos foram inoculados com BCG e submetidos à coleta de sangue antes da inoculação e em três momentos pós-inoculação (3º, 5º, e 7º dias para o Grupo 1 e 11º, 17º e 21º dias para o Grupo 2). O hemograma foi realizado por método semidireto pela utilização de líquido de Natt e Herrick e as lâminas foram coradas pelo Giemsa. Observou-se anemia discreta, com redução dos valores de concentração de hemoglobina corpuscular média e da hemoglobina globular média no Grupo 1 que foi relacionada à doença inflamatória. A trombocitopenia observada no Grupo 2 sugeriu a atuação deste tipo celular em processos inflamatórios. Um único animal do Grupo 1 apresentou granulocitose e alguns animais apresentaram discreta azurofilia. Observaram-se alterações morfológicas nos leucócitos. Os granulócitos apresentaram granulações grosseiras e os azurófilos apresentaram aumento de tamanho e grandes vacúolos. De forma geral, a inoculação de BCG em cascavéis desencadeia respostas inflamatórias hematológicas caracterizadas pela participação de trombócitos, granulócitos e azurófilos.<br>The high demand for anti-venom production in response to the increased number of cases of snakebite envenomation highlights the importance of raising and breeding venomous snakes in captivity. Knowledge of types of venoms and anti-venoms is of great interest to public health. The maintenance of venomous serpents in captivity started in the early twentieth century, but still nowadays it is a challenge to manage and prevent diseases in captive fauna. Hematology is commonly used for general health assessment and illness detection. However, data on serpent blood analysis are still scarce. Alterations in hematological parameters were experimentally induced in rattlesnakes by the inoculation of BCG. Based on this, hemograms can be used as a health auxiliary diagnosis method for bacterial diseases in this species. In this study, blood samples were taken from 10 healthy specimens of rattlesnakes (Crotalus durissus) born and bred in captivity in the Herpetological Division of Vital Brazil Institute. Animals were divided into two groups (group 1 and 2) with similar live weight and sex proportion, and were then inoculated subcutaneously with BCG (Bacillus Calmette-Guérin). Blood samples were taken before and after inoculation at three experimental times (days 3, 5 and 7 for group 1 and days 11, 17 and 21 for group 2). Hematological analysis was performed through semi-direct technique, blood samples were diluted in Natt and Herrick solution and smears were stained by Giemsa. Serpents from group 1 developed discrete anemia due to the inflammatory syndrome, and showed significant decrease of MCH and MCHC. Granulocytes were characterized by the presence of rough granules. The azurophils varied in shape and size and showed large amount of cytoplasmic vacuoles. The thrombocytopenia observed in group 2 suggests that these cells participate in the inflammatory process. A single individual from group 1 showed granulocytosis and a few animals showed a discrete azurophilia. In general, BCG inoculation unleashes hematological inflammatory responses characterized by the presence of thrombocytes, azurophils and granulocytes cells