Solanum lycopersicum y Fragaria x ananassa inhiben la generación de microparticulas derivadas de plaquetas mediada por el Receptor de Tipo Toll-4

155 p.En los últimos años se ha observado que las infecciones bacterianas pueden aumentar el riesgo de trombosis y aterosclerosis por medio de la interacción durante la activación plaquetaria. Existe evidencia que sugiere un rol crucial de la interacción bacteriana con plaquetas humanas en la patogénesis de enfermedades cardiovasculares (ECV), la cuales son la principal causa de mortalidad en el mundo. En el desarrollo de las ECV se describe la liberación de micropartículas derivadas de plaquetas (PDMPs) (0,1-1 micras), las cuales constituyen aproximadamente el 90% de las micropartículas circulantes y se asocian a riesgo de aterotrombosis.El consumo diario de frutas y verduras a largo plazo protegen de infecciones bacterianas, disminuyen la activación plaquetaria y el riesgo de trombosis debido a su alto contenido de compuestos bioactivos. Todo esto nos permite postular que extractos de Solanum lycopersicum y Fragaria x ananassa poseen efecto inhibitorio en la activación y generación de PDMPs mediada por TLR4. En la parte experimental, se procedió a la generación de PDMPs en plaquetas lavadas mediante estimulación con ADP 1 μM,incubando con Solanum lycopersicum, Fragaria x ananassa o compuestos bioactivos en presencia de LPS 9 μg/mL. La detección se realizó mediante el uso de un anticuerpo anti-GP IIIa (CD61) por citometría de flujo (BD Accuri C6). Se determinó que ambos extractos produjeron una inhibición. Al estimular las plaquetas lavadas, se obtuvo una reducción de generación de PDMPs para Solanum lycopersicum alrededor del 60% (p < 0,0001) y para Fragaria x ananassa del 75% (p < 0,0001). Finalmente, podemos concluir que Solanum lycopersicum y Fragaria x ananassa inhiben la generación de PDMPs mediada por TLR4

Derivados estructurales de la adenosina, inhibidores de la función plaquetaria

90 p.Es conocido que las plaquetas son un componente importante en la hemostasia primaria, la cual tiene por objetivo detener hemorragias a través de la formación de un trombo inestable. La agregación plaquetaria es un paso fundamental para poder cumplir el objetivo antes mencionado, es por esto que ha sido ampliamente estudiada durante los últimos años, definiéndose como un proceso extremadamente complejo debido a que depende de múltiples factores para llevarse a cabo, ya sea in vitro o in vivo. El bloqueo de este proceso resulta fundamental para evitar la formación de trombos y coágulos arteriales y/o venosos. Se decidió estudiar dos compuestos que en algunos pacientes evidenciaron disminuir problemas cardiovasculares como fue el Indiplón y SB218078, hipnótico y anticancerígeno respectivamente, y que mediante un análisis molecular se encontró semejanza estructural con Adenosina, inhibidor de la agregación plaquetaria, es por esto que con los compuestos anteriormente mencionado, se buscó modular la función plaquetaria que se produce como complicación contigua a una enfermedad de base como el cáncer y el Insomnio. Se determinó que ambos compuestos utilizados son capaces de modular la función plaquetaria, inhibiendo tanto la activación como la agregación de las plaquetas. Se determinó la inhibición de la agregación plaquetaria mediada por Indiplón con de 500 μM, 125 μM y 10 μM, obteniéndose 70,3% de inhibición de la agregación plaquetaria con la mayor concentración usada. En el caso de SB218078 se utilizaron concentraciones de 50 μM, 25 μM y 12,5 μM, al igual que con Indiplón la mejor concentración fue la mayor inhibiendo en un 77,2% la agregación plaquetaria. En el caso de la activación plaquetaria, medida por la expresión de P-selectina ambos redujeron el porcentaje de expresión de esta en un 34,1% y 29,8% en el caso de Indiplón y SB218078 respectivamente. Ambos derivados estructurales tienen gran modulación en la función plaquetaria por lo que además de ser considerados como tratamiento del Insomnio y cáncer en el caso de Indiplón y SB218078 respectivamente, podrían aportar de buena forma en combatir trombosis como complicaciones secundarias a las enfermedades o asociadas al uso de algunos medicamentos con las que estas son tratadas

Estandarización de ensayos para el análisis de biomarcadores de senescencia

52 p.En la actualidad, existe un aumento de envejecimiento en la población, adquiriendo importancia investigar de los procesos asociados a este tema. En el campo de la investigación se sugieren ciertos marcadores de senescencia que aumentarían en este proceso, activados por estrés oxidativo, procesos replicativos y activación de oncogenes. Teniendo en cuenta esto, se evaluó distintas técnicas asociadas a senescencia celular, estandarizando métodos de viabilidad celular y la determinación de la beta-galactosidasa, cuya expresión ha sido considerada como marcador de senescencia. Se utilizaron fibroblastos provenientes de tejidos de embrión de ratón NIH/3T3, sometiéndolos a estrés oxidativo mediante distintas concentraciones de peróxido de hidrógeno, para la determinación de viabilidad celular y la actividad de la beta-galactosidasa. Para la medición de esta última, se utilizó una técnica enzimática y citoquímica, evaluando también el pH en que actúa la enzima. Las lecturas de viabilidad celular y actividad de la enzima demostraron un proceso de senescencia, al evidenciar una disminución de viabilidad y aumento de la beta-galactosidasa, siendo la concentración de 300 μM de peróxido de hidrógeno, la predominante. Al inducir estrés oxidativo se sugiere un aumento de la beta-galactosidasa, considerándola un biomarcador de senescenci

Efecto antiplaquetario in vitro de la frutilla (Fragraria x ananassa

87 p.La alta y creciente prevalencia de enfermedades cardiovasculares (ECV) ha sido un punto clave en la creación de medidas para mejorar la calidad de vida de la población, es por esto que la contribución del consumo de frutas, legumbres y verduras en la prevención de ECV ha sido tema de investigación. Esta memoria busca determinar la actividad antiagregante plaquetaria in vitro de la frutilla (Fragaria ananassa). La frutilla presenta gran contenido de vitamina C, folatos, una gran variedad de ácidos fenólicos (como el ácido caféico) y minerales (K, P, Ca, Na y Fe). Estos compuestos presentes en la frutilla ayudan a disminuir el riesgo de eventos cardiovasculares, mejoran la función endotelial vascular y disminuyen la trombosis. Para analizar el efecto antiagregante se obtendrán extractos metanólicos de pulpa y pepa de frutilla los cuales serán sometidos a diferentes pH y temperatura, y se les determinara la actividad antiagregante plaquetaria. Además, se realizara un HPLC para establecer la presencia de algún compuesto bioactivo al que se le pueda atribuir el efecto antiagregante plaquetario de la frutilla. Los extractos metanólicos de pepa de frutilla sometidos a diferente temperatura (22 °C y 100 °C) muestra una significativa actividad antiagregante con ADP, TRAP-6, colágeno y ácido araquidónico. A su vez, se obtuvieron resultados significativos de la inhibición de la agregación plaquetaria con extractos metanólicos de pulpa de frutilla inducida por ADP y ácido araquidónico. 10 Al analizar el efecto del pH, los extractos metanólicos de pepa de frutilla presentaron una inhibición de la agregación plaquetaria a pH acido (pH 2) y pH básico (pH 10). En el caso de los extractos metanólicos de pulpa de frutilla mostraron capacidad de inhibir la agregación plaquetaria a pH acido (pH 2) no así a pH básico (pH 10). Ambos resultados fueron estadísticamente significativos. El ácido caféico logro una significativa inhibición de la agregación plaquetaria cercana al 90%, a ello se suma el hecho de que produjo una inhibición de la formación de pseudópodos de las plaquetas. El ácido caféico es un compuesto bioactivo presente en la frutilla que podría ser el responsable de la actividad antitrombotica de la frutilla. Todos esos resultados corroboran el beneficio del consumo de Fragaria ananassa en la prevención de EC

Solanum lycopersicum (tomate) y Nucleósidos inhiben la agregación plaquetaria mediada por el Receptor de Tipo Toll-4

94 p.Las enfermedades cardiovasculares (ECV) son un grupo heterogéneo de enfermedades que afectan al sistema circulatorio y corazón, siendo responsables de aproximadamente un 30% de las muertes a nivel mundial. El rol que juega la activación y posterior agregación de las plaquetas en el curso de estas patologías ha sido estudiado.Sin embargo, la participación de éstas en la respuesta inmune y su interacción con ciertos microorganismos como las bacterias es poco conocida. Actualmente, se ha establecido la presencia de receptores tipo Toll (TLR) en la superficie de las plaquetas. Entre estos, el TLR-4 estaría implicado en el reconocimiento del lipopolisacárido (LPS) de origen bacteriano. Esto implicaría que los pacientes que cursan con infecciones bacterianas presenten una mayor activación de plaquetas, y por ende sean más susceptibles al desarrollo de alteraciones trombóticas y ECV. Debido a que el consumo de frutas y hortalizas previene el desarrollo de las ECV, se han realizado trabajos que demuestran un efecto protector del consumo de Solanum lycopersicum (tomate). Es por esta razón que en este estudio se realizaron ensayos de agregación plaquetaria que incluyeron el uso de extracto metanólico de tomate y nucleósidos como el AMP, Adenosina, Guanosina e Inosina, los cuales representan compuestos activos presentes en el tomate, para determinar su capacidad de inhibir la agregación plaquetaria mediada por TLR-4. Los resultados obtenidos a través de la técnica de agregación plaquetaria in vitro, demuestran que con el extracto de Solanum lycopersicum se obtiene un 5,00 + 1,15% de agregación y el nucleósido AMP es el que genera la menor agregación de plaquetas, con un 6,33 + 1,22%. Por lo tanto, se demuestra la capacidad para inhibir la agregación mediada por TLR-4 de forma dependiente de la concentración, hecho que sumado a los altos niveles de consumo de tomate durante todo el año, podrían hacer de esta hortaliza un componente valioso a la hora de iniciar una dieta cardioprotectora

Efecto de frutas y hortalizas sobre el envejecimiento celular

68 p.En la actualidad se vive un proceso de transición demográfica a nivel mundial, que se presenta con una baja tasa de natalidad y una baja tasa de mortalidad, lo que se traduce en un aumento de la población mayor a 60 años. Debido a esto las políticas en salud deben centrar su prioridad en la población adulta y en las enfermedades que se relacionan con la edad avanzada, como son las enfermedades cardiovasculares, las enfermedades crónicas como la dislipidemia, hipertención y la diabetes mellitus. Es por este motivo, que el tema del envejecimiento celular, en el último tiempo ha tomado un importante auge, que ha sido expandido hacia la comunidad científica; por lo anterior principalmente lo que se busca es retrasar este proceso, para lo cual se deben conocer las causa potenciales que inducen al envejecimiento celular. Hasta el momento se han postulado teorías sobre la generación del envejecimiento celular, las mas nombradas son; la teoría de radicales libres, teoría de acortamiento de telómeros, teoría genómica y teoría endocrina, las cuales se encuentran entrelazadas por una misma base que es la presencia de daño en el ADN, sin embargo el mecanismo exacto por el cual se induce envejecimiento aún permanece desconocido. Dando solución a esta problemática, en el último tiempo se ha tratado de retrasar el envejecimiento celular con antioxidantes provenientes de frutas y hortalizas, cuyas propiedades están bien estudiadas, junto con su efecto en el envejecimiento celular. En esta revisión bibliográfica, se presentan las principales evidencias encontradas en publicaciones científicas de actualidad relativa a los puntos anteriores, y de acuerdo a estas se postula una propuesta con la finalidad de resolver las interrogantes planteadas, como es el mecanismo específico, vías de señalización y genes implicados por el cual se induce daño y posterior envejecimiento celular. Así como también el estudio de otro compuesto derivado de frutas y hortalizas que aún no presenta estudios relevantes sobre su propiedad antioxidant

Rol protector del orujo de uva en el envejecimiento celular en un modelo de fibroblastos de ratón

62 p.Introducción: El envejecimiento se caracteriza por una disfunción generalizada, favoreciendo el aumento de especies reactivas del oxígeno. Se ha demostrado que el consumo de frutas y hortalizas presenta efectos beneficiosos para la salud. La uva contiene una gran cantidad de polifenoles, compuestos que tienen acción antioxidante. Debido a lo anterior, se estudiará el efecto de orujo de uva sobre el envejecimiento celular. Materiales y Métodos: Cultivo de fibroblastos con extracto de orujo de uva, de frutilla y Ac. Felúrico a diferentes condiciones, utilizando peróxido de hidrógeno como inductor de senescencia. La actividad de β-galactosidasa se utilizó como marcador de senescencia. Resultados: Las células tratadas con los compuestos frente al peróxido de hidrógeno aumentan el porcentaje de viabilidad, por otro lado, se disminuye la actividad de β-galactosidasa. Discusión: Los resultados sugieren que los compuestos contrarrestan el daño producido por el peróxido de hidrogeno, al actuar como antioxidantes

Efectos antiplaquetarios de compuestos bioactivos aislados de Solanum lycopersicum L

53 p.Los avances en la medicina moderna han permitido desarrollar estrategias altamente efectivas para combatir enfermedades cardiovasculares (ECV) que año a año aumentan las cifras de morbimortalidad en Chile y el mundo, sin embargo, queda pendiente plantear medidas para mejorar la prevención primaria de ECV, es decir, poner en práctica acciones destinadas a prevenir la aparición de enfermedades, como educar a la población sobre la alimentación que ayude a prevenir estos eventos perjudiciales para la salud. El siguiente trabajo se enfoca en el estudio de las propiedades antiagregantes del Solanum lycopersicum con los antecedentes de las propiedades antiagregantes plaquetarias que ya se conocen de esta hortaliza; se pretende evaluar concretamente derivados del ácido hidroxicinámico. Se demostró que todos los compuestos estudiados tienen algún efecto antiagregante en alguna medida, los resultados con menor rendimiento se encuentran con el ácido clorogénico, mientras que el ácido ferúlico mostró ser bastante eficiente inhibiendo la agregación plaquetaria en presencia de agonistas clásicos como colágeno, ADP, TRAP y ácido araquidónico. En los estudios de spreading se pudo evidenciar además cómo los compuestos provocan una disminución de la activación plaquetaria, evitando la formación de grandes filopodios que se aprecian en los controles sin el compuesto

Adenosina reduce la secreción del péptido Aβ40 amiloide plaquetario

90 p.En la enfermedad de Alzheimer, se producen placas seniles compuestas por péptido Aβ, y se ha visto que las plaquetas cuando se activan con agonistas, como trombina, son capaces de liberar el péptido Aβ40, el cual va a ir a depositarse en las placas cerebrovasculares. Con el objetivo de demostrar que la Adenosina es capaz de inhibir la secreción plaquetaria del péptido Aβ40 asociada a la activación de la calpaína inducida por TRAP-6, se realizo agregaciones plaquetarias, en donde la adenosina produjo una baja del estado activado, desde un 83% a un 3%. Inhibio la expresión de P-selectina en la superficie de las plaquetas desde el estado activado, de un 81% a un 48,5%. La actividad de la calpaína se vio disminuida por adenosina, a un 20,72% del estado activado. Finalmente, la secreción del péptido Aβ40 plaquetario, cuando se trato con adenosina, produjo un porcentaje de inhibición de un 43,21%, con respecto al estado activado. Finalmente, la adenosina inhibe la síntesis del péptido Aβ40 por parte de las plaquetas, y así evitar la formación de placas seniles, caracteristicos de la enfermedad de alzheimer

Purificación y efectos funcionales de los anticuerpos anti-β2 glicoproteína

71 p.El síndrome antifosfolípido (SAF), también conocido como síndrome de Hughes, es un trastorno autoinmune multisistémico, clínicamente caracterizado por eventos de trombosis venosa y / o trombosis arterial, o por la pérdida fetal recurrente (muerte fetal, parto prematuro, o recurrentes pérdidas embrionarias) y trombocitopenia, asociada con títulos persistentemente elevados de anticuerpos antifosfolípidos (aFl), anticoagulante lúpico (aL) y/o anticuerpos anticardiolipinas (aCl). Dichos anticuerpos se ligan al complejo formado por fosfolípidos aniónicos, principalmente cardiolipina, y proteínas plasmáticas que se ligan a estos fosfolípidos, principalmente una apolipoproteína denominada β2GPI. El propósito de esta tesis es obtener anticuerpos anti- β2GPI a partir de ratones C57BL/6 previamente inmunizados con la proteína purificada desde plasma humano normal, y probar su actividad en diferentes ensayos funcionales. Para su purificación se usó cromatografía de afinidad en columna, una primera para el aislamiento de Inmunoglobulina G (IgG), y una segunda con afinidad β2GPI, las alícuotas resultantes producto de esta purificación fueron evaluadas por técnicas de ELISA y Western Blot.Es posible inducir la producción de anticuerpos antifosfolípidos con especificidad anti- β2GPI en ratones C57BL/6 inmunizados con la proteína purificada desde plasma humano normal. El método de purificación de anticuerpos anti- β2GPI donde se utilizaron estas dos columnas de afinidad, logra un eficaz aislamiento de estos anticuerpos. Se llegó a estas conclusiones por medio de los resultados obtenidos en los ensayos de ELISA- β2GPI e inmunoelectroforesis, Western Blot y Agregación plaquetaria para detección de los anticuerpos inducidos y comprobando actividad trombótica, la que a su vez puede ser inhibida por compuestos naturales antitrombóticos