Neurocysticercosis immunodiagnosis: immunoenzimatic assay with antigens covalently bounded on nylon treated resin to detect antibodies in CSF and sera

The enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA, was developed in a new type of support consisting of discs of sinthetic fabric-resin (ELISA-d) with antigenic components of Cysticercus cellulosae covalently bound for detection of antibodies in sera and cerebrospinal fluid (CSF). The support fabric-resin consistis of poliéster fabric coated with crosslinked resin (N-methylol-acrylamide) containing N-methylol groups able to form covalent bounds with functional groups of proteins and polysaccharides which are present in the antigenic saline extract obtained from Cysticercus cellulosae. Sera titer and CSF titer were determined using only one dilution according to the dose-response standard curves obtained. Thirty-eight sera and 74 CSF from patients with confirmed diagnosis of neurocysticercosis and 50 sera and 107 CSF from a control group (patients suffering from neurological disorders other than neurocysticercosis and supposedly healthy individuals) were assayed The sensitivity and the specificity of ELISA-d were determined: 94.7% and 92.0% for sera and 98.6% and 100% for CSF. The ELISA-d test proved to be efficient for the diagnosis of neurocysticercosis, mainly when carried out in CSF, with the advantages of good stability, easy preparation and execution and low cost.Foi padronizado o teste imunoenzimático, ELISA, utilizando-se componentes antigênicos de Cysticercus cellulosae quimicamente ligados a suportes sólidos constituídos de discos de tecido-resina (ELISA-d), para pesquisa de anticorpos em soro líquido cefalorraquiano (LCR), ensaiando-se uma única diluição do espécime clínico. O suporte tecido-resina foi composto de tecido de poliéster impregnado com resina polimerizada de N-metilol-acrilamida, apresentando grupos N-metilol livres, capazes de reagir covalentemente com grupos funcionais de proteínas e polissacarídeos presentes no extrato antigênico salino total obtido de cisticercos. Foram ensaiados 38 soros e 74 LCR de pacientes com neurocisticercose comprovada e 50 soros e 107 LCR do grupo controle (pacientes com quadros clínicos neurológicos diversos e indivíduos supostamente normais). Obtivemos os seguintes índices de sensibilidade e especificidade: 94,7% e 92,0% para o teste realizado no soro e 98,6% e 100% para o teste realizado no LCR. O teste ELISA-d mostrou-se eficiente para o diagnóstico da neurocisticercose, principalmente quando realizado no LCR, com vantagens de estabilidade, facilidade de execução e baixo custo

Detecção de IgE total em amostras pareadas de líquido cefalorraquiano e soro de pacientes com neurocisticercose

Neurocysticercosis (NC), the presence of Taenia solium metacestodes in tissues, is the most frequent and severe parasitic infection of the central nervous system. We investigated the presence of total IgE by an automated chemiluminescence assay in 53 paired cerebrospinal fluid (CSF) and serum samples from patients with NC (P) and in 40 CSF samples from individuals with other neurological disorders as the control group (C). Total IgE concentration ranged from 1.2 to 6.6 IU/ml (mean = 1.4 IU/ml, standard deviation-sd = 1.1 IU/ml) in 28.3% of CSF samples from the P group, a value significantly higher than for the C group (£1.0 IU/ml). The serum samples from the P group showed concentrations ranging from 1.0 to 2330.0 IU/ml (mean = 224.1 IU/ml, sd = 452.1 IU/ml), which were higher than the normal value cited by the manufacturer (<100.0 IU/ml) in 32.1% of the samples. A significant difference was observed in CSF samples from the P and C groups (p = 0.005) and in serum samples from the P group compared to the normal value (p = 0.005), with sera showing more frequent abnormal results.Neurocisticercose (NC), causada pela presença da forma larvária de Taenia solium em tecidos, é a mais frequente e grave infecção parasitária que acomete o sistema nervoso central. Nós investigamos a presença de IgE total por quimiluminescência em 53 amostras pareadas de líquido cefalorraquiano (LCR) e soro de pacientes com NC (P) e 40 amostras de LCR de indivíduos portadores de outras desordens neurológicas como grupo controle (C). A detecção de IgE total mostrou 28,3% das amostras de LCR do grupo P com concentrações entre 1,2 UI/ml e 6,6 UI/ml (média = 1,4 UI/ml, desvio padrão-sd = 1,1 UI/ml), maiores que o grupo C (£1,0 UI/ml). As amostras de soro do grupo P mostraram concentrações entre 1,0 UI/ml e 2330,0 UI/ml (média = 224.1 UI/ml, sd = 452,1 UI/ml), e 32,1% das amostras apresentaram valores maiores que o valor normal citado pelo fabricante (<100,0 UI/ml). Diferença significativa foi encontrada entre as amostras de LCR dos grupos P e C (p = 0,005) e entre as amostras de soro do grupo P e valor de referência (p = 0,005), sendo os resultados dos soros mais frequentemente alterados

Teste ELISA para diagnóstico da cisticercose suína usando antígenos de larvas de Taenia solium e Taenia crassiceps

Foi padronizado o teste ELISA para o diagnóstico da cisticercose suína. Após confirmação por exame post-mortem, os soros dos respectivos animais foram empregados como controles positivos e negativos. Soros de suínos portadores de infecções heterólogas foram ensaiados para determinação de reações cruzadas. Os quatro antígenos testados na fase de padronização foram líquido vesicular (VF) e extrato total (T) de larvas de Taenia crassiceps (Tcra) e de extrato de escólex (S) e de cisticercos (T) de Taenia solium (Tso). A titulação em bloco das ótimas concentrações de antígenos e diluições de soros e de conjugado, bem como o emprego de Tween-20 e de leite desnatado nas soluções bloqueadora e de lavagem exerceram nítida influência no desempenho do teste ELISA. Todos os antígenos revelaram bom desempenho na diferenciação entre soros positivos e negativos para cisticercose. O antígeno VF-Tcra apresentou as mais altas taxas de desempenho, seguido do T-Tcra. As taxas de desempenho para o antígeno VF-Tcra foram, respectivamente, para pontos de corte com 2sd e 3sd, de 96,0% e 80,0% para sensibilidade e de 97,5% e 100,0% para especificidade. Foi detectada reação cruzada com soros de hidatidose e de ascaridiose. Considerando o bom desempenho observado, o teste padronizado pode ser recomendado em matadouros no diagnóstico de animais suspeitos e no levantamento da ocorrência da doença nos segmentos de criação, sobretudo nos clandestinos, dando suporte às medidas de controle da cisticercose, integradas em toda a cadeia de produção da carne suína, exercendo efetiva contribuição à Saúde Pública.In the present study ELISA was standardized for the diagnosis of swine cysticercosis based on necropsy parameters and confirmed positive and negative control sera. Serum samples from pigs with other infections were also assayed to determine possible cross-reactions. Four antigens were assayed: from Taenia crassiceps vesicular fluid (VF-Tcra) and crude larvae extract (T-Tcra), and from Taenia solium extracts of scolex (S-Ts) and of larvae (T-Ts). A checkerboard evaluation of antigen, serum and conjugate dilutions, as well as the use of Tween-20 and skim cow milk in wash and blocking solution had a marked effect on improving ELISA performance. All the antigens showed a good performance, but VF-Tcra was the best, with 96.0% and 80.0% sensitivities for cut-offs respectively at 2sd and 3sd, and corresponding specificities of 97.5% and 100.0%. Cross-reactivity was observed only with hydatidosis and ascaridiosis. In view of the high performance observed, the ELISA test should be recommended for the diagnosis of cysticercosis in suspected swine in slaughterhouses and for the screening of cysticercosis in swine production. These results will support integrated measures of cysticercosis control throughout the chain of swine production, effectively contributing to public health

Sorodiagnóstico da neurocisticercose em pacientes com crises epiléticas, por meio de ELISA e immunoblot

Sera from 88 patients from Santa Catarina and São Paulo states of Brazil, with epileptic seizures who underwent cerebral computed tomography (CT) were analyzed for the detection of antibodies to T. solium cysticercus by ELISA and Immunoblot (IB) with the following antigens: Taenia solium cysticercus total saline (Tso), Taenia crassiceps cysticercus vesicular fluid (Tcra-vf) and T. crassiceps cysticercus glycoproteins (Tcra-gp). ELISA carried out with Tso, Tcra-vf and Tcra-gp antigens showed 95%, 90% and 80% sensitivities, respectively, and 68%, 85% and 93% specificities, respectively. In the epileptic patients group, ELISA positivity was 30%, 51% and 35% with Tso, Tcra-vf and Tcra-gp antigens respectively. Considering the IB as the confirmatory test, the positivity was 16% (14/88) in the epileptic patients total group and 22% (12/54) in the epileptic patients with positive CT and signals of cysticercosis. We found a significant statistical correlation among ELISA or IB results and the phase of the disease when any antigens were used (p < 0.05). We emphasize the need to introduce in the laboratory routine the search for neurocysticercosis (NC) in patients presenting with epileptic seizures because of the high risk of acquiring NC in our region and its potential cause of epilepsy.Amostras de soro de 88 pacientes dos Estados de Santa Catarina e São Paulo, Brasil, com crises epilépticas e que se submeteram a exame de Tomografia Computadorizada (TC), foram examinadas para detecção de anticorpos anti-cisticercos de Taenia solium por meio de ELISA e Immunoblot (IB) utilizando-se os seguintes antígenos: extrato salino total de cisticercos de T. solium (Tso); líquido vesicular de Taenia crassiceps (Tcra-vf) e glicoproteínas purificadas de cisticercos de T. crassiceps (Tcra-gp). Os resultados de ELISA com os antígenos Tso, Tcra-vf e Tcra-gp mostraram 95%, 90% e 80% de sensibilidade, respectivamente, e 68%, 85% e 93% de especificidade, respectivamente. No grupo de pacientes epilépticos, a positividade do ELISA foi 30%, 51% e 35% com os antígenos Tso, Tcra-vf e Tcra-gp, respectivamente. Considerando o IB como teste confirmatório, a positividade foi de 16% (14/88) no grupo total de pacientes epilépticos e 22% (12/54) no grupo de pacientes epilépticos com TC positiva e sinais clínicos compatíveis com neurocisticercose. Foi encontrada correlação estatística significativa entre os resultados de ELISA ou IB e a fase da doença com quaisquer dos antígenos utilizados (p < 0,05). Os resultados indicam a necessidade de introduzir na rotina dos laboratórios o diagnóstico de neurocisticercose nos pacientes com convulsões epilépticas devido ao elevado risco de aquisição da cisticercose em nossa região e sua participação na etiologia da epilepsia

Human cysticercosis in a general hospital in S.Paulo, Brazil

Foi realizado estudo retrospectivo de pacientes internados no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo, São Paulo (Brasil), no período de 7 anos (1979 a 1985), tendo sido diagnosticados 260 casos de cisticercose, correspondendo a 0,2% do total estudado. Os dados obtidos mostraram uma distribuição aproximadamente igual quanto ao sexo e o acometimento maior na faixa etária de 20 a 50 anos (53,8%). A neurocisticercose foi a forma mais freqüente e seu elevado percentual (91,5%) foi atribuído às características da população estudada. Apesar do recente desenvolvimento da tecnologia diagnostica e terapêutica específicas, o tempo de permanência hospitalar médio foi de 35 dias e a letalidade média de 14,6%, apontando para a necessidade de medidas profiláticas através de programas de saúde pública.In this retrospective study of 126,968 in-patients at the Hospital das Clínicas of S. Paulo Medical School, S. Paulo, from 1979 to 1985, cysticercosis was diagnosed in 260 (0.2%) of them Epidemiological data obtained from these 260 patients showed a dose distribution with regard to sex, and the age group from 20 to 50 years old was the most affected (53.8%). Neurocysticercosis was the most frequent and the high rate (91.5%) was understood to be due to the characteristics of specific the patients studied. Despite the recent development of the diagnostic and therapeutic technology, the average length of hospitalization was 35 days and the rate of lethality 14.6%, pointing to the need for preventive measures on the part of public health programs

Avaliação de testes imunológicos para o diagnóstico da neurocisticercose

Introdução: O diagnóstico da neurocisticercose (NCC) deve ser feito pela associação de técnicas de imagem com métodos imunológicos sensíveis e específicos. Objetivos: Avaliar os métodos Elisa e Western blot (Wb), utilizando-se como antígeno extrato bruto salino da larva da Taenia solium, o Cysticercus cellulosae e Wb, empregando-se como antígeno cisticercos da Taenia crassiceps em amostras de soro, para o diagnóstico da NCC. Materiais e métodos: Foram avaliadas amostras de soro de 43 pacientes com diagnóstico de NCC: 21 por clínica, tomografia computadorizada de crânio (TC) e presença de anticorpos anticisticerco no líquido cefalorraquiano (LCR); 22 por clínica e TC e 229 pacientes com diferentes parasitoses. Para as análises desses materiais biológicos foram empregados os métodos Elisa, usando-se como antígeno C. cellulosae, e Wb, usando-se como antígeno C. cellulosae e Cysticercus longicollis. Resultados: O método Elisa utilizando C. cellulosae como antígeno apresentou especificidade de 95% e sensibilidade de 71%. O método Wb utilizando C. cellulosae ou C. longicollis como antígeno apresentou sensibilidade de 86% e especificidade de 99%. Conclusões: Os métodos imunológicos no LCR são importantes para a definição da NCC. Entretanto o método Elisa no soro ainda não é adequado pela sua baixa sensibilidade, mas o Wb apresentou alta especificidade e boa sensibilidade, podendo auxiliar no diagnóstico da NCC, possibilitando sugerir a existência de forma transicional da doença, não demonstrada pela TC.<br>Background: The diagnosis of neurocysticercosis (NCC) has been made by association of neuroimaging studies and use of sensitive and specific serological assays. Objectives: Evaluating Elisa and Western blot (Wb) tests using a crude extract of Cysticercus cellulosae (Taenia solium) as antigen and a Wb test using a glycoprotein of Cysticercus longicollis (Taenia crassiceps) as antigen for the diagnosis of NCC. Methods: Serum samples from 43 patients with NCC: 21patients presenting clinical manifestations, cerebral computed tomography findings compatible with cerebral lesions and high levels of anti-cysticercus antibodies in cerebrospinal fluid (CSF); 22 patients with clinical manifestations and cerebral computed tomography findings compatible with cerebral lesions and serum samples from 229 patients with other parasitic infections were tested by Elisa standardized with crude extract of C. cellulosae and Wb standardized with glicoprotein of C. cellulosae and C. longicollis. Results: The Elisa test using crude extract of C. cellulosae showed specificity of 95% and sensibility of 71%. Both tests using glycoproteins of either C. cellulosae or C. longicollis showed specificity of 99% and sensibility of 86%. Conclusions: The use of immunological techniques for antibodies detection in CSF was shown to be an important tool for NCC diagnosis. However, detection of antibodies in serum lacked sensibility when Elisa was evaluated. The Wb assay in serum samples was sensitive and specific and it can be helpful for the diagnosis of the transitional form of NCC frequently not detected by cerebral computed tomography

Reação de hemaglutinação passiva para o imunodiagnóstico da neurocisticercose humana: I. Padronização e avaliação do teste de hemaglutinação passiva para a detecção de anticorpos anti-Cysticercus cellulosae

Foi padronizada e avaliada a reação de hemaglutinação passiva (RHA) para pesquisa de anticorpos específicos, anti-Cysticercus cellulosae, no líquido cefalorraquiano (LCR). Foram utilizadas hemácias humanas O Rh-formolizadas e sensibilizadas com extrato antigênico salino total de cisticercos, ainda pouco estudado. De 115 amostras estudadas de LCR de pacientes com neurocisticercose, 94 foram reagentes, resultando em 81,7% de sensibilidade, com intervalo de confiança de 95% de probabilidade (IC95%) abrangendo de 74,5% e 88,9%. Também foram ensaiadas 89 amostras de LCR de indivíduos do grupo controle, sendo tão reagentes em 94,4%, com IC95%, de 89,6% a 99,2%. Os valores preditivos positivo e negativo obtidos para a RHA foram, respectivamente, de 1,4% e 99,9%, considerando a prevalência média de neurocisticercose na América Latina de 0,1%. Os resultados indicam que a RHA como um método simples, altamente reprodutível e moderadamente sensível para a detecção de anticorpos específicos no LCR, porém apropriados para a triagem de infectados.A passive haemagglutination test (PHA) for human neurocysticercosis was standardized and evaluated for the detection of specific antibodies to Cysticercus cellulosae in cerebrospinal fluid (CSF). For the assay, formaldehyde-treated group O Rh-human red cells coated with the cysticerci crude total saline extract (TS) antigen were employed. A total of 115 CSF samples from patients with neurocysticercosis was analysed, of these 94 presented reactivity, corresponding to 81.7% sensitivity, in which confidence limit of 95% probability (CL95%) ranged from 74.5% to 88.9%. Eighty-nine CSF samples derived from individuals of control group presented as nonreactive in 94.4% (CL95% from 89.6% to 99.2%). The positive and negative predictive values were 1.4% and 99.9%, respectively, considering the mean rate of that this assay provide a rapid, highly reproducible, and moderately sensitive mean of detecting specific antibodies in CSF samples

Reação de hemaglutinação passiva para o imunodiagnóstico da neurocisticercose humana: II - Comparação de duas metodologias para o preparo de reagente para a reação de hemaglutinação passiva na detecção de anticorpos anti-Cysticercus cellulosae no líquido cefalorraquiano

A comparison of two different standardized reagent procedures for the passive haemagglutination test (PHA) in the detection of specific antibody to Cysticercus cellulosae in cerebrospinal fluid (CSF) was carried out. The formaldehyde-treated group O Rh-human red blood cells (HuRBC) and glutaraldehyde-treated sheep red blood cells (SRBC) were the supplies for the reagents preparation and, in the tests, they were designated as PHA-1 and PHA-2, respectively. For both reagents the cells were coated with the cysticerci total saline extract (TS) antigen. PHA-1 and PHA-2 were assessed in a total of 204 CSF from patients with neurocysticercosis, from non-related infections and from healthy individuals. The positivity and specificity indices obtained were respectively 81.7% and 94.4% for PHA-1 and for PHA-2, 88.7% and 96.6%. Since no significant differences were observed between the results provided by two reagents, at level of significance of 0.05, either processes of cell sensitization can alternatively be used according to the own laboratory convenience.São descritas duas metodologias para o preparo de reagente para a reação de hemaglutinação passiva (RHA) destinada à pesquisa de anticorpos anti-Cysticercus cellulosae no líquido cefalorraquiano (LCR). Foram utilizadas hemácias humanas O Rh-formolizadas (HA-1) e hemácias de carneiro tratadas com glutaraldeído (HA-2), sensibilizadas com extrato antigênico salino total (ST) de cisticercos. Cento e quinze amostras de LCR de pacientes com neurocisticercose foram ensaiadas pelos testes HA-1 e HA-2, resultando em positividade de 81,7% e 88,7%, respectivamente. A especificidade obtida foi de 94,4% para HA-1 e 96,6% para HA-2. Não foi observada diferença significativa quanto à capacidade diagnostica dos reagentes na RHA em neurocisticercose (p < 0.05)