Altered expression of Bcl-2 and Bax in follicles within dehydroepiandrosterone-induced polycystic ovaries in rats

PCOS (polycystic ovary syndrome) is a heterogeneous disease characterized by hyperandrogenaemia, hirsutism, oligo- or amenorrhea, insulin resistance and anovulation. The aim of the present study was to evaluate if the balance between the ovarian expression of Bax (proapoptotic protein) and Bcl-2 (antiapoptotic protein) is altered in a PCOS model developed in rats by DHEA (dehydroepiandrosterone) administration. In addition, the ovarian morphology and the circulating progesterone levels were evaluated. Histological studies confirmed the presence of follicular cysts, atretic follicles and the absence of corpora lutea in the ovaries from the PCOS group and a significant decrease in circulating progesterone levels. Immunohistochemical studies showed that the expression of Bcl-2 and Bax were mainly localized in granulosa cells of AFs (antral follicles) in both groups. Bax expression was greater in preantral and AFs from PCOS ovarian sections than in the controls. In contrast, intense Bcl-2 immunostaining was observed in the control AFs, while Bcl-2 protein was either absent in PFs (preantral follicles) or weakly expressed in AFs from PCOS rats. These results were partially confirmed by western studies. Data revealed that the ovarian level of Bcl-2 protein was lower in PCOS than in the control and that there were no differences in Bax ovarian levels between groups. However, Bax/Bcl-2 ratio was significantly higher in PCOS group than in the control group. In conclusion, an increase in ovarian apoptosis through an imbalance among the Bcl-2 family members may be involved in the transformation of growing follicles in cystic follicles in the ovaries from DHEA-induced PCOS rats.Fil: Bas, Diana Ester. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); ArgentinaFil: Abramovich, Dalhia Nurit. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); ArgentinaFil: Hernandez, Silvia Fátima. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); ArgentinaFil: Tesone, Marta. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); Argentin

Regulación autocrina y paracrina del ovario

El reclutamiento cíclico y selección de los folículos representa un proceso continuo, que eventualmente llega a la formación de uno o más folículos preovulatorios, cuyo número varía en cada especie. En los primeros días del ciclo menstrual en la mujer, aumentan los niveles circulantes de FSH, como consecuencia, una cohorte de folículos antrales escapa de la apoptosis que los llevaría a la atresia folicular. Dentro de este grupo, alrededor de 10 folículos antrales crecen más rápido y producen altos niveles de estrógenos e inhibina, seleccionándose entre éstos el folículo dominante. A pesar de que no se conoce exactamente por qué un folículo emerge como dominante, se postula que éste posee una mayor sensibilidad a FSH, debido a una mayor expresión de receptores de FSH y/o LH. Asociado a este proceso, el estradiol y los factores de crecimiento locales ejercen un efecto permisivo, amplificando la acción de la FSH en los folículos que están madurando.Fil: Tesone, Marta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Abramovich, Dalhia Nurit. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Parborell, Maria Fernanda Agustina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentin

PDGFB as a vascular normalization agent in an ovarian cancer model treated with a gamma-secretase inhibitor

Ovarian cancer is the fifth leading cause of cancer-related deaths in women. In the past 20 years, the canonical types of drugs used to treat ovarian cancer have not been replaced and the survival rates have not changed. These facts show the clear need to find new therapeutic strategies for this illness. Thus, the aim of the present study was to investigate the effect of a gamma-secretase inhibitor (DAPT) in combination with the Platelet-derived growth factor B (PDGFB) on an ovarian cancer xenograft model. To achieve this goal, we analyzed the effect of the administration of DAPT alone and the co-administration of DAPT and recombinant PDGFB on parameters associated with tumour growth and angiogenesis in an orthotopic experimental model of ovarian cancer. We observed that the dose of DAPT used was ineffective to reduce ovarian tumour growth, but showed anticancer activity when co-administered with recombinant PDGFB. The administration of PDGFB alone normalized tumour vasculature by increasing periendothelial coverage and vascular functionality. Interestingly, this effect exerted by PDGFB was also observed in the presence of DAPT. Our findings suggest that PDGFB is able to improve tumor vascularity and allows the anticancer action of DAPT in the tumor. We propose that this therapeutic strategy could be a new tool for ovarian cancer treatment and deserves further studies.Fil: Pazos Maidana, María Camila. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Sequeira, Gonzalo Ricardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Bocchicchio, Sebastian. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: May, Maria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Abramovich, Dalhia Nurit. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Parborell, Maria Fernanda Agustina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Tesone, Marta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Irusta, Griselda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentin

Effects of an inhibitor of the gamma-secretase complex on proliferation and apoptotic parameters in a FOXL2-mutated granulosa tumor cell line (KGN).

Ovarian granulosa cell tumors (GCTs) represent 3%-5% of all ovarian malignancies. Treatments have limited proven efficacy and biologically targeted treatment is lacking. The aim of this study was to investigate the role of Notch signaling in the proliferation, steroidogenesis, apoptosis, and phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/AKT pathway in a FOXL2-mutated granulosa tumor cell line (KGN) representative of the adult form of GCTs. When Notch signaling is initiated, the receptors expose a cleavage site in the extracellular domain to the metalloproteinase TACE and, following this cleavage, Notch undergoes another cleavage mediated by the presenilin-gamma-secretase complex. To achieve our goal, DAPT, an inhibitor of the gamma-secretase complex, was used to investigate the role of the Notch system in parameters associated with cell growth and death, using a human granulosa cell tumor line (KGN) as an experimental model. We observed that JAGGED1, DLL4, NOTCH1, and NOTCH4 were highly expressed in KGN cells as compared to granulosa-lutein cells obtained from assisted reproductive techniques patients. The proliferation and viability of KGN cells, as well as progesterone and estradiol production, decreased in the presence of 20 μM DAPT. Apoptotic parameters like PARP and caspase 8 cleavages, BAX, and BCLXs increased in KGN cells cultured with DAPT, whereas others such as BCL2, BCLXl, FAS, and FAS ligand did not change. AKT phosphorylation decreased and PTEN protein increased when Notch signaling was inhibited in KGN cells. We conclude that the Notch system acts as a survival pathway in KGN cells, and might be interacting with the PI3K/AKT pathway.Fil: Irusta, Griselda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); ArgentinaFil: Pazos Maidana, María Camila. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); ArgentinaFil: Abramovich, Dalhia Nurit. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); ArgentinaFil: de Zúñiga, Ignacio Javier. Centro Médico PREGNA Medicina Reproductiva; ArgentinaFil: Parborell, Maria Fernanda Agustina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); ArgentinaFil: Tesone, Marta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentin

Experimental techniques for the study of angiogenesis in female reproductive diseases

El desarrollo vascular en el tracto reproductivo femenino es un proceso que se encuentra restringido a la formación del cuerpo lúteo y a la proliferación del endometrio uterino durante los ciclos menstruales. Se han identificado numerosos inductores de la angiogé- nesis, que incluyen, entre otros, los miembros del factor de crecimiento fibroblástico (FGF) y la familia del factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF), angiopoyetinas (ANGPT), factor de crecimiento transformante (TGF) y factor derivado de plaquetas (PDGF). Los defectos en la angiogénesis ovárica contribuyen a una variedad de desórdenes, incluyendo anovulación e infertilidad, pérdida de embarazo, síndrome de hiperestimulación ovárica (SHEO), síndrome de ovario poliquístico (SOP) y neoplasmas ováricos. Es decir, el endotelio es una fuente y un blanco de sustancias vasoactivas que son secretadas debido a las condiciones que se desencadenan durante los desórdenes ya mencionados. Para evaluar los mecanismos bioquímicos y moleculares que participan en la angiogénesis, se han desarrollado métodos in vitro (migración por herida, tubulogénesis, etc.) e in vivo (implante de Matrigel, membrana corionalantoide, etc.). Los ensayos in vitro pueden ser útiles para validar los primeros pasos de la angiogénesis pero deben ser confirmados por estudios in vivo. En particular, los ensayos in vitro e in vivo descriptos en este trabajo para evaluar el desarrollo de los vasos pueden ser aplicados para el estudio de desórdenes reproductivos con alteraciones en la angiogénesis (SHEO, SOP, cáncer de ovario, etc.) mediante la utilización del suero, líquido peritoneal, fluido folicular o de biopsias de distintos tejidos provenientes de las pacientesFil: Scotti, Leopoldina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); ArgentinaFil: Abramovich, Dalhia Nurit. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); ArgentinaFil: Irusta, Griselda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); ArgentinaFil: Pazos Maidana, María Camila. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); ArgentinaFil: Pascuali, Natalia Marisa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); ArgentinaFil: Haro Durand, Luis Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); ArgentinaFil: Tesone, Marta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Parborell, Maria Fernanda Agustina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental (i); Argentin

Foliculogénesis

La foliculogénesis es el proceso de crecimiento del folículo y su pasaje a través de los distintos estadios de desarrollo, desde el momento del cual que emerge de la reserva de folículos formados durante la ovogénesis, hasta que es ovulado o entra en atresia (regresión o muerte del folículo). Antes del nacimiento, las células germinales primordiales u ovogonias cesan su división mitótica y comienzan el proceso de meiosis, quedando arrestados en la profase de la primera división meiótica. En este momento, se denominan ovocitos primarios. Los ovocitos se rodean de una capa única de células foliculares aplanadas llamadas pregranulosa. En esta fase, las superficies del ovocito y de las células foliculares envolventes son lisas y están en estrecho contacto. Las células de la pregranulosa se encuentran envueltas en la llamada lámina basal que separa a este tipo celular de todo elemento que la rodea, incluyendo vasos sanguíneos, capilares y nervios 1 . Estos folículos se denominan folículos primordiales y constituyen la reserva de folículos en reposo, los cuales serán progresivamente eliminados durante la vida reproductiva. Aparecen en el humano en la semana 16 de embarazo y su formación terminaría aproximadamente en la semana sexta luego del nacimiento 2 . Al momento del nacimiento, el ovario humano contiene alrededor de 1.000.000 de folículos. Para que estos folículos primordiales inicien su crecimiento, es necesaria una compleja interacción entre factores estimulatorios e inhibitorios.Fil: Abramovich, Dalhia Nurit. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina. Universidad de Belgrano. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Irusta, Griselda. Universidad de Belgrano. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Parborell, Maria Fernanda Agustina. Universidad de Belgrano. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentin

Estudio de la foliculogénesis y apoptosis ovárica luego de la administración intraovárica de un inhibidor de VEGF (R1/Fc Chimera)

La angiogénesis en condiciones fisiológicas es infrecuente en el adulto a excepción del tracto reproductor femenino. Los folículos ováricos preantrales no poseen vasculatura propia, la cual es adquirida durante el desarrollo del antro (1). La adquisición de un adecuado aporte sanguíneo es posiblemente un paso limitante en la selección y maduración del folículo dominante (1). La degeneración del lecho capilar en folículos que no lograron desarrollarse es un factor relevante causante de atresia (2). El folículo ovárico y el cuerpo lúteo producen el factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGFA o VEGF) el cual juega un rol primordial en la angiogénesis ováricaFil: Abramovich, Dalhia Nurit. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Parborell, Maria Fernanda Agustina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Tesone, Marta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentin

The rodent corpus luteum

The corpus luteum is the tissue with most differences among species; rodents have particular features in corpus luteum formation, function and regression. The different types of mammalian corpora lutea can be classified in: Corpus luteum of pregnancy, cyclic corpus luteum, corpus luteum of lactation and corpus luteum of pseudopregnancy. Among mammals, only rodents present the four types of corpora lutea.Rodents are used as an excellent tool to study reproductive physiology. They have the advantages of their small size, the high reproductive rate and the benefit to obtain inbred strains. Transgenic technologies developed in mice are a helpful strategy to study gene function. Furthermore, knowing the similarities and differences among mammalian species is crucial to translate the findings described in rodents to other species. In the present chapter we review the regulation of luteinization, the multiple factors involved in this process, the structure and function of the CL including remodeling development, and the mechanisms implicated in the survival and regression of CL. In particular, the role of Wnt and Notch signaling pathways in corpus luteum function is described.Fil: Accialini, Paula Lucia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Hernandez, Silvia F.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Abramovich, Dalhia Nurit. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Tesone, Marta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentin

Angiopoietin 1 reduces rat follicular atresia mediated by apoptosis through the PI3K/Akt pathway

The aim of this study was to determine the effect of the local inhibition of ANGPT1 on steroid production, proliferation and apoptosis of ovarian follicular cells and on the PI3K/AKT pathway. We also examined the effect of ANGPTs on follicular cell apoptosis and proliferation in early antral follicles (EAFs) in culture. Follicular cells expressing PCNA decreased after ANGPT1 Ab treatment. Moreover, ANGPT1 inhibition increased the levels of active caspase 3 and androsterone, but decreased estradiol, AKT phosphorylation and the area of smooth muscle cell actin. In cultured EAFs from prepubertal rats treated with diethylstilbestrol (DES), ANGPT1 increased PCNA and decreased apoptosis while ANGPT2 reversed these effects. These results show that ANGPT1 alters steroidogenesis, reduces ovarian apoptosis, and stimulates cell proliferation in antral follicles. ANGPT1 may exert these roles by regulating ovarian vascular stability and/or by a direct effect on follicular cells, possibly involving the PI3K/AKT pathway.Fil: Parborell, Maria Fernanda Agustina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Abramovich, Dalhia Nurit. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Irusta, Griselda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Tesone, Marta. Universidad de Buenos Aires; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentin

Direct survival role of vascular endothelial growth factor (VEGF) on rat ovarian follicular cells

The aim of the present work was to analyze the direct effect of VEGF in follicular cell proliferation, apoptosis and activation of the PI3K/AKT and ERK/MEK signaling pathways in early antral follicles or granulosa cells. Antral follicles or granulosa cells were isolated from prepubertal female Sprague Dawley rats treated with DES.VEGF directly stimulates follicular cell proliferation and it also decreases apoptosis by inhibiting caspase 3 activation. In addition, VEGF increases the proliferation and inhibits the apoptosis of isolated granulosa cells in culture. VEGF activates the PI3K/AKT pathway evidenced by an increase in AKT phosphorylation levels and induces the phosphorylation of ERK1/2 in cultured antral follicles. These results demonstrate for the first time that VEGF has a proliferative and cytoprotective role in early antral follicles and in granulosa cells isolated from DES treated prepubertal rats and suggest that PI3K/AKT and ERK/MEK signaling pathways are involved in these processes.Fil: Irusta, Griselda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Abramovich, Dalhia Nurit. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; ArgentinaFil: Parborell, Maria Fernanda Agustina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Tesone, Marta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentin