Dinâmica populacional de Pseudomonas savastanoi pv. phaseolicola em feijoeiro, durante as fases epifítica e patogênica

The objective of this work was to monitor traits of the life cycle of Pseudomonas savastanoi pv. phaseolicola, in order to better understand the outbreak of bean halo blight, originating from a bacterial population in asymptomatic plants. Five experiments were conducted in the field, in greenhouses, and in humidity chambers. Changes in population size were evaluated in three field plantings, by introducing the bacteria in contamination focal points and observing the weather conditions favoring an outbreak. The dispersion of the bacteria in the field was followed by isolation and Bio‑PCR analysis. Two assays were conducted in greenhouses and humidity chambers to evaluate the effect of leaf age on disease expression and the relationship between population level and number of leaf spots. The bacteria multiply intensively when in contact with a compatible host and reach high population sizes, with or without symptoms. The most favorable factor for bacterial multiplication and symptom triggering was water, and its role in the changeover from the epiphytic to the pathogenic phase might be linked to rainfall volume and intensity. Bacterial asymptomatic dispersion in the field is greater than disease emergence. In Brazil, the bacteria should be categorized as a present quarantine pest.O objetivo deste trabalho foi monitorar características do ciclo de vida de Pseudomonas savastanoi pv. phaseolicola, para melhor compreender a manifestação do crestamento aureolado do feijoeiro, originada de uma população bacteriana em plantas assintomáticas. Cinco experimentos foram conduzidos em campo, casas de vegetação e câmaras de cultura. Alterações no tamanho da população foram avaliadas em três plantios no campo, por meio da introdução da bactéria em focos de contaminação e da observação das condições climáticas que favoreceram a manifestação da doença. A dispersão da bactéria no campo foi acompanhada por isolamento e análise Bio‑PCR. Dois ensaios foram conduzidos em casas de vegetação e câmaras de cultura, para avaliar o efeito da idade das folhas na expressão da doença e a relação entre o nível populacional e o número de manchas foliares. A bactéria multiplica-se intensamente logo que entra em contato com hospedeiro compatível e atinge níveis populacionais elevados, com a presença ou não de sintomas. O fator que mais favoreceu a multiplicação bacteriana e o surgimento dos sintomas foi a água, e seu papel na passagem da fase epifítica à patogênica pode estar associado ao volume e à intensidade das chuvas. A dispersão não sintomática da bactéria no campo é maior que o aparecimento da doença. No Brasil, a bactéria deve ser categorizada como praga quarentenária presente

Detection of Erwinia psidii through enrichment in guava leaf extract and double radial immunodiffusion

Uma das principais doenças que afetam a produção de goiaba no Brasil é a seca-dos-ponteiros, causada pela bactéria Erwinia psidii, cuja disseminação é favorecida por mudas contaminadas. O desenvolvimento de métodos diagnósticos mais eficazes poderia reduzir a disseminação da bactéria no país. Considerando a necessidade de se disponibilizar um método eficiente e simples para a detecção de E. psidii em material de propagação, foi objetivo desse trabalho produzir antissoros policlonais específicos contra a bactéria e desenvolver um método de detecção utilizando o enriquecimento da população bacteriana em extrato de folhas de goiabeira seguido de imunodifusão radial dupla. Um antissoro foi produzido contra a estirpe tipo da bactéria IBSBF 435 (ICMP 8426, NCPPB 3555), avaliado quanto à eficiência e especificidade e utilizado na determinação dos limiares de detecção da mesma. O antissoro As15-1 reagiu positivamente com todos as estirpes testadas de E. psidii, não reagindo com estirpes de outros gêneros e espécies de bactérias fitopatogênicas e apresentou reação cruzada com dois isolados não patogênicos da flora da goiabeira. O crescimento da população bacteriana no extrato de folhas foi observado após 12 h de incubação a partir de populações iniciais de 103, 105 e 107 ufc/mL, até 60 h. A partir de 12 h, já foi possível detectar E. psidii por enriquecimento e imunodifusão radial nas amostras com populações iniciais de 107 ufc/mL e a partir de 36 h, detectou-se a bactéria mesmo em amostras com populações iniciais de 103 ufc/mL. Considerando a possibilidade de falsos positivos, é recomendável associar outros métodos diagnósticos ao método aqui proposto.One of the most important diseases affecting guava production in Brazil is bacterial blight, caused by the bacterium Erwinia psidii. Pathogen dissemination often occurs through contaminated propagating plant material. The development of more effective diagnostic methods may reduce pathogen dissemination in the country. Considering the need for a reliable and simple method for detecting the pathogen in plant material, the objectives of this study were to produce E. psdii-specific polyclonal antibodies and to develop a detection method using bacterial population enrichment on guava leaf extracts followed by double radial immunodiffusion. The antiserum was produced against the E. psidii type strain IBSBF 435 (ICMP 8426, NCPPB 3555) and its efficiency, specificity and sensitivity threshold were determined. The antiserum As15-1 was tested with strains of several plant-pathogenic bacteria and reacted positively with all strains of E. psidii, although cross reactions were detected with two non-pathogenic isolates from guava flora. Bacterial multiplication on leaf extracts was observed 12 h after incubation from initial populations of 103, 105 and 107 ufc/mL, up to 60 h. After 12 h it was already possible to detect E. psidii in samples with starting populations of 107 cfu/mL. After 36 h, the enrichment technique allowed the detection of E. psidii using double radial immunodiffusion in samples with populations as low as 103 cfu/mL. Considering the possibility of false positives it is desirable to associate other diagnostic methods with the method proposed in this study

Detecção molecular de Erwinia psidii em goiabeira em condições de casa de vegetação e campo

Erwinia psidii é o agente causal da seca dos ponteiros da goiabeira ( Psidium guajava ), uma importante doença dessa cultura no Brasil. O patógeno afeta folhas, frutos, ramos e brotações, reduzindo significativamente a produtividade da cultura. A disseminação do patógeno ocorre por meio de material propagativo contaminado, porém assintomático. Os objetivos do trabalho foram avaliar o uso da BIO-PCR e da PCR convencional para detectar E. psidii em plantas inoculadas em casa de vegetação e em plantas sintomáticas e assintomáticas em pomares de goiabeira. A estirpe IBSBF 1576 de E. psidii foi inoculada (107UFC mL-1) em brotações novas de mudas de goiabeira e o tecido foi analisado nos tempos 0, 5, 10, e 15 dias após a inoculação. Sintomas foram observados após 5 dias e todas as plantas inoculadas foram positivas por PCR em todos os tempos avaliados, pelos dois métodos (BIO-PCR e PCR convencional). Sob condições de infecção natural em campo, três pomares foram avaliados por BIO-PCR. De cada pomar, foram coletadas 40 amostras, sendo 20 com e 20 sem sintomas. PCR foi positiva para 58 das 60 amostras sintomáticas (96,7%) e para 6,7% das amostras assintomáticas, demonstrando que o método pode ser usado para detectar o patógeno nos estágios iniciais da infecção. Este método poderá ser útil como uma ferramenta para a diagnose e para monitorar a sobrevivência e disseminação da bactéria e, consequentemente, novos focos da doença.Erwinia psidii causes bacterial blight of guava ( Psidium guajava ), an important disease of this crop in Brazil. The pathogen affects branches and twigs of guava trees, reducing yield significantly. Bacterial dissemination often occurs through contaminated but asymptomatic propagating plant material. The objectives of this research were to evaluate the use of BIO-PCR and conventional PCR to detect E. psidii in inoculated guava plants grown in a greenhouse and in symptomatic and asymptomatic trees from guava orchards. Erwinia psidii strain IBSBF 1576 was inoculated (107CFU mL-1) into young guava shoots and plant tissue was analysed at 0, 5, 10, and 15 days after inoculation. Symptoms were observed after 5 days and all inoculated shoots were PCR positive at all times, by both BIO-PCR and conventional PCR. Under natural infection conditions, 40 samples were tested by BIO-PCR from each of three guava orchards, 20 showing symptoms and 20 asymptomatic. PCR was positive for 58 out of 60 symptomatic samples (96.7%) and for 6.7% of asymptomatic samples, showing that the method can be used to detect the pathogen at early stages of infection. This PCR method may be used as a diagnostic tool to assess bacterial survival, dissemination and disease outbreaks

Interceptions of quarantine and absent non‑regulated pests in imported plant material

O objetivo deste trabalho foi avaliar as informações qualitativas e quantitativas sobre as interceptações de pragas ausentes não regulamentadas e quarentenárias em material vegetal importado. As informações sobre interceptações de pragas pelo serviço de quarentena vegetal da Embrapa, no período de 1977 a 2013, foram obtidas em um banco de dados, atas laboratoriais e listas de interceptação publicadas. As interceptações foram analisadas de acordo com regulamentação das pragas, espécie vegetal, parte vegetal importada e origem. O material foi categorizado em sementes botânicas e material de propagação vegetativa. No período do levantamento, foram interceptadas 75 espécies de pragas em 114 eventos de interceptação. Fungos, vírus e ácaros constituem a maior parte das interceptações, e a maioria delas ocorreu em lírio, oliveira, trigo, uva, arroz, batata e maçã. A taxa média anual de infestação/infecção do material vegetal analisado é de 2% dos processos de importação. O material para propagação vegetativa apresentou maior taxa de infestação/infecção por pragas do que as sementes botânicas. Das espécies‑pragas interceptadas, 63% não são regulamentadas como quarentenárias para o Brasil. Esses resultados indicam a necessidade premente de revisão da atual lista de pragas quarentenárias do País.The objective of this work was to evaluate qualitative and quantitative information on interceptions of quarantine and absent non‑regulated pests in imported plant material. Information concerning pest interceptions by Embrapa’s plant quarantine service during the period of 1977–2013 was obtained from a database, laboratory reports, and published lists of intercepted pests. Data interceptions were evaluated according to pest regulations, plant species, imported plant parts, and origin of importation. The plant material was categorized as botanical seeds and plant material for vegetative propagation. In the survey period, 75 pest species were intercepted in 114 interception events. Fungi, viruses, and mites were the most intercepted ones, and most interceptions occurred in lily, olive, wheat, grapes, rice, potato, and apple. The average annual rate of infestation/infection of the evaluated plant material was 2% of the import processes. The material for vegetative propagation had a higher rate of infestation/infection with pests than botanical seeds. Of the intercepted pests species, 63% are not regulated as quarantine pests for Brazil. These results indicate the urgent need to review the current list of quarantine pests in the country

Population dynamics of Pseudomonas savastanoi pv. phaseolicola in bean, throughout the epiphytic and pathogenic phases

The objective of this work was to monitor traits of the life cycle of Pseudomonas savastanoi pv. phaseolicola, in order to better understand the outbreak of bean halo blight, originating from a bacterial population in asymptomatic plants. Five experiments were conducted in the field, in greenhouses, and in humidity chambers. Changes in population size were evaluated in three field plantings, by introducing the bacteria in contamination focal points and observing the weather conditions favoring an outbreak. The dispersion of the bacteria in the field was followed by isolation and Bio-PCR analysis. Two assays were conducted in greenhouses and humidity chambers to evaluate the effect of leaf age on disease expression and the relationship between population level and number of leaf spots. The bacteria multiply intensively when in contact with a compatible host and reach high population sizes, with or without symptoms. The most favorable factor for bacterial multiplication and symptom triggering was water, and its role in the changeover from the epiphytic to the pathogenic phase might be linked to rainfall volume and intensity. Bacterial asymptomatic dispersion in the field is greater than disease emergence. In Brazil, the bacteria should be categorized as a present quarantine pest

Baixa diversidade genética entre estirpes patogênicas de Erwinia psidii no Brasil

ABSTRACTErwinia psidii causes bacterial disease of guava in Brazil. Phenotypic and molecular characterization through rep-PCR fingerprinting of 42 strains from different geographical regions showed that E. psidii populations in Brazil have a low level of genetic diversity and suggest that contaminated plant material is the main source for pathogen dissemination in the country. ______________________________________________________________________________ RESUMOErwinia psidii é o agente causal da seca-dos-ponteiros ou bacteriose da goiabeira no Brasil. A caracterização fenotípica e molecular através de rep-PCR de 42 estirpes patogênicas de diferentes regiões mostrou que as populações de E. psidii no Brasil têm um baixo nível de diversidade genética e sugere que material de propagação infectado é a principal fonte de disseminação do patógeno para novas áreas no país