RyR1-targeted drug discovery pipeline integrating FRET-based high-throughput screening and human myofiber dynamic Ca2+ assays.

Elevated cytoplasmic [Ca2+] is characteristic in severe skeletal and cardiac myopathies, diabetes, and neurodegeneration, and partly results from increased Ca2+ leak from sarcoplasmic reticulum stores via dysregulated ryanodine receptor (RyR) channels. Consequently, RyR is recognized as a high-value target for drug discovery to treat such pathologies. Using a FRET-based high-throughput screening assay that we previously reported, we identified small-molecule compounds that modulate the skeletal muscle channel isoform (RyR1) interaction with calmodulin and FK506 binding protein 12.6. Two such compounds, chloroxine and myricetin, increase FRET and inhibit [3H]ryanodine binding to RyR1 at nanomolar Ca2+. Both compounds also decrease RyR1 Ca2+ leak in human skinned skeletal muscle fibers. Furthermore, we identified compound concentrations that reduced leak by > 50% but only slightly affected Ca2+ release in excitation-contraction coupling, which is essential for normal muscle contraction. This report demonstrates a pipeline that effectively filters small-molecule RyR1 modulators towards clinical relevance

Corelaţia între Kt/V şi valoarea hemoglobinei la pacienţii cu insuficienţă renală cronică trataţi prin hemodializă

Summary A study of 33 patients with End Stage Chronic Renal Failure treated with haemodialysis in the Center of Haemodialysis and Renal Transantation has been performed. Monitoring the efficacy of dialysis in an individual patient and correlation between hemoglobin values and dialysis efficacy (Kt/V) were the aim of this study. Dialysis efficacy was adequate in 91% with Kt/V>1. We determined that hemoglobin level is in indirect correlation with the dialysis dose. Actualitatea. Scopul primordial al tratamentului prin hemodializă este de a prelungi viaţa bolnavilor cu insuficienţă renală cronică (IRC), a diminua mortalitatea şi numărul complicaţiilor. Pentru a evalua doza de dializă, se utilizează indicele Kt/V, unde K este clearance-ul ureei a dializorului, t - durata dializei şi V este volumul de distribuţie a ureei în organism. Anemia renală, datorată acţiunii inhibitorii a toxinelor uremice asupra eritropoezei, este complicaţia cea mai frecventă a IRC la pacienţii dializaţi în patogenie implicându-se şi acţiunea mecanică şi fizico-chimică asupra eritrocitelor, micşorarea vieţii eritrocitelor în condiţiile intoxicaţiei cronice cu aluminiu, a hipersplenismului, deficitului a.folic, dereglărilor osmotice şi electrolitice, etc. Obiectivele studiului. A determina eficacitatea hemodializei în Centrul de Hemodializă şi Transplant Renal, IMSP SCR pe un lot arbitrar de pacienţi. A examina relaţia între doza de dializă şi valoarea hemoglobinei (Hb). Material şi metodă. S-a studiat un lot de 33 pacienţi cu IRC ce urmează tratament prin hemodializă programată. Toţi pacienţii au fost supuşi unei dialize similare, la aparate de tip Fresenius 4008B, cu utilizarea soluţiei dializante bicarbonat şi dializoarelor Hemoflow cu membrana polisulfon (Fresenius), dintre care: F6 - 1 (3%), F60 - 3 (9%), F4HPS - 2 (6%), F5HPS - 3 (9%), F6HPS - 24 (72,7%). Au fost colectate 2 probe de sânge în condiţii standartizate: până şi după dializă. S-a calculat indicele eficacităţii dializei (Kt/V) cu ajutorul formulei Daugirdas, în funcţie de rata de reducere a ureei sangvine (U0, U t) Kt/V=-ln(U1/U0-0,008xtore)+(4- 3,5x U 1/U0)x(m0-m1)/m 1 (unde t-durata dializei, m0, m 1 - greutatea bolnavului până şi după dializă). S-a determinat valoarea Hb până la dializă. Rezultate şi discuţii. Dintre 33 pacienţi, la 18 (54,5%) persoane patologia primară ce a dus la dezvoltarea IRC a fost Glomerulonefrita Cronică difuză, în 11 (33,3%) cazuri - Pielonefrita Cronică, iar în 3 (9,1%) cazuri - Polichistoza Renală. Dintre ei: 22 bărbaţi (66,7%) şi 11 femei (33,3%). Durata aflării bolnavilor la tratament prin epurare extrarenală a fost de 0,5-11 ani (4,8±2,9 ani). Parametrii examinaţi: greutatea „uscată” 46 - 138,5 kg (70,4±16,9 kg), înălţimea 186-145 cm (170,3±9,0 cm), durata şedinţei de dializă - 180¬ 240 minute (232,85±10,51), volumul ultrafiltratului 1700 - 5500 ml (3787,5±1030,9 ml). Toţi pacienţii urmează tratament de suplimentare cu preparate de fier şi vit. B12. Nici un pacient nu administreză eritropoetină. întreg lotul studiat a fost divizat în 2 grupuri, în fucţie de frecvenţa efectuării hemodializei: 2 şedinţe sau 3 şedinţe pe săptămână, cu o distribuţie numerică uniformă a pacienţilor conform sexului, vârstei şi duratei aflării la tratament. Parametrii examinaţi în fiecare grup: ureea până la dializă şi după: grupul I - 23,4 şi 7,6 mmol/l, şi, respectiv 21,9 şi 7,4 mmol/l în al II-lea grup; Kt/v grupul I - 1,06 - 1,79 (1,38±0,23), grupul II -0,9-1,79 (1,30±0,25). Kt/ V-ul săptămânal va fi net superior la persoanele ce urmează hemadializa de 3 ori/săptămână. în acelaşi grup se observă o predominare a Hb: în grupul I 56-111 (79,82±14,5) g/l, în grupul II - 63-127 (88,44±14,6)g/l. Valoarea Hb este într-o dependenţă indirectă faţă de doza de dializă (pI=0,26, pII=0,03).’ Concluzii 1. Kt/V-ul reprezintă indicele eficacităţii hemodializei ce permite a caracteriza eficacitatea tehnică a epurării extrarenale la un pacient concret. Eficacitatea dializei la pacienţii studiaţi a fost satisfăcătoare şi adecvată în 91% (30 cazuri), cu un Kt/ V>1,0. 2. Valoarea Hb este mai înaltă în grupul pacienţilor ce urmează hemodializă de 3 ori pe săptămână, decât la cei din grupul I (88,44 faţă de 79,82 g/l). Valoarea Hb este într-o corelaţie indirectă faţă de doza de dializă

Assessment of Antifungal Activity of Lactic Acid Bacteria Strains Against Bread Spoilage Fungus Aspergillus ochraceus

Lactic acid bacteria (LAB) are generally recognized as safe and can be used against fungi that contaminate various food commodities. The aim of the research was to select LAB strains with high antifungal activity for the biocontrol of Aspergillus ochraceus. The antifungal activity of eight strains of lactic acid bacteria has been evaluated by overlay assay method against the spoilage fungus, Aspergillus ochraceus isolated from white bread. The antifungal effect was assessed by co-cultivation of lactic acid bacteria strains and Aspergillus ochraceus in liquid media and mycelium growth inhibition was monitored for over 14 days. The LAB strains Lpl, LAB 43 and LAB 13 presented intense antifungal activity with large inhibition zones of fungal growth and sporulation, but smaller for Lpa and LAB 15 strains. Total inhibition of mycelia growth was induced by the strains LAB 43, LAB 13 and Lpa. The strains LAB 15 and LAB 35 had a moderate inhibition activity on the mycelia growth. The results of this study demonstrated the antifungal activity of several LAB strains by overlay assay and by co-cultivation method. Therefore, it was confirmed the inhibitory effect of the strains LAB 43 and LAB 13 against Aspergillus ochraceus. The experiment revealed that these LAB strains could be further used as biocontrol agents

Comparative Antifungal Effect of Lactic Acid Bacteria Strains on Penicillium digitatum

Lactic acid bacteria (LAB) are natural alternative to chemical preservatives for fruits. The aim of the research was to select LAB strains with high antifungal activity against Penicillium digitatum for the biopreservation of fruits. The antifungal activity of eight lactic acid bacteria strains has been evaluated against Penicilliuum digitatum isolated from orange, by overlay assay method and by optical microscope examination. The reversion of inhibition zone after 96 h was recorded as a fungistatic effect while those with inhibition zone for at least 7 days were recorded as fungicidal. The antifungal effect of efficient LAB strains was assessed by comparing inhibition of fungal biofilm formation in liquid media. The strains Lpl, Lpa, LAB 13, LAB 15, LAB 43 and LAB 58 presented intense antifungal activity with clear inhibition zones diameter over 20 mm. The microscopy evidenced atypical hyphae and delaying of conidial chain formation. The strains Lpa, LAB 13, LAB 15 fully inhibited the mycelia growth, strains LAB 43 and LAB 58 partly with delaying of biofilm formation on the surface of culture medium. The results of comparative antifungal activity of LAB strains evidenced the highest inhibition of fungal biofilm formation and structural damages of hyphae and spores caused by the strains Lpa, LAB 13 and LAB 15. These strains could be efficient biocontrol agents of Penicillium digitatum in fruits