Validação da espectroscopia de ressonância magnética nuclear (RMN) na determinação do teor de óleo em sementes de mamona.

bitstream/item/31248/1/comunicado-153.pd

Caracterização molecular citoplasmática em cebola nas cultivares Bola Precoce e Crioula.

O uso da biotecnologia na agricultura vem crescendo nos últimos anos e tem sido importante como auxílio a programas de melhoramento genético de plantas. Uma das diversas aplicações de marcadores moleculares em cebola é a caracterização citoplasmática. A identificação de citoplasmas estéril e normal auxilia no desenvolvimento de cultivares híbridas, pela significativa redução do número de pareamentos individuais com plantas estéreis testers, para identificação de genótipos mantenedores e/ou acelerando o processo de incorporação de macho-estéreis em linhagens elite. Este estudo objetivou a caracterização molecular de citoplasmas das cultivares de cebola Bola Precoce (100 plantas) e Crioula (93 plantas), através de análise de genoma de mitocondria pela técnica da reação da polimerase em cadeia. As cultivares Bola Precoce e Crioula apresentaram 51,0 e 43,0% das plantas com citoplasma normal, respectivamente. Nas plantas com citoplasma estéril, o tipo predominante foi o T, e somente foi possível identificar citoplasma estéril S em quatro plantas da cultivar Crioula.Suplemento. Edição dos Resumos expandidos do 46. Congresso Brasileiro de Olericultura, Goiânia, ago. 2006

Otimização de protocolo para análise de AFLP em Lolium multiflorum Lam.

ESTABELECIMENTO DE METODOLOGIA PARA ANÁLISE MOLECULAR DE AZEVÉM ANUAL COM MARCADORES AFLP. O uso de marcadores moleculares no manejo de bancos de germoplasma tem sido cada vez mais expressivo. Entre os diferentes tipos de marcadores moleculares, o AFLP, Amplified Fragment Length Polymorphism, apresenta algumas vantagens para uso na caracterização de recursos genéticos, como a detecção de grande número de bandas informativas por reação, com ampla cobertura do genoma e considerável reprodutibilidade, além de não necessitar de dados de seqüenciamento prévio da espécie para a construção de primers. Embora a análise de AFLP seja freqüentemente utilizada em estudos de variabilidade genética em diferentes espécies, o uso da técnica em Lolium multiflorum ainda é incipiente. Com a finalidade de estabelecer um protocolo para o emprego da técnica de AFLP em azevém anual foi conduzido este trabalho. Foram avaliadas as concentrações iniciais de DNA genômico de 100 e 250 ng, a digestão do DNA com 1,25 e 1U das enzimas EcoRI e MSe, e os respectivos tempos de reação de digestão: 3, 6 e 12 horas. Também foram avaliadas quatro concentrações da solução resultante da ligação dos adaptadores: solução sem diluição; diluída 1:5; 1:10 e 1:20 e duas diluições após a reação de pré-amplificação, de 1:25 e 1:50. Como resultado, foi estabelecido como melhor protocolo, no qual foi obtido um maior número e qualidade de fragmentos, o que utiliza a concentração inicial de DNA genômico de 100 ng, num volume final de reação de digestão 10 ?l, com 1U de cada enzima EcoRI e MseI e tempo de reação de 12h a 37°C, com reação de ligação de adaptadores realizada com a adição da solução de ligação de adaptadores, do Kit AFLP? Analysis System I (InvitroGen Life Technologies, Carlsbad, Calif., USA), e 0,4 U de T4 DNA ligase em um volume final de 10?l, por 2h a 20°C. Após a ligação de adaptadores a diluição deverá ser de 1:5. A reação de pré-amplificação deverá ocorrer a partir de 1?l desta última solução (diluída 1:5), 1,0 X PCR buffer com Mg Plus [Tris-HCl (pH 7.6) 20 mM, MgCl2 1,5 mM, KCl 50 mM], BSA 0,003% e 1 U de Taq DNA polimerase, completando com mix de pré-amplificação do Kit AFLP? Analysis System I até alcançar o volume final de 11?l. O produto da pré-amplificação deverá ser diluído 1:25 antes de ser procedida à amplificação seletiva, a qual deve ser realizada utilizando 2,5 ?l da solução de DNA pré-amplificado (diluído 1:25), 1 X PCR buffer com Mg Plus [Tris-HCl (pH 8,4) 20 mM, MgCl2 1,5 mM, KCl 50 mM], BSA (0,003%), 1 U de Taq DNA polimerase, 10 ng de primer EcoRI, 1,5 ng de primer MseI, 0,4mM de DNTps e H2O MilliQ? até completar o volume final de 10?l. Com este protocolo uma única combinação de primers permitiu identificar 58 bandas polimórficas na análise de duas populações de azevém anual.bitstream/CNPGL/15618/1/comunicado_179.pd

Identificação de linhas macho-estéreis e mantenedoras da macho-esterilidade na cultivar de cebola BRS Alfa São Francisco.

O objetivo final do trabalho é o desenvolvimento de híbridos adaptados às condições tropicais do Nordeste brasileiro, que apresentem tolerância às altas temperaturas e à principal doença da cebola na região, o mal-de-sete-voltas (Colletotrichum gloesporioides).Suplemento. Edição dos resumos expandidos do 45. Congresso Brasileiro de Olericultura; 15. Congresso Brasileiro de Floricultura e Plantas Ornamentais; 2. Congresso Brasileiro de Cultura de Tecidos de Plantas, Fortaleza, ago. 2005. 1 CD-ROM

A cultura da mamona na região de clima temperado: informações preliminares.

bitstream/item/33561/1/documento-149.pd

Fundamentos teóricos-práticos e protocolos de extração e de amplificação de DNA por meio da técnica de reação em cadeia de polimerase.

Caracterização molecular dos ácidos nucléicos; Obtenção de amostras para extração de dna; Cuidados durante e após a extração de dna; Material necessário para extração de dna; Extração de dna de amostras de tecidos de mamíferos; Material; Digestão da amostra; Extração do dna com fenol; Purificação do dna por meio de precipitação com etanol; Protocolos empregados na rotina de extração de dna de amostras de sangue; Extração de dna de amostras de sangue com a utilização de colunas de extração; Protocolo de extração de dna de sangue mediante precipitação com sal; Extração de dna de amostras congeladas de sangue; Protocolos empregados na extração de dna de amostras de artrópodes com utilização de colunas de purificação; Protocolo para extração de dna de amostras de carrapatos com colunas de purificação 11; Protocolo de extração de dna de ovos de carrapatos com a utilização de colunas de purificação; Extração de dna de amostras de sêmen; Extração de dna de plantas; Leitura da concentração de dna nas amostras Introdução à tecnica de pcr; Escolha dos primers ou iniciadores; Pcr "multiplex" ; Nested-pcr; Pcr quantitativa; Eletroforese de ácidos nucléicos; Eletroforese em gel de agarose; Variáveis que afetam a migração do dna através do gel de agarose; Protocolo para análise de produtos de amplificação e fragmentos de digestão em gel de agarose; Eletroforese em sistema capilar; Protocolo para análise de produtos de amplificação em sistema capilar; Protocolos de amplificação de dna parasitário; Pcr para babesia bigemina; Nested-pcr para babesia bigemina; Eletroforese em gel de agarose para visualização dos produtos amplificados

Eosinophil and T Cell Markers Predict Functional Decline in COPD Patients

BACKGROUND. The major marker utilized to monitor COPD patients is forced expiratory volume in one second (FEV1). However, asingle measurement of FEV1 cannot reliably predict subsequent decline. Recent studies indicate that T lymphocytes and eosinophils are important determinants of disease stability in COPD. We therefore measured cytokine levels in the lung lavage fluid and plasma of COPD patients in order to determine if the levels of T cell or eosinophil related cytokines were predictive of the future course of the disease. METHODS. Baseline lung lavage and plasma samples were collected from COPD subjects with moderately severe airway obstruction and emphysematous changes on chest CT. The study participants were former smokers who had not had a disease exacerbation within the past six months or used steroids within the past two months. Those subjects who demonstrated stable disease over the following six months (ΔFEV1 % predicted = 4.7 ± 7.2; N = 34) were retrospectively compared with study participants who experienced a rapid decline in lung function (ΔFEV1 % predicted = -16.0 ± 6.0; N = 16) during the same time period and with normal controls (N = 11). Plasma and lung lavage cytokines were measured from clinical samples using the Luminex multiplex kit which enabled the simultaneous measurement of several T cell and eosinophil related cytokines. RESULTS AND DISCUSSION. Stable COPD participants had significantly higher plasma IL-2 levels compared to participants with rapidly progressive COPD (p = 0.04). In contrast, plasma eotaxin-1 levels were significantly lower in stable COPD subjects compared to normal controls (p < 0.03). In addition, lung lavage eotaxin-1 levels were significantly higher in rapidly progressive COPD participants compared to both normal controls (p < 0.02) and stable COPD participants (p < 0.05). CONCLUSION. These findings indicate that IL-2 and eotaxin-1 levels may be important markers of disease stability in advanced emphysema patients. Prospective studies will need to confirm whether measuring IL-2 or eotaxin-1 can identify patients at risk for rapid disease progression.National Heart, Lung, and Blood Institute (NO1-HR-96140, NO1-HR-96141-001, NO1-HR-96144, NO1-HR-96143; NO1-HR-96145; NO1-HR-96142, R01HL086936-03); The Flight Attendant Medical Research Institute; the Jo-Ann F. LeBuhn Center for Chest Diseas

Withdrawal of inhaled corticosteroids in people with COPD in primary care: a randomised controlled trial

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