Lapatinib에 대한 획득 내성을 지닌 HER2 양성 유방암 세포주에서 CDK4/6 억제제인 palbociclib의 항종양효과 및 작용 기전에 관한 연구

학위논문(석사)--서울대학교 대학원 :의과대학 협동과정 종양생물학전공,2019. 8. 임석아.Background: Lapatinib is a dual tyrosine kinase inhibitor which interrupts the HER2/neu and epidermal growth factor receptor (EGFR) family pathways in solid tumors. It is used for the treatment of patients with advanced or metastatic breast cancer whose tumors overexpress HER2. Majority of patients who initially respond to the treatment will eventually progress due to acquired resistance. The defect in cell cycle regulation via increased levels of cyclin D-CDK4/6 complexes is a well-known mechanism of the acquired resistance to lapatinib. Thus, CDK4/6 inhibition can be considered as an attractive strategy to overcome lapatinib resistance. In this study, antitumor effect of palbociclib, a CDK4/6 inhibitor was investigated whether it can be used as a new strategy to treat lapatinib resistant cells by modulating cell cycle regulation. Methods: Acquired lapatinib resistant SK-BR-3 cells are established by treating lapatinib consistently for 7 months. The characteristics of lapatinib resistance (LR) cell lines were evaluated by MTT, FACS, Western blotting, qPCR, methylation assay and transcriptome analysis. The antitumor effects of palbociclib in SK-BR-3 LR cell lines were evaluated through changes in proliferative ability using MTT and colony forming assay. Mechanism of action was analyzed by BrdU assay, β-galactosidase assay, Western blotting assay for signal transduction molecules and IFA. Results: In SK-BR-3 LR cells, the change of the molecules that were related to the G1/S transition of cell cycle was prominent. It was confirmed that cell cycle progression and proliferation were significantly faster in SK-BR-3 LR cells compared to parental cells. Overexpression of cyclin D1 and CDK6 was shown in SK-BR-3 LR cells but cyclin-dependent kinase inhibitor, p16 and p14 were suppressed. Cyclin D1 and CDK6 were upregulated at the transcription level, and the epigenetic suppression of CDKN2A was observed. Palbociclib inhibited the cell cycle progression and reduced the cell viability significantly in SK-BR-3 LR cells by cell cycle arrest via blocking hyper-phosphorylation of Rb. Palbociclib also induced autophagic cell death in SK-BR-3 LR cells but not in SK-BR-3 parental cells. Furthermore, palbociclib showed antitumor activity against HER2 targeted therapy resistant patient derived xenograft (PDX) with CDKN2A defect and cyclin D1 upregulation. Conclusion: The changes of cell cycle molecules that were related to G1/S transition was observed in SK-BR-3 LR cells. Deficiency in CDKN2A and upregulation of cyclin D1 led to the increased cell cycle progression and proliferation in SK-BR-3 LR cells. CDK4/6 inhibitor palbociclib showed antitumor effect in SK-BR-3 LR cells through modulating cell cycle in vitro and in HER2-directed therapy resistant PDX model. These results suggest that inhibition of cyclin D1 by palbociclib could be an effective strategy for treating lapatinib resistance.Lapatinib은 HER2와 epidermal growth factor receptor (EGFR)을 차단하는 이중 tyrosine kinase 억제제로써 HER2 양성 전이성 유방암에서 효과적으로 작용하나 치료 중 내성이 나타난다. Cyclin D-CDK4/6 복합체의 과도한 활성으로 인한 무분별한 세포주기 활성은 lapatinib에 대한 획득 내성 기전으로 알려져 있다. 따라서 lapatinib 내성을 극복하기 위한 전략으로 cyclin D-CDK4/6 경로를 활용할 수 있을 것으로 판단하였다. 본 연구에서는 CDK4/6 억제제인 palbociclib이 세포주기를 조절하여 lapatinib 내성 세포에서 항종양효과를 나타내는지 확인하고, 그 기전을 연구하여 lapatinib 내성 HER2 양성 유방암의 새로운 치료 전략으로 사용될 수 있는지 연구하였다. HER2 양성 유방암 세포주 SK-BR-3에 lapatinib의 농도를 증가시키면서 장기간 처리하여 내성이 생긴 세포주를 수립하고 transcriptome data, FACS, Western blotting, qPCR, methylation assay 등을 통해 lapatinib 내성 세포주의 특성을 확인하였다. MTT, BrdU assay와 콜로니 형성 분석의 변화를 통해 palbociclib의 세포 증식억제 효과를 관찰하였고, 세포 주기에 관여하는 분자와 신호 전달경로에 관여하는 분자들의 발현 변화 및 β-galactosidase assay와 IFA를 통해 기전을 연구하였다. Lapatinib 내성 세포에서는 세포주기의 G1/S 이행과 관련된 분자들의 변화가 두드러지게 나타났으며 SK-BR-3 부모 세포와 비교하여 세포주기의 진행과 증식 속도가 증가되어 있었다. 이와 관련하여 lapatinib에 대한 내성 기전 중 하나인 cyclin D-CDK4/6 복합체의 활성이 증가하고 이들을 억제하는 CKI인 CDKN2A가 메틸화로 인해 억제되어 있었다. Cyclin D1과 CDK6 발현은 전사수준에서 증가 되었고 CDKN2A는 후성 유전 억제나 이 결과를 통해 CDKN2A의 억제로 인해 cyclin D1의 활성화가 유발되었다고 판단하였다. Palbociclib은 Rb의 인산화를 억제하여 lapatinib 내성 HER2 양성 유방암 세포주에서 세포주기 진행을 억제하고 세포 생존 능력을 현저하게 감소시킨다는 것을 확인하였으며 palbociclib이 lapatinib 내성 세포에서 자가소화작용을 유발하여 세포성장 억제 효과를 나타낸다는 것을 확인하였다. HER2 표적 치료제에 내성이 생겨 CDKN2A의 억제와 cyclin D1의 증가가 일어난 HER2 양성 유방암 환자로부터 얻은 환자유래 종양 동물 모델에서도 palbociclib이 효과적으로 종양의 성장을 억제함을 확인하였다. 따라서 palbociclib에 의한 세포 주기 경로의 억제는 lapatinib 내성 HER2 양성 유방암 치료에 효과적인 전략이 될 수 있으며 본 연구 결과를 통해 palbociclib이 호르몬 수용체 양성 유방암뿐만 아니라 다른 아형에서도 적용이 가능하다는 것을 보여주었고 환자유래 종양 동물 모델에서 검증하여 빠른 임상 적용을 할 수 있을 것이라 기대할 수 있다.ABSTRACT TABLE OF CONTENTS LIST OF TABLES LIST OF FIGURES INTRODUCTION ------------------------------------------1 MATERIALS AND METHODS ------------------------------4 RESULTS -----------------------------------------------19 DISCUSSION --------------------------------------------62 REFERENCES -------------------------------------------66 ABSTRACT IN KOREAN ----------------------------------70 ACKNOWLEDGEMENT -----------------------------------73Maste

microRNA-944 overexpression is a biomarker for poor prognosis of advanced cervical cancer

BACKGROUND: One-third of cervical cancer patients are still diagnosed at advanced stages. The five-year survival rate is decreased in about 50% of advanced stage cervical cancer patients worldwide, and the clinical outcomes are remarkably varied and difficult to predict. One of the miRNAs known to be associated with cancer tumorigenesis is miR-944. However, the prognostic value of miR-944 in cervical cancer has not been fully investigated. The aim of this study was to analyze clinical significance and prognostic value of miR-944 in cervical cancer. METHODS: The expression levels of miR-944 were detected using quantitative reverse transcription polymerase chain reaction in five types of cervical cancer cell lines and 116 formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) cervical tissues. The association between the expression levels of miR-944 and prognostic value was analyzed using the Kaplan-Meier analysis and Cox proportional hazards model. RESULTS: The expression levels of miR-944 in cervical cancer tissues were significantly higher compared with those in normal tissues (P < 0.0001). Moreover, the expression levels of miR-944 in cervical cancer cell lines and FFPE tissues with human papillomavirus (HPV) infection were significantly higher compared to those without HPV infection (P < 0.01 and P = 0.02). High miR-944 expression was also markedly associated with bulky tumor size (P = 0.026), advanced International Federation of Gynecology and Obstetrics (FIGO) stage (P = 0.042), and lymph node metastasis (P = 0.030). In particular, high miR-944 expression group showed shorter overall survival than the low miR-944 expression group in the advanced FIGO stage (84.4% vs. 44.4%, HR = 4.0, and P = 0.01). CONCLUSIONS: These results suggest that miR-944 may be used as a novel biomarker for improving prognosis and as a potential therapeutic target.ope

ΔNp63 to TAp63 expression ratio as a potential molecular marker for cervical cancer prognosis

p63 is a transcription factor p53 family. Two major isoforms of p63, TAp63 with transactivation (TA) domain and ΔNp63 with truncated TA domain, have been reported to play opposing roles either in tumor suppression or oncogenic function. Little is known about the association of these two isoforms of p63 in the carcinogenesis of cervical cancer. In this study, the mRNA expression levels of TAp63 and ΔNp63 in 40 normal, 30 low-grade squamous intraepithelial lesions (LSIL), 38 high-grade squamous intraepithelial lesions (HSIL), and 52 cervical cancer formalin-fixed paraffin-embedded tissues were examined using quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (RT-qPCR). We analyzed the association between the ΔNp63 and ΔN/TAp63 mRNA expression ratio and clinicopathological parameters and compared disease-specific survival of each ΔNp63 mRNA expression and ΔN/TAp63 mRNA expression ratio. The ΔN/TAp63 mRNA expression ratio in cervical cancer showed higher sensitivity than the mRNA expression levels of ΔNp63 (52.0% vs 44.2%). The level of ΔN/TAp63 mRNA expression ratio in precancerous LSIL and HSIL was higher than in normal tissues (P = 0.01 and P = 0.003) and lower than in cervical cancer tissues (P = 0.03 and P = 0.02). Besides, the positive ΔN/TAp63 mRNA expression ratio was associated with bulky tumor size and high expression of Ki-67, the proliferation marker, in cervical cancer (P = 0.04 and P = 0.02). The cervical cancer patients with the positive ΔN/TAp63 mRNA expression ratio showed worse survival compared to those who with the negative expression ratio of ΔN/TAp63 (HR = 5.7, 95% CI: 1.6-19.9). In conclusion, the balance of TAp63 and ΔNp63 is closely related to the carcinogenesis of cervical cancer. The ΔN/TAp63 mRNA expression ratio could be useful as a diagnostic and prognostic marker of cervical cancer.ope

Estimating Genetic Influences and Identifying the Genetic Susceptibility Loci For Uterine Cervix HPV infection Status In Korean Women

학위논문 (석사)-- 서울대학교 보건대학원 : 보건학과, 2015. 2. 성주헌.Background: Cervical cancer is the most common cancer in women in some Africa and Asia and the third most common cancer in women worldwide. Human papillomavirus (HPV) infection is the leading cause of cervical lesions and cancers and has a crucial role in the progression of cervical cancers. The burden of HPV infection itself is very substantial in women worldwide. It was reported that approximately 610,000 new patients came out every year worldwide in 2012 and the prevalence of HPV infection was 10.4% in 863 sexually active females aged ranging 20–74 years old in Korea. HPV infection could be heritable because the patterns of progression of HPV infection are different depending on host genetic susceptibility and environmental factors. Most infections are cured, but 10–20% of women have persistent infections and they could become cervical intraepithelial neoplasm (CINs). 30–40% of CINs are progressed to invasive cancer of the cervix (ICC). Objective: The aims of this study were to estimate genetic influences and to identify the genetic susceptibility loci with the latest and optimal method to analyze dichotomous trait based on the fact that there is a significant genetic influence on HPV infection status for uterine cervix HPV infection status in Korean Women. Methods: The 910 study participants aged 25-79 were recruited from the females in the Healthy Twin Study. Prevalence of HPV infected host and odds ratios of HPV infection status by potential risk factors were estimated with a univariate logistic regression analysis. To estimate genetic influences, Intraclass correlation (ICC) and SOLAR were used and to identify the genetic susceptibility loci, GWAF was used, which is the latest and appropriate method to analyze dichotomous trait. Results: Among epidemiological factors, only oral contraceptive use was significantly associated with HPV infection status. The ICC coefficient of monozygotic (MZ) twin pairs were higher than mother and daughter pairs and dizygotic (DZ) twin and sibling pairs. Genetic influences also exist moderately (h2=0.34) in AE model of HPV infection status. In addition, Genetic susceptibility loci of HPV infection status were rs13386094, rs13393102, rs10187756, rs13006868, rs28479291, rs12694475, and rs10165222 in additive model and rs7595290 in general model. They were significantly associated with the phenotype with p-value, 5.4E-7 and 8.0E-8 respectively.After analysis, several visualization methods were used to explain the results. Discussion: Genetic influences of HPV infection status are not that high but significantly heritable. Among the genes from the results in additive model, BROX, CNTN5, GRM8, HMCN1, NEB, PDE4B, PRKAG2, PTPRJ, RHEB, STRC, VNN1,ZBTB7C, ZC3H15, ZNF680, DPP6, RAD51B, and WWOX were statistically associated with diseases such as endometrial cancer and uterine tumor and function of binding of ovarian cancer cell lines (Table 5). In addition, ADAM12, CNTN4, DPP6, GRM8, LRP1B, OBSCN, PDE4D, PLEKHH2, PRKAG2, PTPRJ, RHEB,STRC, STXBP6, VNN1, ZBTB7C, ZC3H15, ZNF680, PDE4D, WWOX, LEPR, and DTD1 were significantly related with the diseases such as endometrial cancer, uterine tumor and the functions in G1/S phase transition of cervical cancer cell lines, early or advanced stage endometriosis, and apoptosis of endometrial cancer cell linesContents Abstract ..................................................................................i List of Table .......................................................................... v List of Figure ........................................................................ vi I. Introduction ................................................................1 1. HPV is the key Risk factor of cervical cancer ...........................1 2. HPV infection has genetic influence ........................................1 3. Risk factor of HPV ..................................................................3 4. Purpose .................................................................................3 II. Method .......................................................................5 1. Study population recruitment ...............................................5 2. Genotyping ..........................................................................5 3. Statistical analysis ................................................................7 4. Heritability analysis ..............................................................7 5. GWAS analysis ......................................................................9 6. Visualizations .....................................................................10 III. Result ........................................................................12 7. Statistical result ..................................................................12 8. Heritability analysis ............................................................14 9. GWAS result .......................................................................16 10. Visualizations ....................................................................22 IV. Discussion .................................................................27 V. Reference ..................................................................35 VI. 국문초록 ....................................................................40Maste

Radiation Dose Reduction without Compromise to Image Quality by Alterations of Filtration and Focal Spot Size in Cerebral Angiography

OBJECTIVE: Different angiographic protocols may influence the radiation dose and image quality. In this study, we aimed to investigate the effects of filtration and focal spot size on radiation dose and image quality for diagnostic cerebral angiography using an in-vitro model and in-vivo patient groups. MATERIALS AND METHODS: Radiation dose and image quality were analyzed by varying the filtration and focal spot size on digital subtraction angiography exposure protocols (1, inherent filtration + large focus; 2, inherent + small; 3, copper + large; 4, copper + small). For the in-vitro analysis, a phantom was used for comparison of radiation dose. For the in-vivo analysis, bilateral paired injections, and patient cohort groups were compared for radiation dose and image quality. Image quality analysis was performed in terms of contrast, sharpness, noise, and overall quality. RESULTS: In the in-vitro analysis, the mean air kerma (AK) and dose area product (DAP)/frame were significantly lower with added copper filtration (protocols 3 and 4). In the in-vivo bilateral paired injections, AK and DAP/frame were significantly lower with filtration, without significant difference in image quality. The patient cohort groups with added filtration (protocols 3 and 4) showed significant reduction of total AK and DAP/patient without compromise to the image quality. Variations in focal spot size showed no significant differences in radiation dose and image quality. CONCLUSION: Addition of filtration for angiographic exposure studies can result in significant total radiation dose reduction without loss of image quality. Focal spot size does not influence radiation dose and image quality. The routine angiographic protocol should be judiciously investigated and implemented.ope

The ON-Q pain management system in elective gynecology oncologic surgery: Management of postoperative surgical site pain compared to intravenous patient-controlled analgesia

OBJECTIVE: The goal of this study was to compare postoperative surgical site pain in gynecologic cancer patients who underwent elective extended lower midline laparotomy and managed their pain with either the ON-Q pain management system (surgical incision site pain relief system, ON-Q pump) or an intravenous patient-controlled analgesia pump (IV PCA). METHODS: Twenty gynecologic cancer patients who underwent elective extended lower midline laparotomy were divided into two groups. One group received a 72-hour continuous wound perfusion of the local anesthetic ropivacaine (0.5%, study group) into the supraperitoneal layer of the abdominal incision through the ON-Q pump. The other group received intravenous infusion pump of patient-controlled analgesia (fentanyl citrate 20 mg/mL · kg+ondansetron hydrochloride 16 mg/8 mL+normal saline). Postoperative pain was assessed immediately and at 6, 24, 48, 72, and 96 hours after surgery using the visual analogue scale. RESULTS: Postoperative surgical site pain scores at 24, 48, and 72 hours after surgery were lower in the ON-Q group than the IV PCA group. Pain scores at 24 hours and 48 hours after surgery were significantly different between the two groups (P=0.023, P<0.001). Overall painkiller administration was higher in the ON-Q group but this difference was not statistically significant (5.1 vs. 4.3, P=0.481). CONCLUSION: This study revealed that the ON-Q pain management system is a more effective approach than IV PCA for acute postoperative surgical site pain relief after extended lower midline laparotomy in gynecologic cancer patients.ope

A Study on the Background Music for the TV Home Shopping Programs Depending on Types of the Commodities

TV home shopping induces the audience through the broadcasting media or TV by taking advantage of its popularity, convenience and sensuous stimulus. In order to stimulate the senses, especially the visual and auditory senses, the TV home shopping programs use video images and background music, linking consumers with the commodities being broadcast. In particular, the background music is used for effective association to enhance the images of commodities as well as consumers&amp;apos; intention of purchase. The purpose of this study was to survey the background music pieces used for the TV home shopping commodities and analyze their characteristics to find some implications for professional selection of the background music pieces. For this purpose, the following analytical methods and criteria were used. The commodities put on 5 domestic TV home shopping channels for sale were divided into 10 categories, and the sample commodities were chosen for each category. Then, the background music pieces for a total of 415 programs broadcast from January through August, 2008 for the sample commodities were analyzed for their genres, and thereupon, the correlations between commodity categories and their background music pieces were tested. As a result, it was found that the music pieces had differed depending on commodity categories, while the characteristics of the music pieces were closely correlated with the commodities. The background music pieces had acted as the musical elements expressing the images inherent in commodities, contents of the program broadcast and appealing to the major customers by age. Specifically, genres, tempo and sound effects of the music were correlated with the video images of the programs introducing the commodities. In particular, characteristics of commodity categories and genres of music interacted with each other to enhance expressions of the commodity images. However, it was not possible to determine an absolute law to have commodity categories match genres of music, because the genres of pop music used for the TV home shopping were too diversified, while the criteria for them differed among researchers, not allowing for a clear and systematic categorization of genres of music. So far, no research has analyzed the background music pieces for the TV home shopping by commodity category. Hence, it is hoped that this first attempt to analyze the background music for the TV home shopping will be followed up by future academic efforts, and it is also hoped that this study will provide for a guideline for future studies which will analyze the background music for the TV home shopping more extensively.;TV 홈쇼핑은 TV라는 방송매체를 통해 대중성, 사용의 편리성, 감성의 자극성 등을 이용하여 시청자를 화면 앞으로 유도한다. 이 중 감성을 자극하는 요소인 시각과 청각, 즉 상품의 영상과 배경음악을 이용하여 소비자와 방송 상품을 연결한다. 특히 배경음악은 판매하는 상품의 효과적인 연상 작용을 위해 사용되며 상품 이미지를 증대시키어 소비자의 구매 의도를 높이는 역할을 하고 있다. 본 논문은 TV 홈쇼핑에서 방송된 프로그램의 배경음악을 통해 상품에 따라 어떤 음악이 사용되는지 살펴보고 상품 유형에 따른 음악의 특징들을 분석하여 전문적인 음악 선곡을 위한 함의를 도출하고자 한다. 상품에 따른 음악 장르의 사용에 대한 본 연구의 분석 방법과 기준은 다음과 같다. 현재 국내 5개 TV 홈쇼핑사에서 판매되고 있는 상품들을 10개의 카테고리로 분류하여 각각의 표본상품을 지정하였다. 2008년 1월부터 8월까지 방송된 표본상품, 총 415개의 프로그램에서 사용된 배경음악을 취합하여 음악 장르를 분석하였고 분석한 자료들을 통해 상품 유형과 음악과의 상관관계를 살펴보았다. 연구 결과, 상품 유형에 따라 사용되는 음악이 세분화되어 있었고 이에 따른 음악적 특징들은 상품과의 밀접한 관계가 있었다. 배경음악은 상품에 내재되어 있는 이미지, 방송되는 프로그램의 내용, 상품을 구매하는 주 고객층의 연령을 표현하는 음악적 요소로서의 기능을 하였으며 음악장르와 음악의 빠르기, 음향 효과를 통해 상품별 프로그램에 나오는 영상 이미지와의 상관관계가 있었다. 특히 상품 유형의 특징들과 음악 장르는 상품의 이미지 표현을 높이는 상호작용이 있음을 알 수 있었다. 하지만, 상품에 따른 음악 장르의 사용에서 절대적인 법칙을 정할 수는 없었는데 이는 TV 홈쇼핑에서 사용되는 대중음악의 장르가 다양하고 연구자마다 기준이 달라 대중음악 장르를 명확하게 체계화할 수 없기 때문이다. 현재 TV 홈쇼핑에서의 상품 유형에 따른 배경음악의 연구는 전무한 실정이다. 그러나 본 연구에서 처음 시도한 이 현황 분석을 통해 배경음악 선곡 분야가 학술적으로 체계화되는 기초가 되길 바라며, 이런 연구가 나날이 전문화되어 가는 TV 홈쇼핑의 배경음악 부분에서 지침서가 되어 새로운 시도로 더욱 확장시켜지길 기대한다.Ⅰ. 서론 = 1 A. 연구의 필요성 및 목적 = 1 B. 연구 방법 = 1 C. 연구의 의의와 제한점 = 2 Ⅱ. 이론적 배경 = 3 A. TV 홈쇼핑의 이론적 배경 = 3 1. TV 홈쇼핑 개념 = 3 2. TV 홈쇼핑의 구성 요소 = 4 3. TV 홈쇼핑의 특성 = 6 B. TV 홈쇼핑의 배경음악 = 11 1. 배경음악의 개념 및 역할 = 11 2. 배경음악의 유형 = 13 3. 배경음악의 선곡 = 15 Ⅲ. 연구 설계 = 21 A. 연구 문제 = 21 B. 연구 방법 = 21 1. 배경음악 분석 방법 = 21 2. 배경음악 분석 결과에 따른 설문 조사 방법 = 24 Ⅳ. 연구 결과 = 28 A. 카테고리별 상품과 배경음악의 특징 분석 = 28 1. 표본 상품의 배경음악 장르 분석 결과 = 28 2. 상품과 배경음악의 상관성 연구 = 38 B. 배경음악 연구에 따른 적합성 설문 조사 결과 = 56 1. 실험 분석 및 결과 = 56 Ⅴ. 결론 = 61 참고문헌 = 70 부록 &amp;lt;설문지&amp;gt; = 74 ABSTRACT = 7

A Study on Developing the Design Principles of Personal Learning Environment for Connectivism

학위논문 (석사)-- 서울대학교 대학원 : 사범대학 교육학과, 2018. 2. 임철일.새로운 지식이 생겨나고 그 지식이 다시 쓸모없어지는 데까지 걸리는 시간이 점점 짧아지고 있다. 새로운 지식이 빠르게 생겨나고, 수정되며, 소멸되는 디지털 시대에는 개인이 모든 지식을 습득하는 것이 불가능하다. 따라서 네트워크상의 정보 및 사람과 연결을 형성하고 필요할 때 적절한 연결을 찾아갈 수 있는 역량이 보다 중요해지고 있다. 디지털 시대의 새로운 학습이론으로 등장한 연결주의는 정보가 네트워크에 분산되어 있고, 분산되어 있는 정보의 노드(node) 간의 연결이 곧 지식이라고 본다. 따라서 지식은 획득될 수 있는 어떤 것(thing)이 아니며 네트워크에 참여함으로써 노드 간의 연결의 패턴을 확인하고 해석하는 과정에서 학습이 이루어진다고 본다. 이러한 연결주의 학습은 우리의 일상 속에서 무형식적이고 발생적으로 이루어지고 있으나, 연결주의 학습을 체계적으로 지원하는 원리를 탐색하는 연구는 제한적이다. 성공적인 연결주의 학습을 위해서는 학습자에게 주어지는 자율성과 촉진자가 제공하는 구조 사이에 적절한 균형이 필요하다. 이때 촉진자는 전통적인 교수-학습 장면에서와 같이 학습내용에 대한 유일한 전문가로서의 역할을 하기 보다는 학습자의 연결 형성을 지원하는 촉진자로서 적절한 개입을 제공할 수 있다. 이에 본 연구에서는 연결주의가 적용된 개인학습환경 설계원리를 개발하였다. 그리고 개발한 원리에 대해 두 차례의 전문가 타당화를 거쳐 내적 타당성을 확보하고 설계원리를 수업에 적용하여 학습자 및 교수자의 반응을 확인하였다. 본 연구의 구체적인 연구문제는 다음과 같다. 첫째, 연결주의가 적용된 개인학습환경 설계원리는 무엇인가? 둘째, 연결주의가 적용된 개인학습환경 설계원리의 내적 타당성은 어떠한가? 셋째, 연결주의가 적용된 개인학습환경 설계원리에 대한 학습자와 교수자의 반응은 어떠한가? 이상의 연구문제를 해결하기 위해 개발연구 방법론의 절차를 따라 설계원리를 개발하였다. 먼저 연결주의 및 개인학습환경 관련 선행연구를 검토하고 대표적인 cMOOC 세 가지에 대한 경험적 탐색을 실시하여 그 결과를 바탕으로 초기 설계원리를 개발하였다. 이후 초기 설계원리에 대한 전문가 타당화 검사를 실시하고 CVI와 IRA를 중심으로 결과를 분석해 설계원리의 내적 타당성을 확보하였다. 이후 외적 타당화를 위해 설계원리를 수업에 적용하였으며 적용이 끝난 이후 학습자와 교수자를 대상으로 반응검사를 실시하였다. 설계원리가 적용된 수업에 대해 학습자는 네트워크를 통해 많은 사람과 지식 및 의견을 공유할 수 있었고, 다양한 정보를 활용할 수 있었다고 응답하였다. 또한 피드백을 통해 자신의 부족한 지식을 보충할 수 있었으며, 형식의 제약 없이 자유로운 학습이 가능했다고 응답했다. 그러나 몇몇 학습자는 자율적인 탐구활동보다는 구조화된 강의를 제공해줄 것을 원했으며 네트워크상에 자신의 활동을 공개하는 것에 대해 거부감을 느끼는 학습자도 있었다. 친숙하지 않은 테크놀로지의 사용으로 인해 학습의 효율이 떨어졌다는 응답도 있었다. 교수자의 경우 본 설계원리가 학습자에게 적절한 가이드를 제공한다는 점을 강점으로 언급하였다. 이는 학습자의 자율성과 균형을 이루는 구조화된 지원을 제공하고자 했던 본 설계원리의 개발 목적과 부합한다. 반면 교수자는 외부의 전문가를 섭외하는 것에 있어서 어려움을 보였다. 학습자 및 교수자 반응검사 결과를 반영하여 최종적으로 연결주의가 적용된 개인학습환경 지원 설계원리가 도출되었다. 최종 설계원리는 적극적 개방의 원리, 창작물 공유 촉진의 원리, 자율성의 원리, 정보 리터러시 개발의 원리, 풍부한 자원 제공의 원리, 교수 실재감의 원리, 분산된 활동 종합의 원리 총 7개이며, 총 21개의 세부전략으로 구성되어 있다. 뿐만 아니라 연구의 결과로 연결주의의 개념모형이 개발되었으며, 수업 전, 중, 후의 단계에 따른 설계원리의 적용 양상이 도출되었다. 이상의 연구 결과를 바탕으로 성공적인 연결주의 학습에 영향을 주는 요인은 무엇이며 연결주의 학습 실현의 난점은 무엇인지, 형식교육 장면에 연결주의를 적용할 때 발생하는 이슈에는 어떤 것이 있는지를 논의하였다. 또한 후속연구에서는 최소 한 학기 단위 이상의 프로젝트 형태로 본 설계원리를 적용함으로써 보다 장기적인 관점에서 연결의 형성을 확인하고, 보다 다양한 웹 2.0 및 소셜 네트워킹 도구를 활용하여 개인학습환경 활동을 할 수 있도록 지원해야 하며, 형식교육 맥락 외에도 비형식·무형식교육 맥락에 대한 적용이 이루어져야 함을 제안하였다. 본 연구는 연결주의에서 말하는 연결의 대상이 무엇인지 정리한 개념모형을 제안하고 있으며, 연결주의 학습을 효과적으로 지원하기 위해 학습자에게 제공되는 자율성과 구조화된 지원이 균형을 이룬 개인학습환경 설계원리를 구체적으로 안내하고 있다는 점에서 의의가 있다.These days, new knowledge develops and becomes useless in a very short term. In the digital era where new knowledge is rapidly generated, modified and decimated, it is impossible for individuals to acquire all the knowledge. This makes it more important to connect with information and people in network and to identify appropriate connections when needed. Connectivism, which was suggested as a new learning theory in the digital age, considers knowledge as a connection between information nodes distributed in the network. According to connectivism, people can learn by recognizing and interpreting useful patterns between the nodes. While connectivist learning happens in an informal way in our daily lives, few studies have explored the design principles that support connectivist learning. For successful connectivist learning, a proper balance between the autonomy given to learners and the structured support provided by a facilitator is necessary. For example, the facilitator can provide adequate interventions to help learners make great connections, rather than deliver learning materials as an expert. In this study, the design principles of personal learning environment for connectivism were developed. Specific research issues are as follows. First, what are the design principles of personal learning environment for connectivism? Second, what is the intrinsic relevance of the design principles? Third, what is the reaction of learners and an instructor to the principles? The design principles were developed in accordance with the procedure of the development study methodology. First of all, preliminary design principles were developed based on the results of the review of the earlier studies and the analysis of three representative cMOOCs. After then, the initial design principles were evaluated by experts to ensure the internal validity of them. Afterwards, the revised design principles were applied to a class to ensure the external validity of them. Lastly, the final design principles were developed reflecting the students and the instructors responses to the class. When the design principles were applied to the class, the learners were able to share their knowledge and opinions through the network with experts and other learners inside and outside of the classroom. In addition, they supplemented their limited knowledge with the feedback of the experts and other learners. They also learned what they were interested in and found their own way to learn without any given formality. However, some learners required more structured instruction rather than their autonomous exploring activities. Also, they complained about the inefficiency because of the use of tools that were not familiar with them. Additionally, there were some learners who felt unhappy about sharing the results of their activities in open online spaces. Reflecting the responses of the learners and the teacher, the final design principles were developed. They include seven components: the principle of encouraging openness, the principle of facilitating the sharing of artifacts, the principle of supporting autonomy, the principle of developing information literacy, the principle of providing abundant online resources, the principle of supporting teacher presence, and the principle of aggregating distributed activities. In addition, the steps to which the design principles were applied (before, during, and after the class) were developed as a result of the research. Based on the above results, the factors that can affect the successful connectivism, the difficulties of realizing connectivism, and some issues when connectvism is applied to the formal educational context were discussed. Furthermore, it was suggested for the future work that the formation of a connection should be identified in a longer term by applying the principles for more than one semester, that a more diverse Web 2.0 or social networking tools should be utilized, and that the principles should be applied not only to formal educational contexts but also to informal or non-formal learning situations. This research will add to the body of knowledge of connectivism in the sense that it proposes a conceptual model of connectivism. Further, it overcomes the limitations of existing studies by suggesting the design principles of personal learning environment that provide structured activities while supporting learners autonomy.I. 서론 1 1. 연구의 필요성 및 목적 1 2. 연구문제 4 3. 용어의 정리 5 가. 연결주의 5 나. 개인학습환경 5 II. 이론적 배경 6 1. 연결주의 6 가. 연결주의의 등장 배경 6 나. 연결주의의 개념 및 특징 7 다. 연결주의와 cMOOC 11 2. 개인학습환경 14 가. 개인학습환경 개념의 등장 배경 14 나. 개인학습환경의 개념 및 특징 15 3. 연결주의가 적용된 개인학습환경 설계원리 20 III. 연구방법 24 1. 설계·개발 연구 24 2. 연구 절차 25 3. 자료수집 및 분석 27 가. 초기 설계원리 도출 27 나. 내적 타당화 27 다. 외적 타당화 30 Ⅳ. 연구결과 33 1. 초기 설계원리 및 전략 개발 33 가. 경험적 탐색 33 나. 초기 설계원리 및 전략 41 2. 전문가 타당화 45 가. 1차 전문가 타당화 45 나. 1차 전문가 타당화 결과에 따른 설계원리의 수정 50 다. 2차 전문가 타당화 55 라. 2차 전문가 타당화 결과에 따른 설계원리의 수정 59 3. 수업의 설계 및 실행 63 가. 수업의 설계 63 나. 수업의 실행 66 4. 외적 타당화 71 가. 학습자 반응 71 나. 교수자 반응 95 5. 최종 설계원리 100 Ⅴ. 논의 및 결론 109 1. 논의 109 가. 성공적인 연결주의 학습에 영향을 주는 요인 109 나. 연결주의 학습 실현의 난점 111 다. 형식교육 장면에 연결주의를 적용할 때 발생하는 이슈 113 2. 결론 및 제언 114 가. 요약 및 결론 114 나. 연구의 한계 및 후속 연구를 위한 제언 116 참고문헌 119 부록 130 Abstract 140Maste

An Analysis of the Massacre of Koreans in 1923 from the Perspective of International Law - Genocide and State Responsibility -

학위논문 (석사) -- 서울대학교 대학원 : 법과대학 법학과, 2021. 2. 이근관.This thesis aims to address the issue of whether Japan is responsible for the Massacre of Koreans committed by the Japanese government and citizens at Kanto region after the Great Kanto Earthquake in 1923, which is also known as the Kanto Massacre. Such event holds great significance since it is also relatable to the case of genocide, which is prohibited in international law as jus cogens. The Kanto massacre, which had taken advantage of the post-quake confusion, eventually caused approximately 7,000 Koreans be killed. The thesis firstly attempts to analyze the relationship between the Kanto Massacre and the specific requirements to commit genocide to prove the occurrence of genocide and the state responsibility. If the articles of the Genocide Convention can be retroactively applied, Japan would be responsible of breaching obligations to prevent genocide and punish those who committed genocide under the convention, as well as obligation not to commit genocide by a person or group of persons that can be considered an act of a State. Moreover, considering the fact that the Genocide Convention was adopted in 1948, it is questionable whether the logic of the Convention can be applied to the Kanto massacre from the viewpoint of temporal law. Although it is true that there is controversy over the retroactive application of the Convention to cases of serious violations of human rights such as Nuremberg trials and the Armenian massacre, according to the generally accepted temporal law, the Kanto massacre cannot consist genocide. Another legal issue to be examined when addressing the Kanto Massacre is extinctive prescription of claims to the Japanese government. Unlike the cases of comfort women and Dokdo Island, the Korean government has not raised an issue about the massacre to Japan; such omission can possibly lead to the loss of the right to invoke state responsibility in the future. Nonetheless, in the case of the right to claim is still remaining, under the international law where no consistent view about loss of the right to invoke responsibility exists, the two conditions must be fulfilled in order to successfully conduct diplomatic protection for the victims.본 연구는 1923년 일본에서 발생한 관동대진재를 계기로 조선인들이 집단으로 살해된 사건인 이른바 관동대학살이 현재 강행규범으로서 금지되고 있는 제노사이드에 해당하는지 여부와 그에 대한 일본의 국가책임이 성립함으로써 국가책임을 추궁할 수 있는지에 관한 문제를 연구 대상으로 한다. 대지진이라는 자연재해를 이용한 관동대학살은 약 7천 명에 달하는 피해자를 발생시켰다. 이 글에서는 우선 제노사이드가 성립하기 위한 구체적인 요건을 관동대학살의 전개 양상이 충족시키는지를 확인함에 따라 일본에게 성립할 수 있는 국가책임에 접근하고자 시도한다. 우선, 제노사이드 협약을 소급적으로 적용할 수 있다는 결론으로 이어질 경우, 일본은 제노사이드 협약상 예방 및 처벌 의무를 위반하였을 뿐만 아니라 전통적 국가책임 법리에 따라 국가에 귀속될 수 있는 사인의 제노사이드 금지 의무 또한 위반하였다고 볼 수 있음을 확인하였다. 나아가 제노사이드 협약이 1948년에 채택되었다는 사실에 기반하여 시제법 이론의 관점에서 제노사이드 협약 이전 발생한 사건에 대한 적용 가능성을 검토하였다. 뉘른베르크 판결, 아르메니아 학살 사건과 같이 중대한 인권 침해 사건에 대해 소급 적용이 가능한지에 대해서는 현재로서도 논란이 지속되고 있으나, 일반적으로 수용되고 있는 시제법의 원칙에 의해 관동대학살은 제노사이드의 형태를 띠고 있음에도 불구하고 처벌 가능성을 가질 수 없다는 것이 본고의 요점이다. 아울러 한국 정부가 그간 일본 정부에 대해 위안부, 독도 문제와 관련된 문제 제기를 해 온 반면, 관동대학살에 대해서는 비교적 문제 제기나 책임 추궁을 하지 않은 행위는 청구권의 소멸 가능성을 제기한다. 이렇듯 소멸시효와 국가책임법상 청구권의 소멸이라는 이론적인 문제에 대한 명확한 해답이 없는 현재 상황에서, 청구권이 소멸되지 않을 경우에 외교적 보호권을 행사하기 위해서는 요구되는 두가지 요건을 모두 충족시켜야 한다는 결론을 도출하였다.제 1 장 서론 1 제 1 절 연구의 배경 1 제 2 절 관련 연구 현황 3 제 3 절 연구의 목적 및 방향 4 제 2 장 관동대학살의 배경 및 전개 과정 5 제 1 절 사건의 배경 및 개요 5 제 2 절 관동대진재 발생 이후 전개 과정 6 1. 일본 정부의 계엄령 발령 6 2. 유언비어의 배포 10 3. 군대, 경찰 및 자경단의 살해 12 제 3 장 관동대학살에 대한 제노사이드와 국가책임 13 제 1 절 관동대학살의 제노사이드 성립 검토 13 1. 제노사이드의 의의 13 2. 제노사이드의 성립 요건: 대상 집단 15 3. 제노사이드의 성립 요건: 특별한 의도 (dolus specialis) 17 4. 검토 19 제 2 절 제노사이드와 국가책임 23 1. ICJ의 Bosnian Genocide Case (2007) 판결 개요 23 2. ICJ의 Bosnian Genocide Case (2007) 판결 검토 26 제 3 절 관동대학살 사건에 대한 일본의 국가책임 28 1. 행위의 국가귀속성 28 1) 관헌 및 군대의 행위 30 2) 자경단의 행위 31 2. 행위의 위법성 37 1) 제노사이드를 행하지 않을 의무 37 2) 제노사이드를 방지할 의무 38 3) 제노사이드를 행한 자를 처벌할 의무 39 3. 소결 42 제 4 장 제노사이드 협약의 적용 가능성과 국가책임의 성립 42 제 1 절 시제법의 원칙 42 제 2 절 제노사이드 협약의 적용 가능성 검토 46 1. 제노사이드 협약 이전 형성된 국제관습법 46 1) 민간인 학살을 금지하는 국제관습법 48 2. 제노사이드 협약의 소급 적용을 찬성하는 견해 50 1) 제노사이드 사건의 지속적인 발생 50 2) 법적 정의를 위한 처벌의 필요성 52 3) 소급적용 금지 규정의 부재 54 3. 제노사이드 협약의 소급 적용이 불가능하다는 견해 55 1) 소급효 금지에 의한 법적 안정성 55 2) 소급 적용의 시간적 한계 59 4. 관동대학살에 대한 적용 검토 59 제 3 절 일본의 국가책임 성립 여부 검토 62 1. 제노사이드에 대한 국가책임 62 2. 국제법상 불법행위에 대한 국가책임 65 제 5 장 일본의 국가책임 이행 가능성 66 제 1 절 국가책임의 추궁 66 1. 국가책임법상 청구권의 상실 66 1) 학설의 견해 67 2) 판례의 견해 68 3) 검토 69 2. 청구권의 제기가 있었는지 여부 검토 70 3. 1965년 한일청구권협정에서의 논의 73 1) 관동대진재 피해자에 대한 논의가 있었는지 여부 76 2) 청구권협정 및 경제협력협정상 청구권에 관동대진재 피해가 포함되는지 여부 77 3) 국제인권법과 소멸시효 78 4) 요약 79 4. 외교적 보호권의 행사 가능성 검토 79 제 2 절 국가책임의 이행 방법 85 1. 국가책임법상 일반 원칙 85 1) 원상회복 86 2) 금전배상 87 3) 만족 88 4) 검토 89 제 3 절 요약 92 제 6 장 결론 및 향후 연구 92 참고문헌 97 Abstract 104Maste

자궁경부암 조직에서 발현되는 Ki67 mRNA의 진단적, 임상적 의의

Ki67 is a key biomarker associated with cancer cell proliferation and poor prognosis. We previously evaluated the diagnostic potential of quantitatively measured Ki67 mRNA levels in formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) cervical cancer tissue samples. In the present study, we continued this avenue of research using quantitative reverse transcription PCR (RT-qPCR) to measure Ki67 mRNA levels in FFPE cervical tissues and performed an assessment with each clinical prognostic factor of patients. A total 190 FFPE cervical tissue samples comprised of 80 squamous cell carcinoma (SCC), 10 adenocarcinoma (ADC), 30 HSIL, 30 LSIL, and 40 normal cervical tissue samples were obtained. Using this RT-qPCR assay, the predictive value of Ki67 in cases with low-grade squamous intraepithelial lesions (LSIL) and those with high-grade squamous intraepithelial lesions (HSIL) were measured. As a result, Ki67 mRNA levels were increased in SCC and ADC cervical cancer tissues (n = 90) compared to those in normal cervical tissues (n = 40) (P < 0.001). The diagnostic validity of the Ki67 mRNA assay was evaluated and demonstrated a sensitivity of 93.3% (95% confidence interval (CI) = 86.1 to 97.5) and a specificity of 97.5% (95% CI = 86.8 to 99.9). Ki67 mRNA expression level was 93.3% for cervical cancer, 40.0% for HSIL, 13.3% for LSIL, and 2.5% for normal tissue samples. Furthermore, high levels of Ki67 mRNA expression in cervical cancer were associated with lymph node status (P = 0.02). In conclusion, Ki67 mRNA assay can provide an additional accurate approach for molecular diagnosing cervical cancer, and also predict prognosis of cervical cancer depending on LSIL and/or HSIL status.open석