편도유래 중간엽 줄기 세포를 이용한 슈반 세포 분화법에 대한 연구

Schwann cells (SCs) are known to contribute to structural support and guidance during axonal regeneration by producing adhesive molecules and neurotropic factors; therefore, they are potentially a pivotal target in the recovery of injured nervous tissues. While autologous SC transplantation has shown promising clinical results for treating nerve injuries, several problems such as donor site morbidity and limited amount of the cells have been considered as a major issue. Therefore, the development of an alternative cell source for peripheral nerve injury is required. In this study, tonsil-derived mesenchymal stem cells (T-MSCs) were chemically differentiated into SC-like cells (T-MSC-SCs). Using SC markers such as CAD19, GFAP, NGFR, MBP, S100B, KROX20 and KROX24 during quantitative real-time PCR, upregulation of GFAP, NGFR, S100B, KROX20, and KROX24 and the downregulation of CAD19 and MBP at the fully differentiated stage were detected. Furthermore, the capacity to myelinate axons were observed when T-MSC-SCs were co-cultured with mouse dorsal root ganglion neurons. The application of TMSC-SCs into a sciatic nerve injured animal model showed marked improvements in gait analysis and promoted repair of injured nerves. Thus, the therapeutic application of human T-MSCs might be appropriate for assisting in peripheral nerve regeneration.;슈반 세포는 다양한 신경 영양 인자(neurotrophic factors)와 부착 물질(adhesive molecules)을 생성함으로써 신경 축삭(axon) 혹은 신경극(neurite)의 성장을 유도하고 안내하는 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 따라서, 슈반 세포에 대한 연구 수행은 손상된 신경 조직의 재생(regeneration)과 기능 회복을 증진시키기 위한 가능성을 지니고 있다. 손상된 신경에 자가 슈반 세포 이식법(autologous Schwann cell transplantation) 적용은 효과적인 임상 결과를 보여 주지만, 공여 부위 이환(donor site morbidity)과 불충분한 양적 획득이란 측면에서 세포 치료제로서 사용하는 데 어려움이 있다. 이 연구에서는 편도 유래 중간엽 줄기 세포를 이용하여(Tonsil-derived mesenchymal stem cells, T-MSCs) 슈반 세포(Schwann cells differentiated from T-MSCs, T-MSC-SCs)로의 분화를 유도하였다. 실시간 중합효소연쇄반응(real-time PCR)법을 이용하여 세포 표지인자인 CAD19, GFAP, MBP, NGFR, S100B, KROX20, KROX24의 발현량을 확인하였을 때, 분화 이후의 T-MSC-SCs에서 분화 전 T-MSCs에 비해 GFAP, NGFR, S100B, KROX20, KROX24는 증가 한데 반해, CAD19과 MBP는 낮아진 것을 확인하였다. 또한, 마우스 후근신경절 신경세포(mouse dorsal root ganglion neuron)와의 체외 공동배양(coculture)을 통해 T-MSC-SCs에 의해 수초화된 축삭(myelinated axons)을 관찰하고 휴먼 미토콘드리아 항체(human mitochondria antibody)를 이용하여 형광 염색을하여 수초를 이룬 세포가 TMSC-SCs에서 비롯된 것임을 확인 할 수 있었다. 좌골 신경(sciatic nerve)에 손상을 입은 마우스 모델에 T-MSC-SCs를 이식 하여 보행 분석(gait analysis)과 전기생리학적 분석(electrophysiological study)을 수행하였을 때, 보행 분석의 경우 이식 후 4주차부터 유의한 증상 완화 결과를 보였고 2주와 6주에 수행 된 복합근활동전위(compound muscle action potential)와 신경전달속도(nerve conduction velocity)결과에서도 시간이 지남에 따라 손상 그룹에 비해 TMSC-SCs를 이식한 그룹에서 신경 재생의 효과가 나타남을 보였다. 이러한 결과는, 인체 유래 T-MSCs의 세포 치료제로써의 활용이 말초 신경 병증에 대한 적절한 치료 전략으로 응용될 수 있음을 보여 주고 있다.I. Introduction 1 II. Materials and Method 3 A. Cell culture of Human Schwann Cell (HSC) and Tonsil-Derived Mesenchymal Stem Cell (TMSC) 3 B. Adipogenic, Chondrogenic and Osteogenic Differentiation of T-MSCs 4 C. Animals model and Transplantation with T-MSC-SCs 5 D. Differentiation process to a SC Phenotype 5 E. Quantitative Real-time PCR 6 F. Analysis of Western Blot 7 G. Immunocytochemistry and Immunohistochemistry 7 H. Preparation of Conditioned Media (CM) 9 I. Measurement of the Differentiated NSC34 Cells 9 J. Coculture of T-MSC-SCs and Mouse DRG Cell 9 K. Footprint Analysis and Assessment of Sciatic Functional Index (SFI) 10 L. Electrophysiological Studies 11 M. Statistical Analysis 11 III. Result 13 A. Schwann Cell (SC)-Like Phenotype of Differentiated Tonsil-Derived Mesenchymal Stem Cells (T-MSCs) 13 B. Quantitative Real-time PCR (RT-qPCR) 17 C. Immunocytochemistry and Western Blotting using Nerve Growth Factor Receptor and Glial Fibrillary Acidic Protein antibodies 19 D. Conditioned Medium from Tonsil-Derived Mesenchymal Stem Cell (T- MSC-SCs) Induced Neurite Outgrowth of NSC34 Mouse Motor Neurons 22 E. In Vitro Test for Myelinating Function of T-MSC-SCs 26 F. Functional Recovery in the Sciatic Nerve Injury Model 29 IV. Discussion 33 V. Reference 38 VI. Abstract in Korean 4

Pharmacological unmasking microarray를 통한 새로운 간암 특이적 메틸화 표지자의 선별에 관한 연구

학위논문 (석사)-- 서울대학교 대학원 : 협동과정 종양생물학전공, 2011.2. 강경훈.Maste

피드백을 활용한 고쳐쓰기 연구

학위논문(석사)--아주대학교 교육대학원 :국어교육,2020. 2국문 초록 본 연구는 피드백을 활용한 고쳐쓰기가 중학생 쓰기 향상에 어떤 영향을 미치는지 효과를 밝히는데 목적을 두고 있다. 쓰기는 공동체 안에서 이루어지는 소통으로서 개인과 사회의 상호작용을 통해 이루어진다. 이러한 의미에서 학습자는 사회 구성원들과 원활한 소통을 위해 보편성을 기준으로 글을 쓰고, 자신의 글에 책임감과 반성적 태도로 고쳐쓰기를 진행해야 한다. 이는 학습자가 쓰기 과정에서 자신이 쓴 글의 문제점을 인식하고 점검하는 고쳐쓰기와 반성적 행위가 곧 쓰기 능력이 되기 때문이다. 쓰기 교육에서도 고쳐쓰기가 중요하게 인식되고 있지만, 쓰기 목표에 따른 교육 활동으로 결과 중심의 활동이 진행되고 있는 것이 현실이다. 소통 없이 이루어지는 결과 중심의 활동은 학습자 스스로 자신이 쓴 글에 문제점을 인지 못하여 고쳐쓰기 활동을 부담스럽게 여기고, 글이 향상되지 못하는 원인이 되기도 한다. 따라서 본 연구에서는 학습자 쓰기 향상을 위해 과정 중심의 피드백을 활용한 고쳐쓰기 활동을 제안하였다. Ⅱ장에서는 고쳐쓰기 선행 연구를 검토하여 사회 구성주의 이론을 기반으로 정하고, 피드백 선행 연구에서는 동료 피드백의 보완적 방법으로 교사 피드백이 이루어져야 한다는 점에 주목하여 피드백 결합의 중요성을 시사하였다. 또한 고쳐쓰기에 대한 학습자 인식 결과에서 학습자는 고쳐쓰기에 대한 부담감, 기술적 전략 부족, 타인과의 소통 거부, 자기중심적 글쓰기 등의 이유로 주도적으로 글을 점검하지 못하고 있기에 고쳐쓰기 내적 동기를 형성하여 의미 있는 활동이 진행될 수 있는 대안 마련이 필요함을 제시하였다. Ⅲ장에서는 중학교 1학년을 대상으로 고쳐쓰기 활동 분석에 필요한 연구 내용을 마련하기 위해 연구 방법, 과정, 평가 기준, 활동 모형 등을 정리하였다. Ⅳ장에서는 피드백 고쳐쓰기 활동 모형에 따라 피드백을 활용한 소집단 고쳐쓰기 활동을 진행하였으며, 활동 결과를 질적으로 분석하여 동료 피드백과 교사 피드백의 효과와 한계점을 제시하고, 동료 피드백과 교사 피드백 결합의 고쳐쓰기 활동이 학습자 쓰기 변화에 어떤 영향을 주었는지 탐색하여 그 효과를 밝혔다. 본 연구의 결과는 다음과 같다. 첫째, 동료 피드백만 진행된 경우에는 또래 친구들과의 소통으로 쓰기 흥미와 정서적 안정감을 가질 수 있었지만, 구체적인 반응이 없어 고쳐쓰기에 변화가 없었다는 것을 알 수 있었다. 둘째, 교사 피드백만 진행된 경우에는 구체적인 반응으로 쓰기 개선에 도움이 되지만 교사와의 면담을 부담스럽게 여기고 서면 피드백을 기계적으로 베껴 쓰는 행위로 인식한다는 것을 알 수 있었다. 셋째, 동료 피드백과 교사 피드백이 모두 이루어진 경우에는 친구들과 교사의 소통으로 다양한 계층의 언어 습득, 피드백 반응과 수용 범위 확장, 고쳐쓰기에 대한 인식 변화, 지식 네트워크 성립 등의 효과를 통해 쓰기가 개선되는 양상이 보였다. 본 연구는 학습자의 피드백을 활용한 고쳐쓰기 활동을 구체적으로 분석하여 중학교 1학년 학습자의 쓰기 변화에 어떤 영향을 주었는지 탐색하였다는 점에서 의의가 있다. 또한 고쳐쓰기 활동에서 동료 피드백과 교사 피드백이 활용되고 있지만, 그 효과가 미흡하여 피드백을 결합하여 그 효과를 제시하였다는 점에서 교육적 의의가 있다. 다만 중학교 1학년 이외 모든 학년에서 피드백을 결합한 고쳐쓰기가 진행되기 위해서는 구체적인 평가 매뉴얼, 암시적 피드백, 학습 수용 능력을 고려한 소집단 구성이 활동 방법으로 제공될 수 있는 후속 연구들이 진행되어야 할 것이다.Ⅰ. 서론 1 1. 연구 목적과 필요성 1 2. 연구사 검토 3 Ⅱ. 이론적 배경 및 예비 조사 7 1. 고쳐쓰기의 개념과 특징 7 1) 고쳐쓰기의 개념 7 2) 고쳐쓰기의 특징 11 2. 피드백의 개념과 유형 13 1) 피드백의 개념 13 2) 피드백의 유형 17 3. 학습자의 고쳐쓰기에 대한 예비 조사 21 1) 학습자의 고쳐쓰기 활동 분석 21 2) 고쳐쓰기에 대한 학습자의 인식 27 Ⅲ. 연구 방법 29 1. 연구 대상 및 과정 29 1) 연구 대상 29 2) 연구 과정 31 2. 쓰기 과제 및 평가 기준 34 1) 쓰기 과제 34 2) 평가 기준 36 Ⅳ. 연구 결과 40 1. 동료 피드백의 결과 및 효과 분석 40 1) 동료 피드백의 결과 분석 40 2) 동료 피드백의 효과와 한계점 46 2. 교사 피드백의 결과 및 효과 분석 49 1) 교사 피드백의 결과 분석 49 2) 교사 피드백의 효과와 한계점 55 3. 동료 피드백과 교사 피드백의 결합 결과 및 효과 분석 58 1) 동료 피드백과 교사 피드백 결합의 결과 분석 58 2) 동료 피드백과 교사 피드백 결합의 효과 68 3) 동료 피드백과 교사 피드백 결합의 시사점 71 Ⅴ. 결론 74 참고문헌 77 부록 82Maste