Mutation in the transcriptional regulator PhoP contributes to avirulence of Mycobacterium tuberculosis H37Ra strain.

Attenuated strains of mycobacteria can be exploited to determine genes essential for their pathogenesis and persistence. To this goal, we sequenced the genome of H37Ra, an attenuated variant of Mycobacterium tuberculosis H37Rv strain. Comparison with H37Rv revealed three unique coding region polymorphisms. One polymorphism was located in the DNA-binding domain of the transcriptional regulator PhoP, causing the protein's diminished DNA-binding capacity. Temporal gene expression profiles showed that several genes with reduced expression in H37Ra were also repressed in an H37Rv phoP knockout strain. At later time points, genes of the dormancy regulon, typically expressed in a state of nonreplicating persistence, were upregulated in H37Ra. Complementation of H37Ra with H37Rv phoP partially restored its persistence in a murine macrophage infection model. Our approach demonstrates the feasibility of identifying minute but distinct differences between isogenic strains and illustrates the consequences of single point mutations on the survival stratagem of M. tuberculosisope

Evaluation of Liquid Culture System in Sputum Culture and Drug Susceptibility of Mycobacterium tuberculosis

In this study, we compared the BacT/Alert liquid culture system with Ogawa and $L\ddot{o}wenstein$-Jensen (L-J) media for sputum culture and drug susceptibility test (DST) of Mycobacterium tuberculosis. Rapid liquid culture systems have been widely employed both for primary cultures of M. tuberculosis from clinical specimens and for drug susceptibility test because of its greater sensitivity and faster turn-around time than the conventional egg-based culture methods (Ogawa, $L\ddot{o}wenstein$-Jensen media). Sputum specimens were decontaminated with N-acetyl-L-cysteine (NALC)-4% NaOH and inoculated into the BacT/Alert culture bottles and Ogawa media. 95 from among 135 sputa were smear-positive, 97 (71.9%) were culture-positive by the BacT/Alert culture system, while 89 (65.9%) were positive by Ogawa media. The mean time to culture-positive by the BacT/Alert process system was about 11.3 days, which was significantly shorter than that by Ogawa media (22.4 days). Of 32 M. tuberculosis cultures examined for drug sensitivity, the concordant rate between the two methods (BacT/ Alert liquid culture system, $L\ddot{o}wenstein$-Jensen media) ranged from 87.5% for isoniazid and 90.6% for rifampicin.ope

고·저 phytate 식이를 섭취하는 건강한 한국여대생의 phytate배설 및 칼슘과 인의 흡수율 비교

학위논문(석사)--서울대학교 대학원 :식품영양학과,2003.Maste

Iimpact of the return to work on life satisfaction of people with work-related disabilities

학위논문(석사) --서울대학교 보건대학원 :보건학과(보건정책관리학전공),2010.2.Maste

소 분변으로부터 Clostridium perfringens 분리와 중합효소연쇄반응에 의한 독소 유전자 검출

학위논문(석사)--서울대학교 대학원 :수의학과 수의미생물학전공(수의전염병학),1997.Maste

Characterization of Immune Responses to Mycobacterium tuberculosis Rv2041c Protein

Tuberculosis, which is caused by Mycobacterium tuberculosis (M. tb), is one of the most important infectious diseases in the world. Although many functional studies have been conducted on M. tb proteins in the post-genomic era, little is known about the function of many proteins expressed specifically during latency. Previously, we reported that Rv2041c from M. tb H37Rv is highly expressed under conditions of low pH and hypoxia, which represent the in vitro mimicry of latent tuberculosis. In the present study, increased expression levels of Rv2041c under hypoxia and low pH in vitro culture was confirmed by RT-PCR. Interestingly, Rv2041c showed significantly increased expression among genes of the same operon and genes belonging to the same functional group. Finally, the immune responses elicited by the recombinant (r) Rv2041c protein were investigated using ex vivo and in vivo models of M. tb infection. A significantly high level of pro-inflammatory cytokines such as TNF-α, IL-6, and IL-12p40 was detected in a dose-dependent manner by treatment of murine bone marrow-derived macrophages with rRv2041c protein. In addition, IFN-γ and TNF-α secretion increased after stimulation with purified Rv2041c protein to lymphocytes from latent and active TB mice in a modified Cornell model. In conclusion, our findings suggest that Rv2041c is a new T-cell antigen and could be a potential vaccine candidate against M. tb infection by inducing a strong cellular immune response.ope

마우스 모델에서의 결핵에 대한 Cocktail subunit 백신의 면역성 및 방어효과.

BK 21 Project for Medical Science/박사[한글] 결핵은 AIDS, 말라리아와 함께 세계 3대 주요 전염성 질환의 하나이다. 결핵에 대한 백신으로 BCG가 전세계적으로 사용되고 있으나, 가장 문제가 되는 성인의 폐결핵에 대하여 BCG 백신의 백신효과가 일정하지 않아 BCG 백신을 대체할 수 있는 새로운 결핵백신의 개발이 절실한 실정이다. 결핵에 대한 subunit 백신을 개발하기 위해 결핵의 재조합 단백질인 Antigen 85A (Ag85A), ESAT-6, 16 kDa, 그리고 38 kDa을 이용하여 마우스 모델에서 결핵에 대한 방어효과를 조사하였다. 그리고 alum, MPL-SE, DDA, IFA, 그리고 MPL-SE과 DDA를 조합한 adjuvants를 사용하여 재조합항원에 대한 면역반응과 방어효과를 증가시키고자 하였다. C57BL/6 마우스에 결핵항원을 단독 또는 조합하여 피하로 3주 간격으로 3회 면역을 실시한후 4주후에 세포성 및 항체매개 면역반응을 측정하였다. 결핵에 대한 subunit 백신의 방어능을 측정하기 위하여 M. tuberculosis H37Rv 결핵균을 공기감염시키고 4 주 또는 8주 후에 폐와 비장에서 결핵균 수를 측정하였다. 두 세가지 항원으로 조합된 cocktail subunit 백신으로 면역시킨 마우스에서 단독항원으로 면역시킨 경우보다 결핵에 대한 세포성 면역이 증가하였다. 하지만 4 가지 결핵항원을 조합하여 면역시킨 마우스에서는 결핵에 대한 세포성 면역반응이 미약하였다. 그러나 항체매개 면역은 두 가지 이상의 항원을 조합하여 면역시킨 마우스에서 모두 증가하였다. 결핵항원을 단독으로 면역시킨 마우스에서는 결핵에 대한 유의성 있는 방어능이 나타나지 않았지만, 둘 또는 세 가지 항원을 조합하여 면역시킨 마우스에서 폐와 비장에서 유의성 있게 결핵균수가 감소하였다. Ag85A에 ESAT-6 또는 38 kDa 항원을 조합한 cocktail subunit 백신과 Ag85A에 ESAT-6와 16 kDa을 조합한 cocktail subunit 백신에서 다른 조합으로 된 cocktail subunit 백신보다 높은 방어능을 나타내었다. 하지만 4가지 결핵항원으로 조합한 cocktail subunit 백신에서는 유의성 있는 결핵균수의 감소가 관찰되지 않았다. 본 연구에서 한 가지 항원으로 면역시키는 것보다 둘 또는 세 가지 항원을 조합하여 면역시킬 때에 결핵에 대하여 백신효과가 증가하는 것을 관찰할 수 있었다. Ag85A에 16 kDa 또는 38 kDa 항원을 조합한 cocktail subunit 백신과 Ag85A에 ESAT-6와 16 kDa항원을 조합한 cocktail subunit 백신이 결핵에 대한 백신후보로서의 가능성이 시사된다. 나아가 백신의 효과를 최대화하기 위하여 각 항원의 적절한 용량에 대한 연구가 필요할 것으로 사료된다. [영문] Tuberculosis (TB), caused by Mycobacterium tuberculosis, is one of the world’s three major infectious diseases, along with AIDS and malaria. An effective vaccine against TB would be the most cost effective way of controlling the disease. Given the controversial efficacy of BCG vaccine against TB in adults, it has become urgent that we develop new TB vaccines, which can replace BCG and overcome the inhibitory effect shown by environmental mycobacteria upon vaccine effectiveness. In an effort to develop subunit vaccines against TB, the recombinant proteins Antigen 85A (Ag85A), ESAT-6, 16 kDa, and 38 kDa of M. tuberculosis were examined for protective efficacy in a mouse model. In addition, four adjuvants, namely, alum, MPL-SE, DDA, FIA, and a combination of MPL-SE and DDA were evaluated in term of their synergistic effects on immune response to the recombinant antigens. C57BL/6 mice were immunized three times subcutaneously with individual antigen or cocktail antigens that consisted of two to four antigens including Ag85A as a key antigen. Cellular and humoral immune responses were measured four weeks after the last immunization, and IgG isotypes were determined. Protective efficacy was evaluated by bacterial counts in lungs and spleens four or eight weeks after aerosol challenge with M. tuberculosis H37Rv. IFN-γ production was consistently elevated in mice immunized with cocktail vaccines consisting of two or three TB antigens compared to mice immunized with a single TB antigen. Interestingly, however, no significant increase in IFN-g was observed production in mice that received a cocktail vaccine consisting of four TB antigens. When mice were immunized with an individual antigen, there was no significant protection against M. tuberculosis. However, significant reductions in bacterial count in the lungs and spleens were observed when mice were immunized with cocktail subunit vaccines consisting of two or three TB antigens. Cocktail subunit vaccines consisting of Ag85A + ESAT-6, Ag85A + 38 kDa, and Ag85A + ESAT-6 + 16 kDa rendered greater protection than other antigen combinations. However, no significant reduction in bacterial load was found in mice immunized with a cocktail vaccine consisting of four TB antigens, probably because of reduced amounts of individual antigens. This study demonstrates that cocktail antigens containing to two or three antigens are more effective than a single antigen for the protection of mice against M. tuberculosis infection. Cocktail subunit vaccines consisting of Ag85A + 38 kDa and Ag85A + ESAT-6 + 16 kDa were found to be most promising as vaccines against TB. Further study needs to be undertaken to determine the proper doses of individual antigens in order to maximize protective efficacy.ope

장애인의 의료이용과 미충족의료 경험에 영향을 미치는 요인

학위논문 (박사)-- 서울대학교 보건대학원 : 보건학과(보건정책관리학전공), 2014. 2. 권순만.장애인이 국가와 사회에 우선적으로 요구하는 사항 중 의료보장은 해마다 1, 2위를 차지해왔으며, 이들은 생활비 중 많은 부분을 장애로 인한 보건의료비에 지출하고 있다. 장애인에게 있어서 보건의료를 통한 건강증진과 보편적인 기능상태의 유지는 다른 활동의 제한을 완화시키며, 평등한 기회를 제공한다는 측면에서 특히 중요하다. 그러나 이처럼 보건의료가 장애인의 삶에서 매우 중요한 축을 이루고 있음에도, 장애인의 보건의료 이용에 관한 정책과 이를 뒷받침하는 연구는 충분히 진행되지 못한 상황이다. 그간 이루어진 장애인의 보건의료 이용에 관한 연구는 주로 횡단면 자료를 활용하여 장애여부에 따른 차이를 확인해왔다. 그러다보니 개인의 특성을 정확히 보정하지 못했고 장애인 내에서의 특성을 반영하지 못했다. 또한 장애인 당사자와 학계에서는 장애인이 속한 사회 환경의 중요성을 주장해 왔으나, 실증분석을 통한 근거자료는 충분히 마련되지 못했다. 이에 본 연구에서는 지체 장애, 뇌병변 장애를 가진 만 20-64세의 성인 재가장애인을 대상으로 두 가지 분석을 실시하였다. 첫 번째 분석에서는 2005-2011년 한국복지패널 자료를 활용하여 패널회귀분석을 통해 개인의 특성을 보정한 상태에서의 비장애인 대비 장애인의 건강검진, 외래 및 입원이용 현황을 파악하고, 나아가 장애인 내에서 의료이용에 영향을 미치는 특성을 살펴보았다. 두 번째 분석에서는 2011년 장애인실태조사 자료를 활용하여 다항로짓모형을 통해 장애인이 필요한 때에 의료서비스를 받지 못한 경험, 즉 미충족의료에 영향을 미치는 다양한 접근성 저해 요인을 밝혀냈다. 비장애인 대비 장애인의 의료이용 특성을 파악한 결과, 패널회귀모형을 통해 개인의 특성을 보정한 후에도 중증 장애인의 건강검진 수검률은 비장애인에 비해 낮았으며, 장애인의 입원 일 수는 비장애인보다 긴 것으로 나타났다. 외래진료 횟수에서는 장애여부에 따라 유의미한 차이가 나타나지 않았다. 이는 장애인이 평소 제때에 건강검진이나 외래를 이용하지 못하여 방치된 문제가 입원으로 이어질 수 있음을 시사했다. 장애인 내에서의 의료이용에 영향을 미치는 요인을 살펴보면 장애인의 건강검진 수검률을 높이는 데에는 임금근로가, 외래진료 횟수에는 만성질환의 보유가, 입원 일 수에는 장애보유기간, 중증도, 전년대비 중증도의 악화, 만성질환의 보유, 가구소득수준이 유의미한 영향을 미쳤다. 마지막으로 장애인의 미충족의료 경험에 영향을 미치는 요인에 관한 분석 결과는 다음과 같다. 배우자가 있을 때, 친구 및 친지와의 사교활동에 참여할 때에, 가구소득이 높을수록 경제적 이유로 인한 미충족의료의 경험 확률은 적어지는 것으로 나타났으며, 도와줄 사람이 없어서 집밖활동을 못할 때에, 장애인편의시설이 부족하여 외출에 불편함을 겪을 때에, 일상생활수행에 도움이 필요할 때에 교통불편으로 인한 미충족의료의 경험 확률이 높은 것으로 나타났다. 또한 독거인 경우에 예약, 진료대기시간 등의 의료기관 편의성 제한으로 미충족의료를 경험할 가능성이 높았다. 나아가 사회적 지지와 사회 환경이 장애인에게 긍정적으로 작용할 때에 가구소득에 따른 미충족의료 경험의 격차가 완화될 수 있음을 확인했다. 이상의 분석을 통해 장애인은 비장애인에 비해 예방서비스에 대한 접근성이 낮은 것이 문제였고, 장애자체의 특성과 기타 만성질환의 보유가 동시에 이들의 의료이용에 영향을 미치는 것을 확인했다. 또한 장애인의 의료이용을 저해하는 요소에는 개인의 건강수준뿐만 아니라 주변사람들의 역할과 제반 사회 환경이 중요함을 파악할 수 있었다. 따라서 장애인의 적절한 보건의료 이용을 위해서는 이들의 예방차원 의료이용과 건강관리체계를 강화하고, 장애와 관련된 재활치료와 그 외 동반질환에 대한 치료가 통합적으로 이루어져야 하며, 적시의 보건의료 접근성을 높이기 위한 사회적 지지와 사회 환경이 뒷받침되어야 할 것이다.Ⅰ. 서 론 1 1. 연구의 필요성 1 2. 연구의 목적 5 Ⅱ. 문헌 고찰 6 1. 장애인, 장애인의 건강, 장애인 대상의 보건서비스연구 6 1) 장애인, 장애인 정책 6 2) 장애인의 건강문제 10 3) 장애인 대상의 보건서비스연구 11 2. 장애의 선택, 시작, 지속적 효과 12 3. 미충족의료와 장애인의 보건의료 이용 접근성 저해요인 14 1) 미충족의료의 개념 14 2) 장애인의 보건의료 이용 저해요인 16 4. 실증연구 고찰 18 1) 장애인의 보건의료 이용 관련 연구 18 2) 장애인의 미충족의료 경험과 관련된 선행연구 26 5. 문헌고찰의 시사점 34 Ⅲ. 연구모형과 방법 36 1. 연구모형 36 1) 장애의 정의 36 2) 연구모형 38 3) 분석 개요 41 2. 연구방법 44 1) 분석 Ⅰ. 장애인의 보건의료 이용에 관한 분석 44 2) 분석 Ⅱ. 장애인의 미충족의료 경험에 영향을 미치는 요인 53 Ⅳ. 장애인의 보건의료 이용에 관한 분석 59 1. 분석Ⅰ-1. 비장애인 대비 장애인의 보건의료 이용 특성 59 1) 일반적 특성 59 2) 비장애인과 장애인의 건강상태 비교 62 3) 비장애인과 장애인의 연간 의료이용량 비교 64 4) 장애보유가 의료이용에 미치는 영향 65 2. 분석Ⅰ-2. 장애인의 보건의료 이용에 영향을 미치는 요인 71 1) 분석대상 장애인의 일반적 특성 71 2) 장애인의 장애보유기간에 따른 의료이용량의 분포 73 3) 장애인의 의료이용에 영향을 미치는 요인 75 3. 고찰: 장애인의 보건의료 이용에 관한 분석 85 Ⅴ. 장애인의 미충족의료 경험에 영향을 미치는 요인 98 1. 분석결과 98 1) 미충족의료 경험 여부에 따른 장애인의 일반적 특성 비교 98 2) 장애인의 미충족의료 경험에 영향을 미치는 요인 102 2. 고찰: 장애인의 미충족의료 경험에 영향을 미치는 요인 109 Ⅵ. 결론과 제언 118 1. 이론적 함의 118 2. 정책적 함의 122 3. 방법론적 함의 125 4. 연구의 한계와 제언 125 129 Abstract 141Docto

Tissue-specific changes in mRNA expression of Abc and Slc transporters in murine pulmonary tuberculosis

A pulmonary tuberculosis mouse model was used to assess the pharmacodynamic and pharmacokinetic characteristics of tuberculosis therapeutics. While membrane transporters play important roles in drug disposition and physiological homeostasis, their expressional changes and contribution have never been analysed in a tuberculosis animal model. The mRNA expression level of 20 Abc family transporters and 32 Slc family transporters in tuberculosis-infected mice were compared with those in naïve uninfected mice using real-time polymerase chain reaction (PCR). Mycobacterium tuberculosis infection induced many dramatic expression changes of families of both Abc transporters and Slc transporters at 4 and 8 weeks, as observed in the livers, kidneys, and intestines of test mice--and in a different mode, in the lungs and spleens as well. These changes were dependent on the tuberculosis progression with the tissue-specific manner, that is, in the lungs, the number of transporters of which the expression level changed due to M. tuberculosis infection had increased, and the magnitude of change also greater at 8 weeks, while in the spleen, the transcription of most transporters except Mrps had not changed or had recovered back to the same level of naïve transcription at 8 weeks. Understanding the expression changes of transporters will assist in setting up rational preclinical dosing plans through the ability to predict the pharmacokinetics of new anti-tuberculosis chemotherapeutics and, furthermore, will assist in the design of safer and more efficient drug regimensope

Construction of Recombinant BCGs Overexpressing Antigen 85 Complex and Their Protective Efficacy against Mycobacterium tuberculosis Infection in a Mouse Model

Tuberculosis (TB) remains an enormous global health problem, and a new vaccine against TB more potent than the current inadequate BCG vaccine is urgently needed. We constructed three recombinant Mycobacterium bovis BCG (rBCG) strains over-expressing antigen (Ag) 85A, Ag85B, or both of M. tuberculosis using their own promoter and secretory sequence, or hsp60 promoter. SDS-PAGE analysis of rBCG proteins showed overexpression of Ag85A and Ag85B proteins in higher level than of those in their parental strain of BCG. In addition, rBCG(rBCG/B.FA) over-expressing Ag85A and Ag85B induced strong IFN-γ production in splenocytes. However, there was no significant difference in protective efficacy between rBCG and their parental BCG strain. In this study, therefore, rBCG over-expressing Ag85A, Ag85B, or both failed to show enhanced protection against M. tuberculosis infection in a mouse model.ope