Expression of TGF-β receptor in oral squamous cell carcinoma

치의학과/박사[한글] 상피세포는 상피성장인자와 억제인자의 균형에 의해 항상성이 유지된다. 따라서 두경부 및 구강 점막에서 발생하는 상피 암종의 발생기전은 성장인자와 억제인자의 불균형으로 설명될 수 있다. 발암과정에서 상피 성장인자로 알려진 epidermal growth factor(EGF)와 그 수용체의 역할에 대해서는 이미 잘 알려져 있다. 최근에는 암종이 발생하는 과정에 있어 transforming growth factor-β (TGF-β)에 의한 상피 세포 성장 억제 효과의 소실도 중요한 역할을 한다고 한다. TGF-β의 type I, type Ⅱ 수용체의 돌연변이가 TGF-β에 의한 상피 세포 성장 억제 기전의 하나로 생각되고 있지만, 두경부를 비롯한 암종에서 수용체 돌연변이 빈도가 높지 않고, 그 돌연변이와 TGF-β에 의한 in vitro 성장 억제 효과가 일치 하지 않아 TGF-β에 의한 성장 억제 효과 소실에 다른 기전이 있을 것으로 생각된다. 특히 세포의 증식과 apoptosis에 관련된 단백질의 protea- somal degradation에 의한 반감기 조절이 종양 형성 과정과 밀접한 연관이 있다고 알려져 있으나, TGF-β 수용체에 있어 그 역할은 잘 알려져 있지 않다. 본 연구에서는 두경부 점막에서 발생하는 다단계 암종 발생과정 중 TGF-β에 의한 세포 성장 억제 소실 기전을 파악하기 위하여 8예의 구강 편평 세포 암종 세포주를 대상으로 TGF-β에 의한 성장 억제 효과, 세포 주기 단백질 p21CIP1 발현을 검색하였고, 나아가 type I & Ⅱ TGF-β 수용체의 전사 조절과 전사 후 조절을 검색함으로서 TGF-β 수용체의 발현 조절 과정을 규명하고자 하였고, 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. YD-8을 제외한 다른 구강 암종 세포주에서 TGF-β에 의한 세포 성장 억제 효과를 보이지 않았다. 2. TGF-β에 의한 성장 억제 효과를 보였던 YD-8에서는 TGF-β 투여후 p21CIP1의 발현 증가를 관찰할 수 있었고, TGF-β에 의한 성장 억제 효과가 없었던 YD-9에서는 p21CIP1의 발현이 관찰되지 않았다. 3. Western blotting에서 TGF-β type I 수용체는 모든 세포주에서 발현되었으나 type Ⅱ 수용체는 모두 발현되지 않았다. 4. RT-PCR과 Northern blotting에서 대부분의 세포주에서 Type Ⅱ TGF-βreceptor mRNA 발현이 관찰되었고, YD-8과 YD-17M 세포주에서 가장 많 이 발현되었다. 5. Proteasomal degradation inhibitor인 MG132를 처리했을 때 Western blotting 상에서 시간에 의존적인 형태로 TGF-β type Ⅱ 수용체의 발현이 증가하였고, 이들은 분자량이 점차 증가하였다. 이상의 결과로 대부분의 구강 암종 세포주는 TGF-β에 의한 세포 성장 억제 효과를 상실하는 것으로 판단되며, 세포 성장 억제 효과를 보였던 세포주에서는 p21CIP1을 경유하는 세포 증식 주기 조절을 통하여 세포 성장 억제 효과를 보일 것으로 판단되었다. 또한 TGF-β type Ⅱ 수용체에 있어서 비교적 많은 mRNA 발현에도 불구하고 Western blotting상에서 단백질이 발현하지 않은 것은 proteasomal degradation에 의해 반감기가 매우 짧기 때문인 것으로 판단된다. 따라서 향후 종양 발생 과정에 있어 TGF-β에 의한 성장 억제 효과의 소실이 수용체의 돌연 변이 뿐만 아니라 proteasomal degradation 의한 반감기 조절도 기인할 것으로 생각되며, 종양 발생 과정에 있어 TGF-β 수용체의 proteasomal degradation에 의한 TGF-β에 의한 성장 억제 효과 소실 과정을 규명하는게 필요하리라 생각하였다. [영문]Epithelium maintains homeostasis by the signaling balance of growth stimulation and inhibition. Therefore, the developmental mechanism of carcinoma is explained as a imbalance of epithelial growth and inhibitory factors. It is well-known that the roles of epidermal growth factor(EGF) and its receptor during the development of cancer. Recently, loss of growth inhibitory effects of transforming growth factor-β(TGF-β) on epithelial cells is regarded as a possible mechanism of cancer. Although the genomic mutation in type I and type Ⅱ receptors of TGF-β is considered one of important mechanism of these inactivation, there might be another inactivation mechanism because the mutation rate is relatively low and inhibitory effect is not associated with the mutation. Especially, half-life controlled by proteasomal degradation is known to relate the proliferation and apoptosis of epithelial calls, its roles on TGF-β receptor are now well-known. In these background, the purpose of this study is evaluating controlling mechanism type I and type Ⅱ receptor of TGF-β by detecting effects of TGF-β on growth inhibition and on expression of cell cycle regulatory protein p21CIP1. Eight cancer cell lines derived from oral squamous cell carcinoma were used for this study. The results were as follows; 1. There was no growth inhibition effects by TGF-β except YD-8 cells. 2. YD-8 cells which showed growth inhibition expresses p21CIP1 by TGF-β whether refractory cell lines, YD-9, did not. 3. All of the tumor cells express type I receptor of TGF-β on western blot analysis whereas there was no detectable expression of type Ⅱreceptor. 4. All of the tumor cells express mRNA of type Ⅱ receptor by RT-PCR and northern blot analysis, especially on YD-8 and YD-17M. 5. The expression level of type Ⅱ receptor of TGF-β was gradually increased in time-dependent manner by the treatment of MG132, a specific proteasomal degradation inhibitor. From these results, most of oral cancer cell lines might loose the growth inhibitory effects by TGF-β, and the growth inhibition on YD-8 cells was mediated by expression of p21CIP1. The reasons of non-detectable level of protein expression of type Ⅱ receptor in spite of there was an expression of mRNA suggest the possibility of shortened half-life of the protein by proteasomal degradation, Further research on the roles of proteasomal degradation of TGF-β may delight the mechanism of loss of inhibitory effect by TGF-β.ope

Growth inhibition of oral cancer KB cell lines by paradol and its derivatives

치의학과/석사[한글] 자연계 화합물을 이용하여 종양 세포의 성장을 억제함으로써 두경부 종양 환자의 생존기간을 연장하고, 나아가 치료를 위한 연구가 활발히 진행되고 있다. 특히 두경부 영역은 전암병소가 관찰되는 다단계의 발암과정을 거치며 이러한 자연계 화합물은 두경부 영역의 전암병소, 즉 백반증 환자의 치료에도 사용 될 수 있을 것이다. 생강은 동양에서 염증, 류마티스 질환, 소화기 증상에 전통적인 약제로 사용되었다. 생강이 매운 맛이 나는 이유는 주성분 [6]-gingerol과 미량의 성분 [6]-paradol 때문이며, [6]-paradol은 cyclooxygenase, lipoxygenase활동을 방해하는 약리학적 효과를 갖고 있어 소염진통 효과를 나타낸다. 또한 HL-60 cell에서 apoptosis를 유도한다고 보고되어 있으나, 고형성 종양에서는 거의 연구되지 않았다. 그러므로 본 연구에서는 MTT assay, 유세포 분석, 전기영동을 통하여 생강의 보조 성분인 [6]-paradol과 그 유도체 [3]-paradol, [10]-paradol, [3]-dehydroparadol, [6]-dehydroparadol, [10]-dehydroparadol의 고형성 구강 암종 세포주인 KB의 성장억제효과와 apoptosis 유도 효과를 검색함으로써 [6]-paradol과 그 유도체들이 field cancerization에 의해 발생된 광범위한 전암병소의 발암을 억제하는 효과와 함께 이미 발생된 일차 암종의 재발과 전이를 막을 수 있는 약제로 사용될 가능성을 탐색하고자 하였다. 연구 결과는 아래와 같다. 1. [6]-paradol과 그 유도체중 [3]-paradol를 제외한 모든 약제는 200 μM 이하의 농도에서 명확한 KB 세포주의 성장 억제 효과를 보였다. 2. [6]-paradol의 IC^^50는 123.8 μM이었고, 유도체중 종양 세포 증식 억제 효과가 가장 뛰어난 것은 [6]-dehydroparadol과 [3]-dehydroparadol이었고 IC^^50는 각각 51.1 μM, 52.6 μM이었다. 3. 100 μM의 [6]-dehydroparadol을 투여하고 유세포 분석하였을 때 2시간 이후에는 Srl 분획이 감소하였으며, 4시간 이후부터 명확한 핵분절화가 관찰되었고 8시간 이후의 핵분절화 지수는 44.73%, 24시간 이후에는 45.49%이었다. 4. 75 μM의 [6]-dehydroparadol을 투여 후 DNA를 전기 영동하였을 때 12시간 이후부터 명확한 사다리꼴의 (ladder) 핵분절화가 관찰되어 [6]-dehydroparadol이 구강 암종 세포주의 apoptosis를 유도함을 알 수 있었다. 이상의 결과로 생강의 보조 성분인 [6]-paradol과 그 유도체가 구강 암종 세포주의 apoptosis를 유도함으로써 성장을 억제함을 알 수 있었다. 특히 [6]-dehydroparadol과 [3]-dehydroparadol의 효과가 가장 우수하여 이들의 생체 독성 실험과 생체에서의 종양 세포 억제 효과가 증명된다면 부작용 없는 화합물을 장기간 복용함으로써 초기 암종 환자의 치료와 일차 수술후의 재발 방지, 나아가 증진단계 이후의 전암 병소 환자를 위한 화학 요법제로 개발 될 수 있을 것으로 사료된다. [영문] Ginger has been used as oriental traditional medication for the treatment of inflammation, rhuematic diseases, and gastrointestinal disorders. The pungent taste of ginger is due to the major component of [6]-gingerol and the minor component of [6]-paradol. [6]-Paradol has pharmacological effect of inhibition of cycloxygenase and lipoxygenase activities. Also [6]-paradol was reported to induce apoptosis of HL-60 cell, however, little study has been reported on solid tumor. The purpose of this study is to find out whether [6]-paradol of its derivatives could be used for the medication to prevent the recurrence of primary tumors and to inhibit the metastasis of the lesions. Growth inhibition effect and apoptosis inducing effect of minor component [6]-paradol on KB cell lines of solid tumors have been observed by performing MTT assay, flowcytometric analysis, and gel electrophoresis. The results of the study are as follows: 1. [6]-paradol and its derivatives except [3]-paradol were observed to be effective in growth inhibition of KB cell lines, which inhibited KB cell growth below 200 μM concentrations. 2. IC^^50 of [6]-paradol was 123.8 μM, and the strongest effect was observed by [6]-dehydroparadol and [3]-dehydroparadol, of which IC^^50 were under 51.1 μM, 52.6 μM respectively. 3. After the administration of 100 μM [6]-dehydroparadol, 5 phase fraction was reduced after 2 hrs. Nuclear fragmentation index began to increase at 4hrs and remarkably inclined to be 44.73% after 8 hrs, and 45.49% after 24 hrs. 4. The administration of [6]-dehydroparadol under 75 μM concentration revealed definite DNA ladder patters by agar gel electrophoresis after 12hrs, supporting that [6]-dehydroparadol may induce the apoptosis of KB cell lines. In conclusion, [6]-paradol and its derivatives, the minor component of ginger, were found to inhibit the growth of the oral cancer cell lines by inducing the apoptosis. Especially [6]-dehydroparadol and [3]-dehydroparadol were observed to have the strongest effect. Therefore, [6]-dehydroparadol and [3]-dehydroparadol seem to have the high potential to be used as one of the candidate medications for the chemoprevention of the patients with later progression stage, and the treatment of primary tumor and the preventive medication for the patients after primary resection surgery after the long-term clinical toxicity study and the tumor cell-inhibition study.ope

Landon Ronald의 연가곡 'A cycle of life' 연구 분석

학위논문 (석사)-- 서울대학교 대학원 : 음악과, 2012. 2. 강병운.본 논문은 Landon Ronald(1873-1938)의 연가곡 를 연구, 분석한 것이다. 랜던 로날드는 O Lovely Night와 Down in the Forest 등 300여 곡의 가곡을 남긴 작곡가이면서도 작곡가라기보다는 지휘자와 반주자, 레코딩의 개척자로 더 잘 알려져 있다. 영국가곡은 유럽 국가들의 가곡 양식에 많은 영향을 받았으면서도 그들의 가곡보다 상당히 보수적 성향을 띄고 있다. 이러한 음악적 특성을 지닌 영국가곡의 역사가운데 랜던 로날드는 19세기 당시 낭만주의 사조와 20세기 현대음악의 일관적 특성에 싫증을 느끼던 영국 대중들에게 큰 호응을 준 작곡가이다. A Cycle of Life는 5개의 연가곡으로 인생과 사랑에 관한 주제를 사계절에 비유한 Harold Simpson의 시를 가사로 하고 있다. 제1곡 Prelude는 4/4, G Major, A-B-A′, Coda로 이루어져 있으며 이곡 전체의 주제를 다루고 있다. 제2곡 Down in the Forest (spring)는 4/4박자의 D Major, A-B-A′로 이루어져 있다. 반주의 여린 표현이 인생의 첫 시작, 사랑과 설레임을 표현하고 있다. 확대종지와 불완전 정격종지를 사용하여 봄의 여운을 남기고 있다. 제3곡 Love, I have won you (summer)는 9/8박자의 F Major, A-A′-A″로 이루어져 있다. 전체 곡 중에서 가장 빠르며 인생의 절정기를 표현하고 있다. Gr.6(german6th)의 변화화음과 음과 음 사이에 ?(Fermata)를 특징적으로 사용하고 있고 인생의 절정기를 fff로 마무리하고 있다. 제4곡 The winds are calling (autumn)의 처음 4마디 전주는 이곡 전체 성격과 다른 4/4의 독립적 악곡 구성이다. 이후 6/8 e miner, 확대된 A-A′로 이루어져 있다. 동일한 움직임의 가락에 반복되는 I〬 와 ⅳ〬 화음으로 인생의 황혼기를 가을의 쓸쓸함에 비유하고 있다. 5곡 Drift down, drift down (winter)는 2/2, G Major, A-B-A′로 삶의 마지막을 평화스런 겨울로 비유하고 있다. 곡 전체를 도약 하행 진행의 선율로 눈이 내리는 현상을 소리화 하였다. 학 번: 2008-21852Maste

Realization of Photo-Patterned Oxide Thin Film Transistors with Printed Ion-Gel Gate Dielectrics: Improving Performance with Enhanced Interfacial Properties

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