TRAIL-induced caspase/p38 activation is responsible for the increased catalytic and invasive activities of Akt

We previously observed that TRAIL induces acquired TRAIL resistance coinciding with increased Akt phosphorylation brought about by the Src-PI3K-Akt signaling pathways and mediated by c-Cbl. c-Cbl, a ubiquitously expressed cytoplasmic adaptor protein, is simultaneously involved in the rapid degradation of TRAIL receptors and Akt phosphorylation during TRAIL treatment. Here, we show that Akt phosphorylation is not exclusively responsible for acquired TRAIL resistance. Akt catalytic activation is known to increase during metabolic oxidative stress, but we show that TRAIL also dramatically induces the catalytic activation of Akt in TRAIL-sensitive cells, but not in TRAIL-resistant cells. This suggests that Akt catalytic activation during TRAIL-induced apoptosis is likely to play a compensatory role in the maintenance of cell homeostasis. In addition, activated p38 and phosphorylated HSP27 were found to act as downstream effector molecules of p38 during TRAIL treatment and were shown to be responsible for increased Akt catalytic and invasive activitiesope

MEKK1/MEKK4 are responsible for TRAIL-induced JNK/p38 phosphorylation

The tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) has been shown to activate mitogen-activated protein kinases (MAPKs) depending on caspase and mammalian sterile 20-like kinase 1 activations. However, the upstream molecule of MAPKs has not yet been identified. The mitogen-activated protein kinase kinase 1 (MEKK1) and the apoptosis signal-regulating kinase 1 (ASK1) are considered to be possible candidates for the action of MAPKKKs induced by TRAIL and the possibility of reactive oxygen species involvement has also been investigated. We found that MEKK1/MEKK4 as opposed to ASK1, are responsible for TRAIL-induced c-Jun NH2-terminal kinase (JNK) or p38 activation, and that their catalytic activity is repressed by the caspase-8 inhibitor, suggesting that the caspase-8 activation induced by TRAIL is indispensible for MEKK activation. The 14-3-3 θ was also shown to interact with and to dissociate from MEKK1 by TRAIL treatment, thus implicating the 14-3-3 protein as a negative regulator of MEKK1 activation. Taken together, we show herein that the upstream molecule of the TRAIL-induced MAPK activation is MEKK, as opposed to ASK1, via the mediation of its signal through JNK/p38 in a caspase-8-dependent manner.ope

Anti-tumor effects of oncolytic adenovirus expressing shRNA of TGF-β1

의과학과/석사암은 체내에서 면역세포를 피해 증식해 나가기 위하여 다양한 종류의 싸이토카인을 분비한다. 그 중에서 TGF-β1은 정상세포와 암세포에서 상반되는 역할로 주목받고 있다. TGF-β1은 정상세포에서 발현될 때에는 세포의 성장을 억제하는 물질이지만 암세포에서는 면역회피를 유도함으로 암의 진행을 돕는다고 알려져 있다. TGF-β1은 암세포에서의 역할이 변화한 것뿐만 아니라 과발현함으로 암세포가 효과적으로 면역세포를 피해 성장할 수 있도록 한다. 따라서 본 연구는 TGF-β1의 발현 억제시 항 종양 효과에 미치는 영향을 규명하고자 계획 하였고 TGF-β1의 발현을 억제하는 방법으로 shRNA를 탑재한 종양 선택적 살상 아데노바이러스를 이용하였다.RNA interference는 짧은 가닥의 RNA가 상보적으로 결합하는 mRNA를 분해시킴으로 그 mRNA의 발현을 억제하는 현상을 나타낸다. 이러한 현상은 체내로 유입된 shRNA가 Dicer에 의해 siRNA가 되고 RISC와 결합하여 mRNA를 분해하는 방식으로 일어난다. 이러한 기작을 바탕으로 TGF-β1의 발현을 억제하기 위해서 shRNA을 제작하여 아데노바이러스에 삽입하여 이용하였다.암 유전자 치료 연구의 초기에는 증식불능 아데노바이러스를 주로 이용하였으나 감염된 세포에서만 치료 유전자가 발현되기 때문에 그 효과가 제한적이고 일시적이어서 지속적인 효과를 보기에 미흡하다는 단점이 있었다. 따라서 이러한 단점을 극복하기 위하여 본 연구에서는 암 세포에서만 복제가능한 바이러스를 이용하여 효과적인 암세포 특이적 살상효과를 얻고자 하였다. 이러한 배경하에 본 연구에서는 survivin의 발현양이 높은 암세포에서 특이적으로 복제 가능한 아데노바이러스에 shTGF-β1 염기서열을 삽입하여 아데노바이러스 자체에 의한 항 세포살상 효과뿐만 아니라 암세포내에서 면역회피를 유도하는 TGF-β1의 발현을 억제하여 종양세포에 대한 숙주의 면역반응을 증강시키고자 하였다. 하지만 아데노바이러스는 사람을 숙주로 하는 바이러스이기 때문에 마우스 세포에 감염이 잘 되지 않는 단점이 있다. 따라서 사람의 암세포를 마우스에 이식하여 암세포가 마우스의 면역반응에 의해 소멸되지 않도록 마우스에 면역억제제를 일정기간 처리한 후 실험을 진행하였다. 실험결과는 다음과 같다. 먼저 shRNA에 의한 TGF-β1 mRNA의 감소여부를 real-time PCR로 확인해 본 결과 TGF-β1의 mRNA양이 크게 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 또한 TGF-β1의 단백질 역시 mRNA의 결과와 비례하게 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 그리고 TGF-β1을 억제하는 효과가 검증된 shRNA를 증식 가능한 아데노바이러스에 삽입하였다. 이후 재조합 아데노바이러스의 종양선택적 살상능을 확인하기 위한 in vitro 실험에서 TGF-β1이 감소됨에 따라 세포 살상능이 증가되는 것을 관찰할 수 있었으며, 제작된 종양선택적 살상 및 증식 가능 TGF-β1을 감소시키는 shRNA를 발현하는 아데노바이러스는 동물실험에서 바이러스 감염 초기에는 항 종양 효과가 있었지만 점차 종양이 감소하는 효과가 줄어드는 것을 관찰하였다. 하지만 이러한 결과는 조직면역화학염색를 통하여 그 효과가 약화되는 것이 아니라 실제는 종양이 사라진 자리에 면역세포가 침윤되어있는 결과라는 것을 확인 할 수 있었다. 이러한 결과를 더욱 효과적으로 검증하기 위해서는 새로운 동물모델을 구축해야 할 것으로 생각되며 in vitro 에서 TGF-β1의 발현을 억제할 경우 시간이 지날수록 TGF-β3의 발현이 증가한 것으로 미루어 보아 새로운 동물모델을 사용할 경우 TGF-β3를 TGF-β1과 함께 억제할 경우 항 종양효과가 더 증가될 것이라고 생각한다.restrictio

관상동맥 질환자의 건강 행위와 가족 지지의 관계에 대한 조사연구

학위논문(석사)--서울대학교 대학원 :간호학과 간호학전공,2001.Maste