폴리에스터-토너 마이크로 유체칩을 이용한 칩 상에서의 혈장에 있는 심장질환 생체지표 면역분석법

학위논문 (석사)-- 서울대학교 대학원 : 화학부, 2013. 2. 정두수.An on-line immunoassay to detect C-reactive protein (CRP) was performed using a polyester-toner (PT) microfluidic device. CRP is a highly conserved plasma protein responding to inflammation and is used for clinical purposes to diagnose an inflammatory state. For rapid analysis and specific interactions in immunoassays, extensive studies using microfluidic chips have been carried out. Recently, a simple technique to fabricate a disposable PT microchip based on a direct printing process was developed and several applications were introduced. One major drawback of the PT microchip, however, is the poor separation performance due to the quality of the microfluidic structures. This problem for a PT microchip can be overcome using a cleavable tag immunoassay, which requires minimal separation performance. After analytes are conjugated onto antibodies which are immobilized on the surface of microbeads placed on the PT microchip, a second group of fluorescently tagged antibodies is added and complexed with the analytes. The tag is then cleaved and the solution containing the cleaved tag is analyzed by electrophoresis. The time needed for the complete analysis to be carried out on a PT microchip was less than 35 min. The dynamic range of the CRP in 10-fold diluted serum was 0.3 to 20 mg/L and the limit of detection was about 0.3 mg/L, which demonstrated the possibility of a quantitative analysis of CRP in serum in clinical trials.CONTENTS ABSTRACT i CONTENTS iii LIST OF FIGURES v LIST OF TABLES vi 1. INTRODUCTION 1 2. EXPERIMENTAL 3 2.1 Materials and reagents 3 2.2 Synthesis of the labeled detection antibody 4 2.3 Immobilization of the capture antibody onto silica microbeads 5 2.4 PT microchip fabrication 6 2.5 Sandwich immunoassay of CRP 9 3. RESULT AND DISCUSSION 14 3.1 Characteristics of a PT microchip 14 3.2 Analytical performance of the on-chip sandwich immunoassay 14 3.3 On-chip sandwich immunoassays in human serum samples 23 4. CONCLUSIONS 26 REFERENCES 27 ABSTRACT IN KOREAN 30Maste

Functional and Structural Studies of Nm23-H1 as a Tumor Metastasis Suppressor

Nucleoside diphosphate kinase (NDPK, Nm23), known as a tumor metastasis suppressor, is considered a housekeeping enzyme catalyzing transfer of terminal phosphate from nucleoside triphosphate (NTP) to nucleoside diphosphate (NDP). Nm23 has been implicated as a multi- functional protein involved in cellular differentiation and development as oncogenesis and tumor metastasis. Recently, Nm23 has been reported to regulate Rac1 activation negatively. However, the regulatory mechanism of Nm23 is poorly understood. In previous study, we found that enzymatic activity of Nm23 is damaged by oxidation in cysteine residues and repaired by NADPH-thioredoxin reductase-thioredoxin system. Here I have demonstrated that Nm23-H1 down-regulates Rac1 activation, reduces ROS generation dependent of NDP kinase activity and inhibits JNK activation and cell migration. Since it was reported that Rac activation induces activation of JNK and ROS derived Rac activation are able to increase tumor metastasis, the reduced Rac activation, ROS generation and JNK activation by Nm23-H1 may be one of the mechanism to explain the metastasis-suppressive effect of Nm23-H1. Cellular modifications of Nm23-H1 by oxidative stress were identified using mass spectrometry. It will give us the clues on understanding the regulatory mechanism of Nm23-H1 in various biological processes.;암전이 억제 단백질로 알려진 Nucleoside diphosphate kinase (NDPK, Nm23)는 세포 내에서nucleoside triphosphate (NTP)의 말단 인산기를 nucleoside diphosphate (NDP)로 이동시켜 주는 효소의 기능도 하고 있다. 최근 들어 Nm23이 NDP kinase 기능 이외에도 암 생성과 전이와 같은 세포 분화와 발달에 관여한다는 연구 결과가 발표되면서 다기능 단백질로 생각되고 있다. 그러나 Nm23의 조절 기전에 대해서는 자세히 밝혀져 있지 않다. 이전 연구에서 우리는 Nm23의 NDP kinase기능이 cysteine 잔기의 산화에 의해서 파괴되고, NADPH-thioredoxin reductase-thioredoxin system 에 의해 환원됨으로써 회복되는 것을 알게 되었다. 이를 바탕으로 세포 내 산화-환원 상태에 따른 Nm23-H1 의 기능 조절을 연구하는 과정에서 Nm23-H1이 Rac의 활성화를 저해하는 것을 확인하였다. 또한 confocal microscopy를 통해 Nm23-H1 이 세포 내 ROS 생성을 억제하는 것을 확인하였고 이 때 Nm23-H1의 NDP kinase 기능이 필수적임을 알 수 있었다. Nm23-H1 의 과발현이MAPK 신호에 영향을 주는지 알아보는 과정에서 Nm23-H1이JNK 활성화를 지연시키는 것을 보았고 세포의 이동을 억제하는 것을 확인하였다. Rac이 ROS와 JNK신호를 통해 세포의 전이를 증가시키는 것은 이미 밝혀져 있다. 그러므로 본 연구에서 확인된 결과를 통해Nm23-H1이 암전이 억제 단백질로 작용하는 기전을 설명할 수 있을 것이다. 또한 nano-liquid chromatography가 부착된 ESI-q-TOF tandem MS를 이용하여 산화적 스트레스에 의한 세포 내Nm23-H1의 modification 변화를 살펴보았다. 이 결과는 다양한 생명 현상 속에서Nm23-H1이 조절되는 기전을 이해하는 단서를 제공해 준다. 발견된 modification이 세포 내 생명 현상 조절에 어떻게 작용하고 있는지에 대해서 mutant를 이용한 더 많은 연구가 이루어져야 될 것이다.1. INTRODUCTION = 1 2. MATERIALS & METHODS = 7 2.1. Materials & Instruments = 7 2.2. Cell Cultures = 8 2.3. Transient Transfection = 8 2.4. Immunoblotting = 9 2.5. Immunoprecipitation = 10 2.6. Rac Activation Assay (PBD Assay) = 11 2.7. Measurement of Intracellular ROS = 11 2.8. Two-dimensional Gel Electrophoresis = 12 2.9. In vitro Cell Migration Assay = 13 2.10. In-gel Digestion & Mass Spectrometric Analysis of Proteins = 13 3. RESULTS = 15 3.1. Nm23-H1 down-regulates Rac and this function is involved NDP kinase enzymatic activity = 15 3.2. Nm23-H1 reduces ROS generation depedent on NDP kinase activity = 20 3.3. Alteration of kinetics in MAP kinase activation by Nm23-H1 under heat shock = 20 3.4. Nm23-H1 inhibits cell migration = 21 3.5. Heat shock-induced ROS has little effects on cellular Nm23-H1 and Nm23-H1 H118F in HEK 293T cells = 26 3.6. Cellular oxidative modification of Nm23-H1 in response to heat shock-induced ROS = 37 3.7. Identification of cellular oxidative modification of Nm23-H1 exposed to hydrogen peroxide = 44 4. DISCUSSION = 54 5. REFERENCES = 57 논문개요 (한글) = 6

(The) Teaching method of Pansori Novel

판소리 소설은 중요한 문학장르이면서도 문학교육 연구가들의 이에 대한 인식 부족과 교육적 의미의 필요성을 절실히 느끼지 않는 데에서 실제 교육현자에서의 판소리 소설 문학 교육은 거의 이루어지지 않고 있다. 이에 본 논문은 판소리 소설의 교육적 가치와 실상을 살펴보고 효과적인 작품지도를 위해 수업시 문제가 될 수 있는 사항들을 논의하여 바람직한 접근 방법을 제시해 보고자 하였다. 산문 문학에서도 판소리 소설은 우리의 고전 가운데에서도 가장 대중적이며 조선 후기의 민중 문학이었다. 18세기 이후에는 민중문학의 전반적인 추세에 앞장서서 국문학의 중심적인 위치로까지 부각되었다. 이러한 판소리 소설에 관한 연구는 많은 학자들에 의해 비교적 활발하게 연구되어 학문적 위상을 갖추게 되었다. 이와같이 판소리 소설이 문학사적으로 중요한 의의를 지니고 있으므로 당연히 문학교육적 측면에서도 그 가치가 크다. 따라서 본 논문에서는 판소리 소설을 학교 수업현장에서 지도할 때 어떤 각도에서 어떤 목표를 가지고 지도해야 할 것인지에 대한 과학적이고 체계적인 시도를 해 보았다. 먼저 판쇠 소설 지도시 수용자인 학습자에게 주체적인 역할을 맡기는 학습자 중심의 지도에서 교사의 역할이 얼마나 중요한가를 인식해야 한다. 교사는 그 자신이 먼저 작품의 수용자인 고급 독자가 되어야 하며 수용자 역할의 단계를 거쳐 중개자로서 학생의 문학 수용에 참여해야 한다. 이때 너무 인지적인 요소를 강조하다 보면 뛰어난 문학성을 간과하기 쉬운데 수용자인 학습자에게 주체적인 역할을 맡기는 학습자 중심의 지도가 필요하다. 본고에서는 학습자 중심의 교육을 위하여 판소리 교육의 실태를 먼저 살펴 보았다. 교과서의 실태를 살펴봄으로써 교과서에 실린 판소리 소설의 작품이 다양하게 수록되지 못했음을 알 수 있고 그 내용조차 중복되는 현상을 발견하였다. 이러한 실태를 기초로 판소리 소설 교육의 수업모형을 살펴보았다. 또한 판소리 소설 수업 지도시의 파생될 수 있는 중점적인 지도사항이 되고 있는 장르의 복합성, 한의 정서, 표현의 해학성, 해석의 다양성 문제를 중심으로 구체적인 작품을 대상으로 하여 그것들이 지니는 교육의 의의를 규명하여 보았다. 따라서 판소리 소설 지도방안 탐색은 실천적인 측면에서 세부적인 교수-학습 모형을 적용하여 학습자의 작품 수용을 효과적으로 매개하는 데 초점을 맞추어야 한다. 본 연구는 판소리 소설의 교육적 가치와 실상을 보다 구체적으로 이해함으로써 장르별 문학수업 지도방안 확립과 판소리 소설의 교육적 연구를 시도했다는 데 의의가 있다고 본다.;The object of this study is studying of education for classic literature & effdctive teaching guide for Pansori Novel. As a view of teacher, I stuidied desirable approching method after selection & discussing the process of discussion is as below. In chapter Ⅱ, I studied concept of classic literature & educational meaing of Pansori novel. This thesis is intended to present a recommendable approach to the instrucing in Pansori novel by screening its edcational value and the present educational condision, and by discussion the possible difficulties for instruction in Pansori novel to give lessons in Pansori novel works effectively In chapter Ⅲ, I studied Literary & educational position of Pansori novel and have stipulated position with the focus of high value in Korean literature & the subject in that literature. Also I selected stressed-recognition articles which mau derive from the lessons of feeling of grudge imagenation In chapter Ⅳ, I treated the issue of chapter Ⅲ more concretely, as issue of imagenation, I studied it in arts with actual pattern of educational guide and stipulated educational meaing of diversity in understanding, feeling of grudge. In this paper, I stipulated the character of unclarified prats article bu article which terachers Mau recognize it in actual lessons and I spreaded discussion in the status of no such studying materials for educational guide of Pansori novels. This paper has a meaning in trying educational guide of literatre genre by genre to ponsori novel.목차 = ⅳ 論文槪要 = ⅵ Ⅰ. 서론 = 1 Ⅱ. 판소리계 소설의 본질과 교육적 의의 = 4 A. 판소리계 소설의 본질 = 4 B. 판소리계 소설의 교육적 의의 = 33 Ⅲ. 판소리계 소설의 교육현황 = 36 A. 교과서 수록 작품의 분석 = 36 B. 교육과정에서의 현황 = 42 C. 평가 내용 측면 = 51 Ⅳ. 판소리계 소설 교육의 방향 = 57 A. 수업모형 설계 = 57 B. 판소리계 소설 교육에서의 수업모형의 적용 = 63 C. 판소리계 소설의 중점 지도 사항 = 65 D. 지도상의 문제점 및 개선 방향 = 71 Ⅴ. 결론 = 75 參考文獻 = 78 ABSTRACT = 8

Influence of working memory and syntactic complexity to the sentence listening comprehension in elderly

언어병리학 협동과정/석사본 연구는 작업기억과 통사적 복잡성이 노년층의 문장듣기이해에 미치는 영향을 파악하는 것을 목적으로 수행되었다. 이를 위해 실험군인 노년층 30명과 대조군인 청년층 30명을 대상으로 작업기억과제와 문장이해과제를 실시하였다. 여기서 작업기억과제로는 ‘숫자 거꾸로 따라말하기’와 ‘단어 거꾸로 따라말하기’를 실시하였고, 수행력 결과의 중위수를 기준으로 노년층 및 청년층 모두에서 각각 두 집단(낮음, 높음)으로 나누었다. 문장이해과제로는 통사적 복잡성과 관련된 변인으로서 능동문과 피동문 등 두 문장 유형을 활용하였다. 과제 실시 후, 연령군(노년층, 청년층), 작업기억(낮음, 높음), 통사적 복잡성(능동, 피동)을 포함한 세 가지 변인에 따라 문장이해과제 수행의 정반응률과 반응시간을 분석하였다.연구 결과, 정반응률 측면에서는 낮은 작업기억을 보인 노년층이 피동문에서 가장 낮은 수행력을 보였다. 높은 작업기억을 가진 노년층에서는 능동문과 피동문의 차이가 없었다. 반면에, 반응시간 측면에서는 노년층의 반응시간이 느리고, 피동문의 반응시간이 느렸으나, 작업기억수행의 높낮음에 따라서는 차이가 없었다.낮은 작업기억을 가진 노년층은 피동문을 이해할 때 처리할 수 있는 작업기억 용량이 작고 처리 효율성이 낮아 정반응률이 저조하다고 볼 수 있다. 그러나 반응시간 측면에서 작업기억의 높낮음이 영향을 미치지 않은 이유는 본 연구의 과제 길이(3어절)가 수행력을 민감하게 측정하지 못했기 때문이라고 해석할 수 있다.본 연구를 통해 노년층의 작업기억의 높낮음이 피동문 내에서의 수행 차이를 설명해주는 변인임을 확인하였다. 또한 노년층의 작업기억능력에 따른 처리 속도를 보기 위해서는 통사적 복잡성과 더불어 문장의 길이를 고려해야 함을 확인하였다.ope