Differential scanning calorimetry 를 이용한 임시 고정성 보철 수복 레진의 발열 반응 평가

서론; 이 논문의 목적은 Differential scanning calorimetry를 이용해 polymer-based provisional material의 발열 반응을 측정하고, 종류가 다른 8가지의 임시 고정성 보철 수복용 레진의 차이를 비교하는데 있다. 연구 재료 및 방법; 세 가지의 dimethacrylate-based materials (Protemp 2 Garant, Luxatemp, Luxatemp fluorescence) 과 다섯 가지의 monomethacrylate- based material (Snap, Alike, Unifast trad, Duralay, Jet)이 선택되었다. 중합 반응 동안의 열변화를 D.S.C Q-1000 ( TA Instrument, Wilmington, DE, USA)을 이용하여 측정하였다. 구강 내의 온도와 유사하기 위해 37℃에서 10분간 등온상태를 유지하였다. Powder와 liquid는 제조자의 지시에 따라 혼합하였으며, 모든 실험의 혼합시간은 30초 이내로 하였다. 시간에 따른 온도변화 곡선을 통해 다음과 같은 세 가지 항목을 조사하였다. (1) 중합 반응 동안의 최고 온도 (2) 중합 반응 시작 후 최고 온도에 도달하는데 걸리는 시간 (3) 열 용량( heat capacity). 8가지 재료 차이의 평가는 95% 신뢰수준에서 각각의 평균값을 구하고one-way ANOVA와multiple comparison Bonferroni test를 통해 실험 재료간의 차이를 분석하였다 실험 결과; 각각의 중합 반응 동안의 최고 온도는 다음과 같다. :Duralay (41.1) >Unifast trad (40.5) ,Alike (40.5) > Jet (39.6) > Luxatemp plus (38.9), Protemp 3 Garant (38.7) , Snap (38.6), Luxatemp fluorescence (38.4). Monomethacrylate의 평균 peak temperature는 평균40.0℃ (± 0.9)이고, Dimethacrylate는 평균 38.6℃ (± 0.3)이다. 각각의 실험 재료에 따른 최고 중합 온도에 도달하는 시간은 다음과 같다.: Snap (177.9) , Jet (175.1) > Duralay (157.9)> Alike (98.2) > Unifast trad (79.7) > Luxatemp plus (27.5), Protemp 3 Garant (25.7) , Luxatemp fluorescence (25.6). ). Monomethacrylate의 최고 중합 온도에 도달하는 시간은 평균137.8 sec (±42.4)이고, Dimethacrylate의 최고 중합 온도에 도달하는 시간은 평균 26.3 sec (± 2.8)이다. 각각의 열용량 평균은 다음과 같다.: Duralay (414.9) > Trad (40.5) , Jet (383.7) , Alike (335.9) > Snap (220.3), Luxatemp fluorescence (187.6), Protemp 3 Garant (187.5) , Luxatemp plus (176.9). Monomethacrylate의 열용량은 평균350.9 J/g (± 83.9)이고, Dimethacrylate의 열용량은 평균181.0 J/g (± 29.8)이다. 결론; D.S.C.는 임시 고정성 보철 수복 레진의 중합 반응 동안의 열변화를 관찰하는데 유용한 방법이다. 또한 이것을 이용한 열 용량의 평가는 다른 방법과 다른 특징적인 것이다. D.S.C.는 실험 재료의 중합 반응 동안 reference sample pan의 온도와 sample pan의 온도를 일정한 상태로 유지시키는데 이 때 유입되거나 유출되는 열을 측정하여 분석한다. Peak temperature는Monomethacrylate 가 Dimethacrylate 보다 통계학적으로 유의할 만큼 높다. PMMA의 중합 반응 동안의 최고 온도는 다른 종류 ( PEMA, Dimethacrylate)에 비해 통계학적으로 크다(P <0.05). 반면, PEMA (Snap) 와Dimethacrylate사이는 통계학적으로 유의 할만한 차이를 보이지 않는다.(P >0.05). 최고 중합 온도에 이르는 시간은 Monomethacrylate 가 Dimethacrylate보다 더 길고, PEMA (Snap)>PMMA > Dimethacrylate 순이다. 열용량은 Monomethacrylate 가 Dimethacrylate보다 더 크다. PMMA가 통계학적으로 가장 크고, PEMA (Snap) 와 Dimethacrylate 의 차이는 보이지 않는다. (P >0.05).CONTENTS Ⅰ. INTRODUCTION = 1 Ⅱ. MATERIAL AND METHODS = 3 Ⅲ. RESULTS = 5 Ⅲ-1. Peak temperature = 6 Ⅲ-2. Time to peak temperature = 8 Ⅲ-3. Heat capacity = 10 Ⅳ. DISCUSSION = 12 Ⅴ. CONCLUSION = 17 REFRENCES 18 Appendix 21 ABSTRACT (Korean) 3

Regulation of collapsin response mediator protein-2 cleavage in ischemia-induced PC12 cells

Focal cerebral ischemia results in irreversible damages in infarcted area and the brain damage in ischemic stroke can be attributed to neuronal cell death resulting from an insufficient supply of glucose and oxygen to brain tissue. In previous study, we found that the expression of collapsin response mediator protein (CRMP)-2 was altered in focal ischemic rat brain tissues. CRMP-2 has been identified as an intracellular protein which is activated by a repulsive guidance molecule, Semaphorin 3A and plays an important role in axonal growth and guidance in the nervous system, but its role in ischemia has not been addressed. In the present study, we studied whether the CRMP-2 expression is also altered in vitro ischemia (oxygen-glucose deprived anoxic condition)-induced pheochromocytoma (PC12) cells, and its regulation were examined. Similar to the observation in ischemic rat brain, the expression level of the major 62 kDa CRMP-2 protein appeared at the highest level in normoxic condition was gradually diminished according to the ischemic duration, whereas the 58 kDa CRMP-2 protein assumed as a cleaved product was newly detected in ischemic condition. Cells treated with H₂O₂ at high concentration which induces poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) cleavage did not induce the 58 kDa CRMP-2 expression, indicating that the 58 kDa CRMP-2 expression is independent of caspase-3 activation. The formation of 58 kDa CRMP-2 in ischemic condition was inhibited by treating cells with extracellular Ca^(2+) chelator, EGTA, and non-selective voltage-gated Ca^(2+) channels (VGCCs) blocker, Cd^(2+), showing that extraceullar Ca2+ entrance through VGCCs is important in the 58 kDa CRMP-2 formation. To confirm the importance of extracellular Ca^(2+) entrance, we treated A23187, a calcium ionophore. A23187 treatment accelerated the change of CRMP-2 expression in ischemic condition and we observed that only A23187 treatment in normoxic condition without ischemic insults could induce the 58 kDa CRMP-2 indicating that Ca^(2+)-dependent pathways importantly regulate the 58 kDa CRMP-2 formation. We also observed that the CRMP-2 expression in ischemic condition was prevented by calpain inhibitor but not by caspase inhibitor confirming again that caspase activation is not a regulating factor in CRMP-2 cleavage and Ca2+ is a major contributor in CRMP-2 cleavage because calpain activity depends on intracellular Ca^(2+) concentration. Moreover, in vitro digestion of CRMP-2 in cell lysate with μ-calpain showed a cleavage form identical to that observed in ischemic cells and it was blocked by a calpain inhibitor, calpeptin. These results provide a potential evidence that calpain could directly cleave CRMP-2 in ischemic condition. We investigated the relationship of 58 kDa CRMP-2 with cell viability by MTT assay and flow cytometry. Cell viability was decreased by increasing ischemic duration, and the flow cytometry experiment using dyes detecting necrosis or apoptosis showed that most of ischemic cells appeared necrotic cell death. Although treatment of EGTA completely blocked CRMP-2 cleavage in ischemic condition, cell viability measured by MTT assay and flow cytometry analysis was not changed. In the present studies, we showed the importance of Ca^(2+) in regulating CRMP-2 cleavage, moreover, we demonstrated the first time that CRMP-2 could be a calpain substrate in ischemia. Although prevention of the CRMP-2 cleavage did not relieved ischemic cell death, it is possible that the 58 kDa cleaved form of CRMP-2 could play important roles in ischemic cell death cascade. The functional role of 58 kDa CRMP-2 remains to be determined that might provides new therapeutic strategies to ischemic stroke.;뇌졸중은 뇌로의 당과 산소등의 공급이 중단되어 나타나는 뇌허혈로 인해 뇌에 심각한 손상을 입히게 된다. 본 연구에서 우리는 뇌허혈 모델을 in vitro 상에서 유도하기 위해, PC12 세포를 당과 혈액이 없는 상태에서 무산소 배양하였다. 이처럼 허혈을 유발한 모델에서 collapsin response protein (CRMP)-2 라고 하는 단백질의 발현이 변하는 것을 확인하였는데 CRMP-2는 Semaphorin3A라고 하는 repulsive guidance molecule에 의해 활성화되며, 신경에서의 axonal growth와 guidance에서 중요한 역할을 한다고 알려져 있는 단백질이다. 하지만 허혈모델에서 CRMP-2에 대한 변화 및 역할에 대한 연구는 거의 이루어진 바가 없다. 정상적인 조건에서 CRMP-2는 62 kDa의 단백을 나타내게 되는데, 허혈 유발시에는 58 kDa의 새로운 사이즈에서의 CRMP-2가 발견되며, 이는 잘려진 형태의 CRMP-2라고 여겨진다. 허혈 유발시, 이처럼 CRMP-2의 절단뿐만 아니라, PARP의 절단도 감지가 되었는데, 이는 우리 허혈 모델에서 caspase가 활성화됨을 말해주고 있다. Caspase활성과 58 kDa CRMP-2 생성의 관련성을 연구하기 위해, H₂O₂를 처리한 모델에서 caspase와 CRMP-2 발현을 관찰하였다. H₂O₂를 처리하였을 때, 고농도의 H₂O₂의 처리에 따라 PARP가 절단되는 것을 확인하였으나, 58 kDa의 CRMP-2는 관찰 되지 않았으며, 이는 caspase의 활성이 CRMP-2의 절단과는 긴밀한 연관성이 없음을 보여주고 있다. 허혈시 세포내 칼슘의 상당한 증가는 이미 잘 알려져 있으며, 이러한 칼슘증가가 허혈에 의한 신경손상에 중요한 중계자라는 것이 일반적으로 받아들여지고 있는 사실이다. 특히 세포외 칼슘의 세포내 유입과 세포내 저장고로부터의 칼슘 방출이 이러한 세포내 칼슘증가에 큰 역할을 하고 있다. 따라서, 세포내 칼슘의 증가와 CRMP-2 절단과의 상관성을 알아보기 위해 실험을 진행하였다. 세포외 칼슘을 완전히 제거하기 위해, EGTA를 처리하니 58 kDa의 CRMP-2의 생성의 거의 완전하게 소실되는 것을 확인하였고, 또한 Voltage-Gated Ca^(2+) Channels (VGCCs) 억제제인 Cd^(2+) 의 처리에 의해 CRMP-2의 절단이 억제되는 것을 확인함으로서, 세포외 칼슘의 VGCCs를 통한 세포내 진입이 58 kDa의 CRMP-2 생성에 있어 중요한 조절인자임을 알아냈다. 그리고 칼슘 ionophore인 A23187의 처리 실험에서, 허혈 상태에서 A23187을 처리시, 62 kDa 의 CRMP-2 소실과 58 kDa의 CRMP-2의 생성이 농도의존적으로 가속화되었다. 더욱이 허혈을 유발하지 않은 정상적인 조건에서 A23187의 처리만으로도 58 kDa CRMP-2가 생성되었는데 이는 칼슘이 CRMP-2 절단에 매우 긴밀하게 연관되어 있음을 다시금 시사해주고 있다. 허혈시 활성화 되는 대표적 효소로 대두되고 있는 것이 calpain과 caspase 이다. Caspase는 apoptosis와 긴밀하게 연관되어 있으며, calpain은 주로 necrosis와 연관되어 있다고 알려져있으나, apoptosis에도 관련을 하고 있다는 보고가 알려지고 있다. Calpain은 칼슘의존적인 cysteine protease로서 활성화를 위해 세포내 칼슘의 증가를 필요로한다. 허혈시 calpain과 caspase가 활성화 된다는 연구가 알려져 있으며, 그리하여 CRMP-2의 절단이 이 두 효소와 관련성이 있는지 확인하기 위해 각각의 저해제를 처리하여 58 kDa의 생성 변화를 관찰하였다. Caspase 저해제인 Z-VAD-FMK를 처리하였을 때, 58 kDa의 생성은 억제되지 않았으며, 이는 앞서 H₂O₂의 실험에서 caspase의 활성과 58 kDa의 생성이 무관하다는 결과와 일치한다. Calpain 저해제인 calpeptin을 처리하였을 때, CRMP-2의 절단이 농도의존적으로 억제됨을 확인하므로써 CRMP-2의 절단에 calpain을 중요한 효소로 여기게 되었다. 또한, 세포 lyate에 직접 calpain을 처리하였더니, 허혈시 생성된 58 kDa의 band와 동일한 band를 확인할 수 있었는데, 이는 calpain이 직접적으로 CRMP-2를 절단을 매개하고 있음을 알려주고 있다. 이 결과를 보다 더 확실히 하기 위해서는 CRMP-2만을 순수 정제한 후, calpain 을 처리해보는 좀 더 직접적인 실험을 필요로 할 것이다. 허혈에서의 세포 사멸을 알아보기 위해 MTT assay와 flow cytometry를 시행 하였다. 허혈 시간이 길어짐에 따라 세포의 생존률이 현저하게 감소하는 것을 확인하였으며, apoptosis와 necrosis를 구별할 수 있는 YO-PRO-1과 Propidium Iodide (PI)라는 두 dye를 통해 우리의 허혈 모델에서의 세포 사멸을 심도있게 관찰해 본 결과, 대부분의 세포들이 necrosis를 나타냄을 확인하였고, 허혈 초반 모델에서도 apoptosis를 거의 찾아볼 수 없었던 결과로 미루어 우리의 허혈모델이 necrosis와 긴밀하게 연관되어 있음을 시사한다고 할 수 있다. 58 kDa과 세포생존과의 연관성을 알아보기 위해 약물 처리 후 세포 생존률을 관찰한 결과 어떤 약물에서도 세포생존률이 증가되는 것을 확인할 수는 없었다. 더욱이, EGTA와 같이 58 kDa의 생성을 완전하게 막았던 약물군에서도, 세포 사멸을 억제하지는 못한다는 결과를 얻었다. 본 연구에서 우리는 허혈시 새로 발현되는 58 kDa CRMP-2의 조절과 그 기능에 대해 연구하고자 하였다. 58 kDa CRMP-2의 생성에는 VGCCs을 통한 세포외 칼슘의 세포내 유입이 매우 중요한 역할을 하며, 세포내 칼슘증가로 인한 calpain의 활성화가 CRMP-2의 절단에 매우 긴밀하게 연관되어 있음을 밝혀내었다. 이 연구는 CRMP-2와 calpain의 관련성을 알려주는 최초의 연구라는데 의의가 있으며, 비록 58 kDa CRMP-2 생성 억제가 세포 생존에 큰 영향을 주지는 못했지만, 허혈에 의해 유발되는 신경 손상에 있어 중요한 역할을 할 것이라 생각된다. 하지만 58 kDa CRMP-2의 역할에 관한 더 심도있는 실험이 요구되며, 이는 결국 뇌졸중과 같은 허혈에 의한 뇌손상의 병리 기전을 좀더 명확히 하여 새로운 치료제의 개발의 단서를 제공해 줄 것이라 기대된다.Abstract = vi I. Introduction = 1 II. Materials and Methods = 16 1. Materials = 16 1.1 Chemicals = 16 1.2 Cells = 17 2. Cell culture = 18 3. Cell viability test = 18 4. Western blotting = 19 5. MALDI-TOF mass spectrometry = 21 6. Flow cytometric and fluorescence microscope analysis = 21 III. Results = 23 1. Ischemic time-dependent CRMP-2 expression pattern in ischemia-induced PC12 cell model = 23 2. Relationship between apoptotic cell death and changes of CRMP-2 expression in ischemia-induced PC12 cells = 23 3. Ca^(2+)-dependent regulation of the 58 kDa CRMP-2 cleavage = 25 4. Effects of Ca^(2+) ionophore treatment on CRMP-2 cleavage = 32 5. Relationship between NMDA receptors and CRMP-2 cleavage = 35 6. Investigation of Calpain and Caspase in CRMP-2 cleavage = 38 7. Nuclear factor–κB (NF-κB) and CRMP-2 expression in ischemic condition = 42 8. Effects of Ca^(2+)/calmodulin-dependent protein kinase II (CamKII) on ischemia-induced cleavage of CRMP-2 = 46 9. Thrombin and CRMP-2 expression in ischemia = 50 10. Relationship between the 58 kDa CRMP-2 formation and cell viability = 50 IV. Discussion = 58 References = 69 논문개요 = 10

A Study on the Multi-Channel Network(MCN) of Online Platform: A combination between individual video creation and business capital

학위논문 (석사)-- 서울대학교 대학원 : 언론정보학과, 2016. 2. 윤석민.이 연구는 영상 UCC(User-Created Content)로 출발한 개인적 창작 활동에 자본이 적극적으로 결합하는 현상인 다중 채널 네트워크(Multi-Channel Network, MCN)에 대한 탐색적 연구로서, MCN의 산업적 동향을 살피고 그 모델의 사회문화적인 함의, 특히 개인 창작 과정과 풀뿌리 미디어 문화의 형성에의 영향을 살피는 데에 연구 목적을 두었다. MCN은 유튜브와 같은 영상 플랫폼의 창작자(채널)들과 제휴하여 제작이나 자금 지원, 홍보, 저작권 관리, 수익창출/판매, 고객확보 등의 지원을 하며 채널 수익의 일부를 공유하는 조직을 말한다. 탐색적 연구를 위하여 질적 연구방법론을 사용하였다. 문헌분석과 심층인터뷰, 콘텐츠 내용 분석을 통해 크게 ①MCN의 비즈니스 모델 구성 ②MCN 콘텐츠의 특성 ③개인 창작 활동에의 영향 ④풀뿌리 미디어 문화 형성에의 영향에 대하여 규명하고자 했다. 연구 결과, MCN 비즈니스를 창작자 중심의 비정형 디지털 콘텐츠 비즈니스로 정의할 수 있었다. 창작자와 창작자 콘텐츠의 역량 강화를 위한 지원을 하는 것이 비즈니스의 핵심가치이며, 주요 수익모델은 광고다. 창작자에 대한 통제가 전통적 미디어 산업에 비해 약하고 UCC 모델에서보다 창작자들의 힘을 결집시켜 플랫폼 및 광고주와 대등한 비즈니스적 힘의 균형을 이루려고 한 것이 특징이다. 또한 한국 MCN의 특징으로 기업 주도형 산업 발달을 꼽을 수 있었다. 이러한 사업 모델에 대한 회의론을 극복하기 위해 사업 다각화를 이루어야 경제적 성과를 달성할 수 있다는 결과가 도출되었다. 또한 장기적인 MCN 시장 성장을 위해서는 기존 미디어 영상보다 경쟁력 있는 콘텐츠 제작, 지속가능한 수익모델 발굴, 글로벌화, 시장 정화 노력이 있어야 한다고 나타났다. MCN 콘텐츠는 주로 게임, 장난감, 뷰티, 음식과 관련된 콘텐츠들이 소비되었으며, 빈약한 서사구조, 다양한 기술 활용, 자연스러움과 소통, 유희적 콘텐츠 등을 주요 특성으로 꼽을 수 있었다. 기업 자본이 개인의 창작 활동을 어떻게 변화시킬 것인지를 살펴본 결과, MCN은 개인의 창의성 발휘를 증진시키는 방향으로 영향을 주고 있었으며, 창작자들의 창작 독립성 또한 최대한 보장하고 있는 것으로 나타났다. 그러나 UCC에서 기대되었던 풀뿌리 미디어 문화의 형성에 MCN이 기여하는 바는 적은 것으로 보인다. 신규 창작자를 육성하고 새로운 시장 진출 기회를 제공한다는 점에서는 창작의 저변이 넓어진 것으로 보이나, 보다 폭넓은 생산 권력의 평등한 분배를 위해서는 창작자들의 안정적인 수입 기반 확보와 인기/비인기 창작자 간 격차 해소가 지속가능한 생태계 조성에 중요한 과제로 부각되었다. 또한 MCN 콘텐츠에는 가치지향적‧비판적 담론이 부재하고 이성적 의견 교환과 신실성 등이 결여되어 온라인 공론장을 형성하는 데에도 한계가 있을 것으로 보인다. 위와 같은 연구 결과를 바탕으로, 본 연구는 작은 창작자가 안정적인 수익을 낼 수 있는 환경 조성, 상업성에 대한 철저한 관리, 문화의 관점에서 바라보는 영상 창작과 관련한 산업적․정책적 함의를 제안하였다. 본 연구는 우리나라 MCN에 대하여 분석한 초기 시도로 그것의 산업적․문화적인 의미를 살폈다는 점에서 의의를 갖는다. 본 연구를 작은 단초로 삼아, 개인 영상 창작과 기업 자본이 결합하는 현상에 관한 연구의 확장이 이루어지기를 기대한다.제 1 장 연구의 목적 1 제 1 절 연구의 필요성 1 제 2 절 논문의 구성 4 제 2 장 문헌 연구 6 제 1 절 MCN의 등장 배경 6 1. 웹 2.0 6 2. 이용자 창작 콘텐츠(UCC) 9 3. MCN의 등장 13 제 2 절 MCN 비즈니스 모델 19 1. 비즈니스 모델의 구성요소 19 2. 영상 산업의 비즈니스 모델 22 1) 전통적 모델 22 2) UCC 모델 26 3) MCN 모델 30 제 3 절 MCN의 사회문화적 함의 34 1. 조직화된 창작 활동에서의 창의성 34 2. UCC 모델의 사회문화적 함의 38 3. MCN에 대한 기대와 우려 42 제 3 장 연구문제 및 연구방법 46 제 1 절 연구문제 46 제 2 절 연구방법 49 1. 문헌분석 49 2. 심층인터뷰 50 3. 콘텐츠 내용 분석 52 제 4 장 연구 결과 57 제 1 절 비즈니스 모델의 구성 57 1. 창작자 중심의 비정형 디지털 콘텐츠 비즈니스 57 2. 타 모델과의 차별성 64 3. 경제적 성과 70 4. 시장 성장에 대한 전망 73 제 2 절 MCN 콘텐츠의 특성 79 1. 장르 및 내용 79 2. 텍스트, 영상기술, 기호학적 특성 82 제 3 절 개인 창작 활동에 대한 영향 87 1. 개인의 창의성 발휘 87 2. 창작의 독립성 92 제 4 절 풀뿌리 미디어 문화의 형성 98 1. 콘텐츠 생산 권력의 분배 98 2. 온라인 공론장 형성 107 제 5 장 결론 및 논의 112 제 1 절 연구결과 요약 112 제 2 절 논의 115 제 3 절 연구의 한계 및 제언 116 참고문헌 118 부록 128 Abstract 134Maste