신경세포와 교세포의 Ras 경로 과활성화가 Ras 관련 신경발달장애 생쥐 모델의 기억장애에 미치는 영향

학위논문(박사) -- 서울대학교대학원 : 의과대학 의과학과, 2023. 8. 이용석.RAS-ERK 신호 전달 경로는 여러 세포에 존재한다고 알려져 있는 신호 전달 경로로써 세포의 생존과 분화, 시냅스 전달, 그리고 학습과 기억 등 중추신경계에서 다양한 뇌 기능에 관여한다. 이 경로에 관여하는 유전자들의 돌연변이에 의해서 다양한 질병이 발생하게 되는데 이들을 총칭하여 RASopathy라고 부르고, 신경섬유종 1형, 누난 증후군, 심장-얼굴-피부 증후군, 그리고 코스텔로 증후군 등이 이에 속한다. RASopathy와 연관되어 있는 돌연변이들은 대부분 RAS-ERK 신호 전달 경로를 과활성시키며 대부분의 RASopathy 케이스는 공통적인 특징을 보이는데, 그중 하나가 바로 인지 기능 장애이다. 다양한 생쥐 모델을 이용한 최근 연구들은 RAS-ERK 신호 전달 경로 구성 유전자들이 세포 타입 특이성에 따라 각기 다른 분자, 세포적 병리 생리학적 기전을 가진다고 보고한 바 있다. 본 학위 논문에서는 RASopathy 연관 인지 기능 장애의 병리기전에 있어 신경세포와 성상교세포가 각기 다른 역할을 수행할 것이라는 가설을 설정하였다. 이를 확인하기 위해 두 가지 종류의 RASopathy 생쥐 모델, KRAS G12V와 BRAF K499E에서 인지 장애를 유발하는 세포 타입 특이적 메커니즘에 대해 연구하였다. Chapter 1에서는, 환자와 생쥐 모델의 중추신경계 발달과 인지 기능에 있어 RASopathy 관련 돌연변이의 특징적인 역할을 리뷰하였고, RAS-ERK 신호 전달 경로 유전자들의 병리적 기전에 관한 문헌들을 정리하였다. Chapter 2에서는 KRAS G12V 발현을 통한 RAS-ERK 신호 전달 경로의 신경세포 타입 특이적 조절이 해마 인지 기능에 미치는 영향에 대해 연구하였고, KRAS G12V의 발현이 흥분성 신경세포와 억제성 신경세포 모두에서 각기 다른 이유로 학습과 기억 장애를 유발하는 것을 확인하였다. 억제성 신경세포에서 KRAS G12V는 억제성 시냅스 전달를 증가시켰으며, 시냅스 가소성을 손상시켰다. 이에 반해 흥분성 신경세포에서 KRAS G12V는 신경세포 사멸을 유발하였다. 이러한 결과는 억제성 신경세포와 흥분성 신경세포 두 가지 모두가 서로 다른 메커니즘을 통해 KRAS와 연관된 인지 기능 장애에 관여하고 있다는 것을 의미한다. Chapter 3에서는 비이상적인 Braf 신호가 어떻게 인지 기능에 영향을 미치는지 RASopathy 연관 Braf 돌연변이를 이용하여 연구하였다. 신경 줄기 세포 특이적으로 Braf K499E를 발현하는 생쥐는 심각한 학습 장애를 보였지만 흥분성 혹은 억제성 신경세포 특이적으로 Braf K499E를 발현하는 생쥐는 정상적으로 학습했다. Braf K499E는 RAS-ERK 신호 전달 경로를 과활성화 시켰으며, 성상교세포를 반응성 상태로 변화시켰다. 특히, 성체 시기에서 성상교세포 특이적인 돌연변이 BRAF의 발현 역시 세포적, 행동적 장애를 유도할 수 있었고, 성상교세포 내부의 칼슘 신호가 비이상적으로 증가되어 있음을 확인하였다. 마지막으로, 발달 단계부터 Braf K499E를 발현하는 생쥐의 성체 시기에 성상교세포 특이적으로만 RAS-ERK 신호 전달 경로를 정상화 시켰을 때 학습 장애가 회복되는 것을 확인하였다. 결론적으로, 본 학위 논문에서는 RASopathy 연관 유전자들이 여러 중추신경계 세포 타입의 기능적 특성에 각기 다른 영향을 미치며, 이는 RASopathy 환자들의 세포 타입 특이적 병리기전을 뒷받침한다. KRAS로 인해 매개되는 학습 장애에서 신경세포의 기여를, 그리고 BRAF로 인해 매개되는 학습 장애에서는 성상교세포의 기여를 확인함으로써, 각 유전자 특이적인 조건에서 신경세포와 성상교세포 모두가 RASopathy 연관 인지 기능 장애의 원인이라는 결론을 얻었다. 또한, 본 학위 논문의 연구는 이 연구에서 다루지 않은 다른 RASopathy 연관 인지 기능 장애의 메커니즘에 대해 새로운 이해와 통찰을 제공할 수 있을 것으로 기대한다.The RAS-ERK signaling pathway plays critical roles in brain function, including cellular processes, synaptic transmission, and learning and memory in central nervous system. Germline mutations of molecules in the RAS-ERK signaling pathway are associated with a series of developmental disorders, collectively called RASopathy, which includes neurofibromatosis type 1, Noonan syndrome, cardio-facio-cutaneous syndrome, and Costello syndrome. Most mutations associated with RASopathy enhance the activity of RAS-ERK signaling pathway, and therefore, most cases with RASopathies share representative clinical characteristics, especially, cognitive impairments. Recent studies using various mouse models of RASopathies have shown that each RAS-ERK signaling component may have a distinct molecular and cellular pathophysiology depending on cell type-specificity. In this dissertation, I hypothesized that each neuronal and astroglial cell type might have distinct roles that contribute to the cell type-specific pathophysiology in RASopathy-related cognitive deficits. To answer the question, I investigated the cellular mechanisms underlying learning and memory impairments in two types of RASopathy mouse models, KRAS G12V and BRAF K499E. In chapter 1, I reviewed the previous literatures that investigated the impact of RASopathy-associated mutations on central nervous system development in mice and humans, which provided understandings and insights into the specific roles of RAS-ERK signaling genes to central nervous system and the subsequent effect on cognitive function in adult mice. In chapter 2, I investigated the impacts of neuron type-specific manipulation of RAS-ERK signaling by expressing KRAS G12V in the hippocampus. I found that the expression of KRAS G12V in either hippocampal excitatory or inhibitory neurons results in spatial learning and memory deficits in adult mice, each for different reasons. In inhibitory neurons, KRAS G12V induced enhanced GABAergic inhibitory synaptic transmission, and impaired long-term potentiation, which could be restored by picrotoxin treatment. In contrast, in excitatory neurons, KRAS G12V induced neuronal cell death, which might be responsible to the behavioral defects. This result showed that both inhibitory and excitatory neurons are involved in KRAS-associated learning impairments in adult via distinct mechanisms. In chapter 3, I investigated how the aberrant Braf signaling affects cognitive functions by using CFC syndrome-associated Braf mutations. Expressing the Braf K499E under control of Nestin-Cre, resulted in severe hippocampal memory deficits in mice, whereas Braf K499E in either excitatory or inhibitory neurons did not alter learning and memory. Intriguingly, I found that the Braf K499E and subsequently activated ERK signaling renders astrocytes being in reactive-like status. Importantly, astrocyte-specific expression of the mutant BRAF in adult was sufficient to induce cellular and behavioral deficits in mice, which are accompanied by hyperactive Ca2+ fluctuations in astrocyte. Finally, the learning deficits of Nestin;Braf KE/+ mice can be reversed by normalizing RAS-ERK signaling solely in astrocytes. This study demonstrates that the reactive-like astrogliosis may underlies the severe cognitive deficits in CFC syndrome. In conclusion, I demonstrated that the RASopathy-associated genes are differentially affect functional properties of each cell type in central nervous system, which may be responsible for the cell type-specific pathophysiology of individual RASopathy patient. By showing the neuronal contribution in mutant KRAS-mediated learning deficits, and astrocytic contribution in mutant BRAF-mediated learning deficits, these results strongly suggest that both neuron and astrocyte are responsible for RASopathy-related cognitive impairments in each gene-specific manner. Furthermore, this study will provide insight to identify cell types as well as underlying mechanism accounting for the cognitive deficits in other RASopathies not covered here.Preface 1 Abstract 2 Table of Contents 5 Lists of Figures and Tables 7 Chapter 1. The impact of RASopathy-related mutations on CNS in human and mice 10 1. RAS-ERK signaling and RASopathy 11 2. RASopathy and central nervous system features 17 2.1 Neurofibromatosis type 1 17 2.2 Noonan syndrome / Noonan syndrome with multiple lentigines 21 2.3 Cardio-facio-cutaneous syndrome 25 2.4 Costello syndrome 29 2.5 Further questions 32 2.6 Purpose of this study 33 Chapter 2. Neuron type-specific expression of a RASopathy-related KRAS mutation impairs spatial learning and memory 34 Introduction 35 Material and Method 38 Results 2.1 Ectopic expression of KRAS G12V in hippocampal inhibitory neurons 42 2.2 Ectopic expression of KRAS G12V in inhibitory neurons impairs hippocampal-dependent spatial learning and memory 44 2.3 Ectopic expression of KRAS G12V in inhibitory neurons increases inhibitory synaptic transmission 48 2.4 Ectopic expression of KRAS G12V in hippocampal excitatory neurons 51 2.5 Ectopic expression of KRAS G12V in hippocampal excitatory neurons impairs hippocampal-dependent spatial learning and memory 53 2.6 Ectopic expression of KRAS G12V in hippocampal excitatory neurons induces neuronal death 56 Discussion 58 Chapter 3. Aberrant BRAF signaling impairs learning and memory via reactive-like astrogliosis 61 Introduction 62 Material and Method 64 Results 3.1 Braf K499E expression in either excitatory neurons or inhibitory neurons does not impair learning and memory 68 3.2 Braf K499E in neural stem cell impairs learning and memory 75 3.3 Braf K499E drives increased reactive-like astrogliosis in the hippocampus 80 3.4 Braf-driven reactive-like astrogliosis is established during adolescent period 89 3.5 Braf K499E in neural stem cell does not affect synaptic properties 93 3.6 Braf-mediated RAS-ERK signaling dysregulation in adult astrocytes leads to learning deficits 95 3.7 BRAF KE-expressing astrocyte showed hyperactive calcium fluctuation which is normalized by attenuation of RAS-ERK signaling activity 104 3.8 Hyperactive calcium fluctuation in Nestin;Braf KE/+ astrocytes were attenuated by GFAP-specific dnMEK1 injection 112 3.9 The learning deficits of Nestin;Braf KE/+ mice can be reversed by normalizing RAS-ERK signaling solely in astrocytes 116 Discussion 119 General Conclusion 124 Bibliography 128 Abstract in Korean 147박

자가-대조 환자군 연구

학위논문 (석사) -- 서울대학교 대학원 : 약학대학 약학과, 2020. 8. 이주연.Sodium Glucose Co-Transporter 2(SGLT2) 억제제는 신 세뇨관에 주로 분포하는 SGLT2를 선택적으로 억제하여, 나트륨과 당의 교환을 막아 소변으로의 포도당 배출을 증가시킨다. 이로 인해 소변의 당 농도가 상승하여 비뇨생식기감염이 나타날 수 있다. SGLT2 억제제의 복용은 당뇨병 환자에서 추가적인 요로감염과 생식기감염의 위험의 상승을 야기할 수 있다. 한편으로, SGLT2 억제제의 요로감염에 대한 기존 연구 결과들은 일치되는 결과를 보이지 않으며, 생식기감염의 경우 노인 인구 및 전체 인구집단에 대한 SGLT2 억제제의 영향은 연구된 바 있으나, 일반적으로 생식기감염의 위험성이 높다 알려져 있는 폐경기 여성군에 대한 정보는 제한적이다. 본 연구에서는 전국민 표본자료를 이용한 자가-대조군 연구 설계를 통하여, 당뇨병 환자에서 SGLT2 억제제를 사용함으로 인하여 나타나는 추가적인 감염 위험성을 확인하고자 하였다. 또한, SGLT2 억제제 사용기간 동안 비뇨생식기감염 및 요로감염, 생식기감염의 위험이 유의하게 증가되는 기간과, 환자의 연령 및 성별, 감염부위 및 사용하는 SGLT2 억제제의 종류에 따른 층화 분석을 통해 특히 감염의 위험성이 상승되는 군을 확인하고자 하였다. 본 연구는 2016년, 2017년의 건강보험심사평가원 환자표본자료 중 전체환자데이터셋(HIRA-NPS-2016, HIRA-NPS2017)과 고령환자데이터셋(HIRA-APS-2016, HIRA-APS-2017)을 자기-대조환자군 연구 설계를 통해 분석하였다. 해당 기간 동안 SGLT2 억제제를 한번이라도 사용한 환자 중, 비뇨생식기감염이 발생한 환자를 확인하여 연구 대상에 포함하였다. 비뇨생식기감염은 해당 감염 진단명이 있으면서 항균제, 항진균제 또는 항바이러스제가 처방된 경우로 정의하였다. 1년간의 데이터에서 1월부터 3월까지의 기간은 분석 기간에 포함하지 않았으며, SGLT2 억제제 사용 1달 전에 비뇨생식기감염증이 진단된 바 있는 환자 및 연구기간 동안 지속적으로 SGLT2 억제제를 사용하여 대조군으로 설정할 수 있는 기간이 없는 환자는 분석에서 제외하였다. SGLT2 억제제 노출기간은 SGLT2 억제제를 처방된 날로부터, 처방일수에 washout period를 더한 날짜로 정의하였다. Washout period는 7일로 정의하였으며, 환자가 이전에 처방된 SGLT2 억제제의 노출기간 이후 30일 이내에 재처방을 받았을 경우, 지속 투여로 간주하였다. 분석에 포함된 환자는 총 2,949명이었으며, 전체 환자의 약 80%가 여성이었다. 관찰된 비뇨생식기감염 중 요로감염은 2,057명(69.75%)였으며, 생식기감염은 1,393명(47.24%)였다. 총 SGLT2 억제제 사용 기간 동안의 감염 발생율은 전체 비뇨생식기감염 1.27 인-년, 요로감염 1.32 인-년, 생식기감염 1.49 인-년이었다. SGLT2 억제제를 투여하지 않은 기간 대비 투여 기간의 비뇨생식기감염의 위험성이 약 24% 유의하게 상승하였으며(Incidence risk ratio, IRR 1.24, 95% CI 1.16-1.33), 요로감염의 위험성은 약 19% 유의하게 상승하였고(IRR 1.19, 95% CI 1.10-1.30), 생식기감염의 위험성은 약 29% 상승하였다(IRR 1.29, 95% CI 1.17-1.43). SGLT2 억제제의 투여기간을 7일 이내, 8-14일, 15-28일, 29일 이후로 나누어 분석한 결과, 전체 비뇨생식기감염은 SGLT2 억제제 투여시작 8일 이후부터 IRR이 유의하게 상승하였다(IRR 1.43, 95% CI 1.11-1.84). 요로감염군에서는 SGLT2 억제제 투여시작 8일에서 14일 기간에서 가장 높은 IRR을 보였으며(IRR 1.40, 95% CI 1.05-1.89), 투여시작 15-28일, 29일 이후에도 지속적으로 유의하게 높게 유지되었다(IRR 1.15, 95% CI 1.06-1.26). 생식기감염군에서는 SGLT2 억제제 투여시작 8-14일째부터 IRR이 유의하게 상승한 후(IRR 1.44, 95% CI 1.06-1.97) 15-28일째에 가장 높은 값을 나타냈으며(IRR 1.65, 95% CI 1.33-2.04), 29일 이후에도 유의하게 높게 유지되었다(IRR 1.25, 95% CI 1.13-1.38). 성별 및 연령에 따른 층화 분석에서는 전체 비뇨생식기감염에 대해서 여성에 한하여 SGLT2 억제제 사용에 의해 비뇨생식기감염 위험성이 유의하게 상승하였으며, 남성에서는 유의하지 않았다. 특히 50세 이상 64세 미만의 폐경기 여성에서 SGLT2 억제제 사용에 의한 비뇨생식기감염의 위험성이 약 40%가량 상승하여, 가장 높은 상승폭을 보였다(IRR 1.40 95% CI 1.21-1.61). 50세 이상 64세 미만의 폐경기 여성에서 요로감염 위험성은 약 26% (IRR 1.26, 95% CI 1.06-1.50), 생식기감염 위험성은 약 54% 상승하였다(IRR 1.54, 95% CI 1.26-1.88). 65세 이상의 여성은 요로감염 위험성이 약 26%(IRR 1.26, 95% CI 1.12-1.41), 생식기감염 위험성은 47% 상승하였다(IRR 1.47, 95% CI 1.27-1.71). 감염 부위별 층화 분석에서는 외음질 감염(IRR 1.37, 95% CI 1.24-1.53), 자궁 감염(IRR 1.31, 95% CI 1.14-1.51), 신장감염(IRR 1.30, 95% CI 1.08-1.55), 요도감염(IRR 1.21, 95% CI 1.05-1.39), 방광염(IRR 1.16, 95% CI 1.06-1.27) 순으로 SGLT2 억제제를 사용하지 않은 기간 대비 사용한 기간의 감염의 위험성이 높게 상승하였다. 전립선 감염의 위험성은 유의한 차이를 보이지 않았다(IRR 0.80, 95% CI 0.60-1.07). SGLT2 억제제 종류에 따른 층화 분석에서는 empagliflozin 및 dapagliflozin의 사용은 비뇨생식기감염 및 요로감염 위험성이 유의하게 상승하였으며, 생식기감염은 모든 SGLT2 억제제에서 감염의 위험성이 유의하게 상승하였다. 비뇨생식기감염에 대하여 사용한 항균제, 항진균제, 항바이러스제가 주사 제형일 경우 이를 심각한 감염이라 정의하고, 심각도에 따라 감염을 나눠 층화 분석한 결과, 비뇨생식기감염 및 요로감염은 심각한 감염 및 심각하지 않은 감염 모두에서 유의한 감염 위험성의 상승을 보였으나, 심각한 생식기감염의 위험은 SGLT2 억제제 사용으로 유의하게 상승되지 않았다(IRR 0.99, 95% CI 0.71-1.39). 본 연구 결과 비뇨생식기감염을 경험한 개인 내에서 SGLT2 억제제의 사용기간에 사용하지 않는 기간 대비 비뇨생식기감염 전체의 위험성 및 요로감염증, 생식기감염증의 위험성은 유의하게 상승하는 것을 확인하였다. 특히 폐경기 여성 환자에서 SGLT2 억제제 투여 시작 후 8-14일 시점에 요로감염의 위험성, 15-28일 시점에서 생식기감염의 위험성이 가장 높이 상승하고, 29일 이후에도 유의하게 유지되는 것을 확인하였다. SGLT2 억제제의 사용으로 인한 감염위험의 상승은 생식기 감염에서 요로감염보다 크게 나타났다.Sodium-glucose cotransporter 2 (SGLT2) inhibitors selectively block SGLT2 in the renal tubule and prevent sodium-glucose exchange, leading to increased glucose excretion into the urine. Therefore, the use of SGLT2 inhibitors could increase the risk of urogenital infection in diabetic patients. In contrast, the risk of urinary tract infection with SGLT2 inhibitors is controversial. Moreover, limited studies have evaluated the risk of genital infection risk with SGLT2 inhibitors in menopausal patients, who are known to be vulnerable to genital infection. We aimed to investigate the incidence rate ratio of urogenital, urinary tract, and genital infections using a self-controlled case series design to minimize the bias due to the interindividual differences in susceptibility to urogenital infections. In addition, we investigated the increase in risk in relation to each period from the initiation of SGLT2 inhibitors and in relation to sex and age, infection sites, SGLT2 inhibitor type, and seriousness of infection. For this analysis, we used the national patient sample datasets (HIRA-NPS-2016, HIRA-NPS-2017) and aged population sample datasets (HIRA-APS-2016, HIRA-APS-2017) provided by the Health Insurance Review & Assessment Service in 2016 and 2017. We included as the subjects patients with diabetes who were prescribed SGLT2 inhibitors at least once and subsequently contracted urogenital infection. Urogenital infections were defined as having a diagnosis of urogenital infections and being prescribed antibiotics, antifungals, and antivirals on the same day as the diagnosis. Data from January to March were censored from the observation period, considering the possibility of SGLT2 inhibitors prescription which was carried forward from the previous year. Patients who were diagnosed with urogenital infection within 1 month of SGLT2 inhibitor use and those who used SGLT inhibitors persistently during the observation period were excluded due to the absence of a control period. The exposure period of the SGLT2 inhibitor was defined as the period from the prescription date to the end date of prescription supply plus a 7-day washout period. We allowed a gap of 30 days (grace period) between the supply of SGLT2 inhibitors for continuous use. A total of 2,949 patients were included in the analysis, and approximately 80% of the patients were women. The number of patients who were diagnosed with urinary tract infections was 2,057 (69.75%) and with genital infections was 1,393 (47.24%). The incidence rates of urogenital, urinary tract, and genital infections were 1.27 person-year, 1.32 person-year, and 1.49 person-year, respectively. The risk of urogenital (incidence risk ratio, IRR 1.24, 95% CI 1.16–1.33), urinary tract (IRR 1.19, 95% CI 1.10–1.30), and genital infections (IRR 1.29, 95% CI 1.17–1.43) significantly increased during the SGLT2 inhibitor exposure period compared with the non-exposure period. The risk of total urogenital infection was significant 8–14 days after initiating SGLT2 inhibitor therapy (IRR 1.43, 95% CI 1.11–1.84). The highest increase in the risk of urinary tract infection and genital infection was observed from 8 to 14 days (IRR 1.40, 95% CI 1.05–1.89) and 15 to 28 days (IRR 1.65, 95% CI 1.33–2.04), respectively, after initiating SGLT2 inhibitor therapy. In stratified analysis by sex and age, only women older than 50 years, especially those between 50 and 64 years of age, showed a significant increase in the risk of urogenital infection during the periods of exposure to SGLT2 inhibitors (IRR 1.40, 95% CI 1.21–1.61). The increase in risk of genital infection (IRR 1.54, 95% CI 1.26–1.88) was higher than that of urinary tract infection (IRR 1.26, 95% CI 1.06–1.50) in women aged between 50 and 64 years. A similar tendency was observed in women older than 65 years. The highest increase in the risk of urogenital infection was observed in vulvovaginal infection (IRR 1.37, 95% CI 1.24–1.53), followed by uterine (IRR 1.31, 95% CI 1.14–1.51), renal (IRR 1.30, 95% CI 1.08–1.55), urethral (IRR 1.21, 95% CI 1.05–1.39), and bladder infections (IRR 1.16, 95% CI 1.06–1.27) during the exposure period of SGLT2 inhibitors. The use of SGLT2 inhibitors did not affect the risk of prostatic infection (IRR 0.80, 95% CI 0.60–1.07). The empagliflozin and dapagliflozin groups showed a significant increase in the risk of urogenital and urinary tract infections during the SGLT2 inhibitor exposure period, respectively, while ipragliflozin showed no significant results. The increase in the risk of genital infection during the SGLT2 inhibitor exposure period was significant for all types of SGLT2 inhibitors. We defined seriousness by using an injection formulation of antibiotics, antifungals, and antivirals. The risk of urogenital and urinary tract infections increased significantly for both non-serious and serious infections during the SGLT2 inhibitor exposure period. The use of SGLT2 inhibitors did not affect the risk of serious genital infection (IRR 0.99, 95% CI 0.71–1.39). In conclusion, we confirmed that exposure to SGLT2 inhibitors increases the risk of urogenital, urinary tract, and genital infections in diabetic patients, especially in women aged between 50 and 64 years, who contracted urogenital infections. The increase in the risk of genital infection was greater than that of urinary tract infection.1. 서 론 1 1.1 연구의 배경 1 1.2 연구의 필요성 6 1.3 연구의 목적 7 2. 연구 방법 8 2.1 연구 설계 8 2.2 연구 자료 9 2.3 연구 대상 11 2.4 노출기간 설정 23 2.5 결과 변수 26 2.6 병용 약물 27 2.7 층화 분석 32 2.8 민감도 분석 33 2.9 통계 분석 34 3. 연 구 결 과 35 3.1 연구 대상자 선정 및 기초 특성 파악 35 3.2 비뇨생식기감염의 발생 39 3.3 층화 분석 43 3.4 민감도 분석 49 4. 고 찰 58 5. 요약 및 결 론 65Maste

Bone formation of the porous layer formed of Ti-Ag mesh for GBR membrane applications

본 연구의 목적은 마이크로 표면 위에 나노 단위의 다공성 구조를 갖는 티타늄-은 메쉬를 제작하고 메쉬의 골 형성능을 평가하는데 있다. 우선 시편 제작을 위해 cp-Ti에 비해 부식저항성이 뛰어난 티타늄-은 합금을 은 2.0 at%을 첨가시켜 제작하였다. 그리고 표면에 다공성 구조를 형성하기 위해 알루미나 입자를 사용하여 시편을 블라스팅 처리한 뒤 0.5% 불산 전해액에서 60분 동안 20 V 전압을 가하여 양극산화 처리하였다. 시편의 표면 형태는 주사전자현미경을 통해 관찰하였다. 골 형성능을 평가하기 위해 토끼의 두개골을 천공한 뒤 파절편을 제거하고 그 위에 시편을 식립하였다. 각각 2주와 4주 뒤 메쉬 주위의 골 조직 형태를 3D 스캔 이미지로 관찰하였고 생성된 골의 부피를 측정하였다. 시편 표면 형상 관찰 결과 마이크로 단위의 반구 형태 구조 위에 나노 단위의 다공성 구조를 관찰할 수 있었고, 골 형성능 결과에서는 대조군으로 메쉬를 식립하지 않은 경우에서 보다 티타늄-은 합금 메쉬를 식립한 경우에서 2주와 4주 모두 유의하게 더 많은 골 형성량을 보였다(p<0.05). 따라서 이 연구 결과로 미루어 보아 티타늄-은 합금에 마이크로 표면 위에 나노 다공성 구조를 형성할 수 있었으며 골 형성능 역시 우수하여 골유도 재생술을 위한 메쉬로서 유용하게 사용할 수 있을 것이라고 사료된다.ope

Echocardiographic Investigation of the Mechanism Underlying Abnormal Interventricular Septal Motion after Open Heart Surgery

BACKGROUND: Abnormal interventricular septal motion (ASM) is frequently observed after open heart surgery (OHS). The aim of this study was to investigate the incidence and temporal change of ASM, and its underlying mechanism in patients who underwent OHS using transthoracic echocardiography (TTE). METHODS: In total, 165 patients [60 ± 13 years, 92 (56%) men] who underwent coronary bypass surgery or heart valve surgery were consecutively enrolled in a prospective manner. TTE was performed preoperatively, at 3--6-month postoperatively, and at the 1-year follow-up visit. Routine TTE images and strain analysis were performed using velocity vector imaging. RESULTS: ASM was documented in 121 of 165 patients (73%) immediately after surgery: 26 patients (17%) presented concomitant expiratory diastolic flow reversal of the hepatic vein, 11 (7%) had inferior vena cava plethora, and 11 (7%) had both. Only 2 patients (1%) showed clinically discernible constriction. ASM persisted 3--6 months after surgery in 38 patients (25%), but only in 23 (15%) after 1 year. There was no difference in preoperative and postoperative peak systolic strain of all segments of the left ventricle (LV) between groups with or without ASM. However, systolic radial velocity (VRad) of the mid anterior-septum and anterior wall of the LV significantly decreased in patients with ASM. CONCLUSION: Although ASM was common (74%) immediately after OHS, it disappeared over time without causing clinically detectable constriction. Furthermore, we consider that ASM might not be caused by myocardial ischemia, but by the decreased systolic VRad of the interventricular septum after pericardium incision.ope

Prevalence and Clinical Characteristics of Pulmonary Arterial Hypertension in Human Immunodeficiency Virus-Infected Patients

Background/Aims: Human immunodeficiency virus-associated pulmonary arterial hypertension (HIV-PAH) is a complication of HIV infection. Due to improvements in HIV survival rates following the introduction of highly active antiretroviral therapy, HIV-PAH has become an important cause of HIV-related morbidity. Thus, the objective of this study was to explore the prevalence and characteristics of HIV-PAH. Methods: Ninety-two patients were enrolled in the study from March to August 2010. We investigated clinical characteristics and performed echocardiography. HIV-PAH was defined as having a mean pulmonary arterial pressure (mPAP)≥25 mmHg based on Mahan`s equation, without lung disease or heart disease. The HIV-PAH-possible group was defined as having a tricuspid regurgitation velocity (TRV) of 2.9-3.4 m/s and a pulmonary arterial systolic pressure (PASP) of 37-50 mmHg. Results: Fifteen patients (16.3%) met the criteria of HIV-PAH based on mPAP. With respect to TRV, six patients met the criteria of the HIV-PAH-possible group. Based on the criteria of mPAP, the duration of HIV infection was not different with or without HIV-PAH. HIV RNA titers and CD4 T cell counts tended to be higher in HIV-PAH patients (8,607±11 vs. 1,067±64 copies/mL, p=0.371; 471±148 vs. 499±252 cells/mm3, p=0.680, respectively). Echocardiographic indices of the right ventricle were significantly deteriorated in the HIV-PAH group as compared with the non-HIV-PAH group (TASPE: 20.52 vs. 23.2, p=0.001; Tei index: 0.42 vs. 0.39, p=0.037). In a multivariate regression analysis, HIV activity factors (HIV duration, HIV RNA titer, and CD4 cell count) were not associated with echocardiographic indices of PAH (mPAP, PASP, and pulmonary vascular resistance). Conclusions: In this study, the prevalence of HIV-PAH was comparable to that of previous studies.ope

Studies on Ginkgo biloba (E)-4-Hydroxy-3-methylbut-(2)-enyl Diphosphate Reductase Gene and Promoter

학위논문 (박사)-- 서울대학교 대학원 : 농생명공학부, 2013. 2. 김수언.Isoprenoids, also known as terpenoids, are derived from the five-carbon building units isopentenyl diphophate (IPP) and its isomer dimethylallyl diphosphate (DMAPP). Even though they are synthesized in all living organisms, plants have more diverse and abundant isoprenoid compounds compared to others. Plants have two distinct isoprenoid biosynthetic pathways, 2-C-methyl-D-erythritol 4-phosphate (MEP) and mevalonic acid (MVA) pathways. In this study, plant IDS, the terminal enzyme in MEP pathway, is focused. Ginkgo biloba, one of the gymnosperm tree known as living fossil, has three copies of IDS genes. They are divided into two classes: GbIDS1 to class 1, and GbIDS2 and 2-1 to class 2. Each enzyme class is known to separately participate in primary and secondary metabolisms. In this research, promoter analysis and overexpression study of GbIDSs were performed respectively in Arabidopsis and poplar. The GbIDS1 and GbIDS2 promoters were fused with GUS protein and then introduced into Arabidopsis. GbIDS1pro::GUS transformant showed GUS expression in most organs except for roots, petals, and stamina, whereas GbIDS2pro::GUS was expressed only in the young leaves, internodes where the flower and shoot branched, and notably in primary root junction. This pattern of GUS expression correlated with high transcript level of GbIDS2 in Ginkgo roots compared to that of GbIDS. Methyl jasmonate (MeJA) treatment resulted in down-regulated GbIDS1pro activity in Arabidopsis leaves and upregulated GbIDS2pro activity in roots. The similar patterns of GUS activity in GbIDS2pro:: GUS Arabidopsis roots were also seen upon treatments of gibberellins (GA), abscisic acid (ABA), and indole butyric acid (IBA). Each of the GbIDS1 and GbIDS2 overexpression construct was introduced into poplars. Ten GbIDS1 overexpression lines were obtained while no transformants were made with GbIDS2. GbIDS1 transgenic poplars were taller than wild-type (WT) BH poplars by 25% and have 2 more leaves in indoor condition 7 weeks after potting in soil. Twenty five weeks after potting in outdoor nursery, GbIDS1 plants in pot gained height by 7% compared to BH, and showed delayed winter bud formation. In addition, overexpression of GbIDS1 gene led increase of chlorophyll and carotenoid contents by approximately 20% in transgenic poplars compared to WT poplars. Chlorophyll-related genes, CHS (chlorophyll synthase) and CAO (chlorophyll a oxidase) transcript levels were higher in transgenic poplars by 30% and 50% respectively. Transcript level analyses of GA biosynthetic genes, KS (kaurene synthase), GA20ox (gibberellin 20 oxidase), and GA2ox (gibberellin 2 oxidase), were performed in poplar. In this analysis, transcript levels of bioactive GA synthesis gene, KS and GA20ox, were up-regulated while GA inactivation gene, GA2ox, was down-regulated in transgenic poplars. In spite of signal peptide deletion, tGbIDS2 (truncated GbIDS2 devoid of signal peptide) targeted to the chloroplast. In the heterozygote Arabidopsis plants, overexpression of tGbIDS2 was previously reported to lead rapid growth and early flowering. However, in homozygote tGbIDS2 overexpression transgenic Arabidopsis in the current research, there were no significant phenotype changes compared to the Col-0 wild type (WT). Besides, little changes were observed in chlorophyll and carotenoids contents in transgenic and Col-0 Arabidopsis plants. On the other hand, transcript levels of floral genes and GA4 displayed differences between WT and transgenic Arabidopsis plants. CO (CONSTANTS) levels were up-regulated by 60% but FLC (FLOWERING LOCUS C), SOC1 (SUPPRESSOR OF OVEREXPRESSION OF CO1), and LFY (LEAFY) were down-regulated by 26%, 32%, and 24%, respectively. Also transcript level of GA4 gene increased by 56% in transgenic Arabidopsis, it infers decrease of GA amounts in transgenic Arabidopsis. Through these experiments, physiological differences of each GbIDS were examined, and applicability of GbIDSs for genetic engineering was evaluated.CONTENTS OVERALL ABSTRACT CONTENTS LIST OF FIGURES LIST OF TABLES LIST OFABBREVIATIONS LITERATURE REVIEW 1. Ginkgo biloba 2. Ginkgolides 3. Isoprenoid biosynthesis 4. MEP pathway in plants 5. (E)-4-Hydroxy-3-mehtylbut-2-enyl Diphosphate Reductase/Isopentenyl diphosphate synthase (HDR/IDS) in plants 6. GA biosynthesis 7. Flowering in Arabidopsis PART І: Distinct expression patterns of two Ginkgo biloba (E)-4-Hydroxy-3-methylbut-2-enyl Diphosphate Reductase/Isopentyl Diphosphate Synthase (HDR/IDS) promoters in Arabidopsis model 1.1. ABSTRACT 1.2. INTRODUCTION 1.3. MATERIALS AND METHODS 1.3.1. Plants and growth condition 1.3.2. Isolation and analysis of GbIDS1 and GbIDS2 promoters 1.3.3. Construction of plasmids and Arabidopsis transformation 1.3.4. Histochemical GUS assay 1.3.5. GUS activity assay 1.3.6. RNA preparation and reverse transcription 1.3.7. Hormone treatments 1.3.8. RT-PCR and qRT-PCR 1.4. RESULTS 1.4.1. Isolation of GbIDS1 and GbIDS2 promoters 1.4.2. Histochemical analysis of GbIDSpro-driven GUS expression in Arabidopsis 1.4.3. Responsiveness of GbIDS promoters in Arabidopsis toward hormone treatments 1.4.4. Transcript distribution of GbIDS1 and GbIDS2 in Ginkgo 1.4.5. GbIDS1 and GbIDS2 transcript level changes in Ginkgo by MeJA and SA treatments 1.5. DISCUSSION 1.6. ABSTRACT IN KOREAN PART Π: Functional study of Ginkgo biloba (E)-4-Hydroxy-3-methylbut-2-enyl Diphosphate Reductase/Isopentenyl Diphosphate Synthase (HDR/IDS) gene in Poplar 2.1. ABSTRACT 2.2. INTRODUCTION 2.3. MATERIALS AND METHODS 2.3.1. Construction of plasmid 2.3.2. Poplar transformation and regeneration 2.3.3. Phenotypic assessment 2.3.4. Measurement of chlorophyll and carotenoid contents 2.3.5. RNA preparation and reverse transcription 2.3.6. qRT-PCR analysis 2.3.7. Statistical analysis 2.4. RESULTS 2.4.1. Establishment of transgenic poplars 2.4.2. RT-PCR analysis 2.4.3. Growth assessment of GbIDS1 overexpression poplar 2.4.4. Chlorophyll and carotenoid contents 2.4.5. Transcript level of chlorophyll related genes 2.4.6. Transcript level of GA related genes 2.5. DISCUSSION 2.6. ABSTRACT IN KOREAN PART Ш: Functional analysis of truncated form Ginkgo biloba (E)-4-Hydroxy-3-methylbut-2-enyl Diphosphate Reductase/Isopentenyl Diphosphate Synthase (HDR/IDS) 2 gene in Arabidopsis 3.1. ABSTRACT 3.2. INTRODUCTION 3.3. MATERIALS AND METHODS 3.3.1. Construction of plasmid 3.3.2. Arabidopsis growth condition and transformation 3.3.3. Transient expression in Arabidopsis protoplast 3.3.4. Phenotypic assessment 3.3.5. Measurement of chlorophyll and carotenoid contents 3.3.6. RNA preparation and reverse transcription 3.3.7. qRT-PCR analysis 3.3.8. Statistical analysis 3.4. RESULTS 3.4.1. RT-PCR analysis 3.4.2. Targeting analysis of tGbIDS2 in Arabidopsis protoplasts 3.4.3. Growth and flowering time of tGbIDS2 overexpression transgenic Arabidopsis 3.4.4. Chlorophyll and carotenoid contents 3.4.5. Transcript levels of floral genes 3.4.6. Transcript level GA4 gene 3.5. DISCUSSION 3.6. ABSTRACT IN KOREAN OVERALL ABSTRACT IN KOREAN REFERENCESDocto

Relationship between onset age of coronary heart disease and family histiry of coronary heat disease

역학 및 건강증진학과/석사[한글] 이 연구는 관상동맥 질환의 가족력 있는 집단에서 나타나는 위험요인들의 특성들을 알아보고, 가족력 여부가 관상동맥 질환의 발생 연령에 미치는 영향을 알아보고자 하였다. 연구 대상은 1994년 7월부터 2003년 8월 까지 서울 소재 종합병원에서 관상동맥 조영술을 시행하여 관상동맥 질환 진단을 받은 4194명이었다. 자료 수집은 직접 interview 및 chart review, 전화 interview를 통해 고혈압 유무, 흡연 유무, 당뇨유무, 여자의 겨우 폐경 여부, 가족력 유무, 가족력 있는 가족과의 관계, 가족력 있는 가족의 수, 가족력 있는 가족의 진단명 등을 조사하였고, 입원 시 정규 혈액 검사를 통하여 지질 수준으로 총 콜레스테롤, 중성지방, HDL- 콜레스테롤, LDL-콜레스테롤, 혈액 응고 인자로는 Fibrinogen, tissue Plasminogen Activator (t-PA), Plasminogen Activator Inhibitor (PAI-1), 지단백 수준으로는 Apolipoprotein A1(Apo-A1), Apolipoprotein B(Apo-B), Lipoprotein a(Lp a) 와, Homocystein을 포함시키고, inflammatory marker로 C-reactive protein (CRP)를 조사하였다. 통계 분석은 SAS Ver. 8.1을 사용 하였다. 연구 결과는 다음과 같다. 첫째, 관상동맥 질환의 가족력이 있는 집단에서는 관상동맥 질환의 발생 연령이 가족력이 없는 집단에 비해 남녀 각각 약 3-4세 낮았다. 둘째, 연령을 통제하여 가족력 유무에 따라 두 군으로 나누어 다른 위험요인을 비교 하였을 때, 가족력이 있는 남자 군에서 키, 총콜레스테롤, LDL-콜레스테롤, LDL/HDL, Apo-B가 가족력이 없는 남자 군에 비해 높았다. 셋째, 지질 수준과 흡연 등의 중요 위험 요인들이 같은 조건일 때 가족력이 있는 군에서 없는 군에 비해 관상동맥 발생 연령이 낮았다. 넷째, 가족력은 관상동맥 질환의 발생 연령을 약 4세 정도 낮추는 독립적 위험인자이다. 이상의 연구결과를 종합하여 보면, 남자에 있어서 가족력과 지질 수준에서 연관성을 보이고 있으며, 가족력은 관상동맥 질환의 발생 연령에 영향을 주는 독립적 요인이다. 이 연구는 앞으로 관상동맥 질환의 가족력과 연관되어 주요 유전자를 찾는 연구의 기초가 되고 관상동맥 질환의 고 위험 가족에 있어 예방 및 관리의 지침을 세우는데 도움이 될 것이다. [영문]The aim of this study was to investigate relationship between onset age of coronary heart disease and family history of coronary heart disease. We analyzed the major risk factors in 4194 coronary heart disease patients. 247 subjects (6%)had family history of coronary heart disease(FCAD), 3947 subjects had not family history(NFCAD). The patients were diagnosed as coronary heart disease by coronary angiography at the Samsung Medical Center from Jun 1994 to Aug 2003. The mean age of the group of FCAD was significantly younger than that of the group of NFCAD. The means of Total cholesterol (TC), LDL-cholesterol, the ratio of LDL/HDL and Apo-B were significantly higher in the group of male with family history of coronary heart disease, not in the group of female. In the same condition of other risk factors (lipid profile and smoking), the onset age of coronary heart disease was lower r in the group FCAD. this study showed family history influenced onset age of coronary heart disease to be earlier for 4 year by the multivariate regression analysis. In the conclusion, the group of FCAD showed significantly younger age, higher TC, LDL, LDL/HDL and Apo-B compared with those of the group of NFCAD in the male patients, suggesting a genetic predisposition related to TC and LDL metabolism especially in male patients. and family history was found to be an independent factor for earlier onset age of coronary heart disease.prohibitio

Relationship between the formation of N-type Ca2+ channels and dopamine release in the differentiation of dopaminergic

의과학과/석사[한글]파킨슨씨병은 중뇌의 흑색질 치밀부(substantia nigra pars compacta, SNpc)에 있는 도파민신경세포의 손실에 의해 나타나는 대표적인 신경퇴행성 질환이다. 예전부터 파킨슨씨병을 치료하기 위한 연구가 진행되어 왔으며, 최근에 세포치료의 새로운 재료로 줄기세포가 대두되어 연구가 활발히 진행되고 있다. 본 연구실에서도 쥐의 배아줄기세포에서 분화시킨 도파민 신경세포(또는 전구체)를 파킨슨씨병 동물모델의 선조체에 이식한 후, 운동 기능 회복을 확인한 논문을 발표하였으며, 꾸준히 배아줄기세포를 이용한 파킨슨씨병 치료가능성이 동물모델을 통해 확인되어지고 있다. 그러나 배아줄기세포로부터 분화시킨 도파민 신경세포가 생체내로 이식 후 어떠한 세포 생리학적인 메커니즘을 통해 도파민을 분비하는지에 관한 연구는 미비한 실정이다. 도파민 신경세포에서 도파민의 분비는 세포막의 탈분극에 의해 Ca2+ 채널이 열려 이를 통해 세포외부에서 유입된 Ca2+ ions에 의해 유도된다. 이에 본 연구는 쥐의 배아줄기세포에서 분화시킨 도파민 신경세포에서 전기생리학적인 방법과 면역염색법을 통해 Ca2+ 채널과 도파민 분비와의 관계를 알아보고자 하였다. Ca2+ ratiometic 〔Ca2+〕i 측정법을 통해 막전압 탈분극에 의한 세포내 Ca2+ 농도의 증가를 확인하고, HPLC를 통해 도파민의 분비량이 증가한 것을 관찰함으로써 세포내 유입된 Ca2+ ions이 도파민의 분비에 관여하는 것을 알 수 있었다. 반면에, N-type Ca2+ channel blocker인 ω-conotoxin GVIA를 KCl과 같이 처리한 그룹은 KCl만 처리한 그룹보다 도파민 분비량이 감소한 것으로 보아, 쥐의 배아줄기세포에서 분화한 도파민신경세포에 N-type Ca2+ channel이 형성되어 기능을 하고 있음을 알 수 있었다. 또한 Whole cell 막전압 고정법과 형광면역염색을 통해서도 N-type Ca2+ channel이 형성된 것을 확인하였다. 이러한 결과로 볼때, 쥐의 배아줄기세포에서 분화시킨 도파민신경세포에 N-type Ca2+ channel이 형성되어 도파민의 분비에 관여함을 알 수 있다. [영문]Parkinson's disease (PD) is the most common neurodegenerative disease caused by loss of dopaminergic neurons in the substantia nigra pars compacta (SNpc) of the midbrain. For decades there have been many attempts to develop proper treatments for this disease. Recently, with the new technology of stem cells, research on cell therapy has been accelerated. We have also confirmed the recovery of motor function after implanting dopaminergic neurons (or precursors) derived from mouse embryonic stem (ES) cells into striatum of PD animal models, as feasible treatments applying stem cell technology have been identified. However, the physiological mechanism of dopamine (DA) release in response to transplantation of dopaminergic neurons derived from mouse ES cells is uncertain. DA release in dopaminergic neurons is induced by Ca2+ ion influx through Ca2+ channels in response to membrane depolarization. Herein, the purpose is to elucidate the relationship between Ca2+ channels and DA release in dopaminergic neurons derived from mouse ES cells by electrophysiological experiments and immunostaining. Firstly, the attempt to clarify the increase in DA release observed by HPLC made it clear that the influx of Ca2+ ions induced DA release. Secondly, decrease in DA release was observed with conotoxin GVIA (N-type Ca2+ channel blocker) with a KCl group compared to the KCl group only. This implies that the N-type Ca2+ channels formed in dopaminergic neurons derived from mouse ES cells function properly. Furthermore, N-type Ca2+ channels were identified with the whole cell patch clamp technique and immunofluorescence-staining. These results lead to the conclusion that the N-type Ca2+ channels were formed in dopaminergic neurons derived from mouse ES cells and that Ca2+ channels activated by Ca2+ ion influx in response to membrane depolarization caused DA release.ope

산화적 스트레스 의한 신경세포 사멸에 대한 겨자과 식물에 있는 베타-페네틸-아이소시오사이아네이트와 비타민 C의 복합 효과

Thesis(master`s)--서울대학교 대학원 :농생명공학부,2005.Maste

쓰기 윤리 교육의 내용 연구

학위논문 (박사)-- 서울대학교 대학원 : 국어교육과(국어교육전공), 2013. 8. 김종철.본 연구의 목적은 국어과 교육의 내용으로서 쓰기 윤리에 대한 구체적인 교육 방안을 구안하는 데 있다. 이를 위해 본고에서는 다음과 같은 연구 문제를 설정하였다. 첫째, 우리의 전통적인 언어문화와 학생들에게 필요한 핵심 역량 등을 고려할 때, 국어과 교육에서 다루어야 할 쓰기 윤리의 개념 및 특성은 무엇인가? 둘째, 쓰기 윤리의 실천에 관여하는 요소와 하위 범주는 어떻게 규정할 수 있는가? 셋째, 쓰기 윤리 교육의 목표는 무엇이며, 구체적인 교육 내용은 어떻게 구성할 수 있는가? 본 연구에서는 인터넷과 같은 매체를 통하여 검색한 자료를 글쓰기에 활용하는 방식이 보편화하고 있고, 이 과정에서 표절과 같은 쓰기 윤리 문제가 첨예하게 드러난다는 점에 주목하여 자료 통합적 글쓰기를 논의의 주된 대상으로 삼았다. 연구 방법으로는 문헌 연구와 질적 내용 분석(qualitative content analysis) 방법을 활용하였다. 먼저 문헌 연구를 통해 말하기와 쓰기에서의 윤리에 대한 논의를 고찰하였고, 쓰기 과정에서 윤리적 요소의 관련 양상에 대한 분석틀을 개발하기 위해, 레스트의 4-구성 요소 모형(Four-Component Model)과 윤리적 정체성(moral identity) 이론의 적합성에 대해 검토하였다. 질적 내용 분석 방법은 고등학교 1, 2학년 학생들이 작성한 173편의 글과 쓰기 과정에서 활용한 학습지 및 심층 설문지의 분석에 적용하였다. Ⅱ장에서는 유교적 소통 문화와 수사학의 논의를 고찰하여, 쓰기 윤리에 대한 개념 및 특성을 규정하였다. 쓰기 윤리 교육은 윤리 의식 그 자체보다는 쓰기 윤리를 준수하며 글을 쓰는 능력을 길러주어야 한다. 이러한 관점에서 연구자는 윤리적 글쓰기를 쓰기 윤리의 실천으로 간주하고 필자가 텍스트의 윤리성을 갖추기 위해, 쓰기 윤리를 지키면서 글을 쓰는 과정 또는 행위로 정의하였다. 그리고 윤리적 글쓰기의 구성 요소를 행위 주체의 윤리적 실천, 텍스트의 윤리성, 담화공동체의 쓰기 윤리 관련 맥락으로 설정하였으며, 자료 통합적 텍스트 쓰기를 예로 들어 이러한 구성 요소들이 실제적인 글쓰기에서 어떻게 상호작용하는지 살펴보았다. Ⅲ장에서는 학생들이 작성한 텍스트에 대한 내용 분석 결과를 제시하였다. 윤리적 글쓰기의 교육 내용을 설계하기 위해서는 먼저 쓰기 과정에서 쓰기 윤리가 어떻게 관련되는지 살펴보는 것이 중요하다. 따라서 1절에서는 쓰기 과제 분석 단계, 자료 읽기 및 관점 정립 단계, 내용 선정 및 조직 단계, 자료 통합 및 표현 단계, 고쳐쓰기 단계에 따른 쓰기 윤리의 관련 양상을 분석하였다. 2절에서는 윤리적 글쓰기에 영향을 미칠 수 있는 필자의 개인적 특성을 살펴보았으며, 하위 항목은 쓰기의 윤리적 측면에 대한 민감성, 필자로서의 윤리적 정체성 및 윤리적 정서, 문제 해결에 필요한 윤리적 판단력, 쓰기 효능감과 자기 규제 능력이며, 이러한 항목들은 레스트의 이론과 윤리적 정체성 이론을 활용하여 구성하였다. 학생들이 윤리적 글쓰기에 대한 담화공동체의 영향으로 언급한 내용들은 주로 국어 수업과 관련되어 있으므로, 3절은 담화공동체로서의 국어 수업, 교사의 평가 운영 방식과 윤리적 동기화로 구성하였다. Ⅳ장에서는 Ⅲ장까지의 논의를 바탕으로 쓰기 윤리 교육의 내용을 설계하였다. 먼저 쓰기 윤리 교육의 목표로 핵심 역량으로서의 윤리적 글쓰기 능력, 필자의 윤리적 정체성 형성과 인성교육, 담화공동체의 윤리적 소통 문화 형성 및 소통의 생산성 제고 등 세 가지를 설정하였다. 쓰기 윤리 교육의 내용 범주는 필자로서의 정체성, 대상과의 관계 형성, 소통적 합리성으로 구성하고, 각 범주에 따른 교육 내용을 상세화하였다.Ⅰ. 서론 1 1. 연구의 목적과 필요성 1 2. 연구사 6 3. 연구 방법 11 II. 쓰기 윤리 교육의 이론적 배경 17 1. 쓰기 윤리에 대한 학제적 접근 17 1) 전통적 소통 문화와 윤리 17 (1) 인(仁)과 예(禮)를 통한 윤리적 소통 19 (2) 필자의 윤리성과 글의 윤리성 21 2) 수사학과 윤리 25 (1) 소통 행위의 윤리성 26 (2) 에토스와 파토스의 윤리 27 (3) 신수사학에서의 작문과 윤리 29 3) 도덕 심리학과 쓰기 윤리의 실천 31 (1) 윤리적 행위에 필요한 구성 요소 32 (2) 윤리적 정체성에 의한 윤리적 동기화 45 2. 쓰기 윤리와 윤리적 글쓰기 50 1) 윤리적 글쓰기의 개념 및 특성 50 (1) 쓰기의 본질 구현으로서의 윤리적 글쓰기 53 (2) 쓰기 윤리의 실천으로서의 윤리적 글쓰기 56 2) 윤리적 글쓰기의 구성 요소 59 (1) 행위 주체의 윤리적 실천 59 (2) 텍스트의 윤리성 62 (3) 담화공동체의 쓰기 윤리 관련 맥락 63 3) 쓰기 실제에서의 쓰기 윤리 65 (1) 자료 통합적 글쓰기의 개념 65 (2) 자료 통합적 글쓰기의 윤리적 소통 구조 66 III. 쓰기 과정에서 쓰기 윤리의 관련 양상 및 영향 요인 73 1. 쓰기 과정에서의 쓰기 윤리 관련 양상 76 1) 쓰기 과제 분석 단계 77 (1) 쓰기 윤리 적용 대상 파악하기 78 (2) 장르적 특성과 쓰기 윤리 관련짓기 81 (3) 과제 수행에 따른 윤리적 결과 예상하기 87 2) 자료 읽기 및 관점 정립 단계 89 (1) 객관적인 태도로 자료 읽기 89 (2) 화제에 대한 지식 재구성하기 91 (3) 다양한 관점에 대한 평가 및 자신의 관점 정하기 100 3) 내용 선정 및 조직 단계 103 (1) 신뢰성 있는 내용 선정하기 103 (2) 창의적으로 내용 조직하기 107 4) 자료 통합 및 표현 단계 113 (1) 정당한 방식으로 자료 통합하기 113 (2) 자료에 의존하지 않고 내용 전개하기 121 (3) 대상에 대한 윤리적 태도 표현하기 131 5) 고쳐쓰기 단계 133 2. 윤리적 글쓰기에 영향을 미치는 요인 139 1) 필자의 개인적 특성 139 (1) 쓰기의 윤리적 측면에 대한 민감성 139 (2) 필자로서의 윤리적 정체성 및 윤리적 정서 141 (3) 문제 해결에 필요한 윤리적 판단력 145 (4) 윤리적 글쓰기를 지속할 수 있는 자질 153 2) 담화공동체의 쓰기 문화 157 (1) 담화공동체로서의 국어 수업 159 (2) 교사의 쓰기 평가 방식 160 IV. 쓰기 윤리 교육의 내용 설계 164 1. 쓰기 윤리 교육의 목표 164 1) 핵심 역량으로서의 윤리적 글쓰기 능력 164 2) 필자의 윤리적 정체성 형성과 인성교육 170 3) 담화공동체의 윤리적 소통 문화 형성 및 소통의 생산성 제고 171 2. 쓰기 윤리 교육의 내용 구성 173 1) 쓰기 윤리 교육의 내용 구조 173 2) 쓰기 윤리 교육의 내용 범주 175 (1) 필자 범주 175 (2) 담화공동체 범주 178 (3) 텍스트 범주 179 3) 쓰기 윤리 교육 내용의 상세화 182 4) 쓰기 윤리 교육 내용의 적용 원리 204 V. 결론 211 1. 요약 211 2. 제언 213 참고 문헌 217 Abstract 235Docto