嗜虫耶尔森氏菌HlyA及HasA外分泌表达系统的构建

【目的】构建一株具备外分泌蛋白功能的工程菌,解决杀虫毒素无法由胞内分泌至胞外,无法直接作用于虫体等问题,为松墨天牛防治提供新思路。【方法】本研究先测定从松墨天牛肠道及其生境中分离出的嗜虫耶尔森氏菌(CSLH88)的生长特性及抗性,进而对其进行分子改造。构建HlyA (pGHKW2)以及HasA (pGHKW4)外分泌表达载体,利用电穿孔法将其转入CSLH88菌株,获得能够表达绿色荧光蛋白的工程菌。利用稀释涂板及荧光体式镜检测技术对两个质粒进行遗传稳定性检测,并采用SDS-PAGE及Western blotting技术验证蛋白外分泌功能。【结果】CSLH88菌株培养2–4 h能够进入对数生长期,并对卡那霉素(Kan)敏感。成功构建了含有Kan抗性基因的pGHKW2(GenBank:MK562405)和pGHKW4(GenBank:MK562404)两个外分泌表达载体的CSLH88工程菌株。其中,发现pGHKW4质粒更加适合在嗜虫耶尔森氏菌中稳定遗传。SDS-PAGE及Western blotting检测结果表明HlyA系统无法在CSLH88菌株中将目的蛋白分泌到胞外,而HasA系统则可以有效地发挥外分泌表达功能。【结论】通过对HlyA及HasA两个外分泌表达系统进行研究,从中筛选出HasA型血红素转运系统作为CSLH88菌株的外分泌表达系统,为后续外分泌杀虫毒素蛋白菌株构建以及CSLH88菌株的致病性研究奠定基础。国家重点研发计划课题(2017YFD0600105);;\n国家自然科学基金(31601905);;\n福建省科技厅自然科学基金(2016J01097);;\n福建省科技计划项目(2018N5002);;\n福建农林大学科研基金(xjq201614);福建农林大学林学院林学高峰学科项目(71201800720,71201800753,71201800779);;\n福建省大学生创新创业训练计划项目(201810389102);;\n福建省林业科学研究项目[Minlinke(2017)03]~

微藻食用油脂的提取与净化

近年来，使用微藻生产食用油脂进入了人们的视野。微藻油脂以甘油三酯为主，脂肪酸组成与植物油类似，有些还含有极具健康价值的多不饱和脂肪酸。本文考察了几种常见富油微藻生产食用油脂的潜力，并以微拟球藻藻粉为原料，建立了富含多不饱和脂肪酸的微藻油脂提取和精炼工艺。考察了小球藻、栅藻和微拟球藻油脂和藻渣应用于生产食用油的前景。使用适用于食用油生产的正己烷获得微藻油脂，小球藻和微拟球藻油脂收率均在50%左右，是栅藻的两倍，且小球藻藻油的中性脂含量最高；三种藻油脂的中性脂脂肪酸组成均以C16和18脂肪酸为主，微拟球藻中还含有具有保健功能的ARA和EPA；植醇是三种藻藻油中不皂化物的主要成分，小球藻藻油中含有有益于人体健康的麦角甾醇；微拟球藻藻油具有最高的抗氧化活性。三种藻渣都具有较高的蛋白质含量，微拟球藻藻渣蛋白最符合人类需要。综合来看，使用小球藻生产烹调食用油最为经济；而微拟球藻适合生产具有保健作用的功能性油脂，其藻渣也可生产为优质蛋白产品。以微拟球藻粉为原料，建立了藻油提取工艺。提取温度和时间的适当提高和延长有助于EPA的提取；针对藻油的一次提取，使用正己烷作为提取溶剂，选择1:20 (g/mL)的固液比，在60℃下提取8-10 h即可。相较使用新鲜溶剂，混合油提取时油脂得率下降幅度不大，且在本实验的最佳条件（提取温度为60℃，提取时间为10 h）下，使用混合油提取比使用新鲜溶剂提取的溶剂用量减少了47.3%。使用正己烷对藻渣进行二次提取4 h即可达平衡，油脂得率达到了23%左右。超声法促进油脂释放效果最好，油脂得率提高了43.0%。参考食用油质量标准和精炼步骤，确立了针对微藻毛油的精炼工艺。发现水化脱胶法藻油脱胶率略低于酸法和超滤法，但其最为简单，脱胶效果也可以接受。对于溶剂脱酸，随甲醇用量的加大，藻油脱酸率提高到约49.5%后不再明显变化，而油脂收率持续降低、EPA损失率不断升高；对于碱炼脱酸，随NaOH加入浓度的增大，可接近完全去除游离脂肪酸，且油脂回收率保持在93-94%左右；使用粉末活性炭达到95%以上的藻油脱色率时，油脂收率为77.5%，EPA的损失率为62.7%。所选择的精炼工艺为：针对含有4mg藻油/mL的混合油，加热到55℃，使用混合油体积10-20%的65℃水作用30 min脱胶；采用碱炼脱酸法，在55℃下，添加120%理论碱量的氢氧化钠溶液作用30 min脱酸；使用4 mg/mL混合油添加量的粉末活性炭在60℃下作用30 min可达95%以上的藻油脱色率。精炼后藻油中的EPA含量降为6.28%，但极性脂和游离脂肪酸含量大幅下降。</p

建筑桩基工程中桩端后注浆施工技术探究

在最近几年的发展中，钻孔灌注喷射技术已经成熟，并向直径大、多样化、大长度、标准规模化等方向发展，基于此，文章研究建筑桩基工程中桩端后注浆施工技术相关内容，以某一项目为基础，从技术原理、施工准备、展开施工、施工注意事项四方面入手进行总结，提高建筑桩基工程质量水平。</jats:p

绿色节能新工艺在建筑工程施工的运用分析

在社会快速发展的影响下，使得各个领域都得到了全面的发展进步，在这个过程中大量的资源被开发利用，从而使得能源资源匮乏的问题越发的凸现出来。要想保证人类社会能够与生态环境和谐发展，那么最为重要的就是全面推行绿色节能理念，提升各类能源资源的利用效率。将绿色节能工艺在建筑工程施工工作中加以实践运用，能够有效的控制能源的损害，实现环保节能的效果，促使建筑项目能够获得更加丰厚的经济和社会效益。鉴于此，这篇文章主要针对节能新工艺在建筑工程施工中的实践运用展开全面深入的研究分析，希望能够对我国社会和谐稳定发展起到积极的影响作用。</jats:p