哮喘模型大鼠肺组织一氧化氮合酶的分布

研究一氧化氮 (NO)在哮喘大鼠肺组织中的作用。采用组化法观察一氧化氮合酶 (NOS)在大鼠哮喘模型肺组织中的分布 ,应用免疫组化法观察大鼠哮喘模型气道mIL 2R+ 细胞变化。结果显示 ,哮喘大鼠肺NADPH染色呈强阳性 ,并波及肺泡膈。肺组织中NOS含量明显高于对照组 [哮喘组 (37 44± 0 77)pmol/mg,对照组 (8 73± 0 79)pmol/mg],气道炎性细胞增多 ,特别是mIL 2R+ 细胞 [哮喘组mIL 2R+ 细胞为 (2 3 8± 7 9)个 ,对照组为 0个 ],而NOS抑制剂DMA组气道炎性细胞少 ,NADPH呈阴性。提示NO是哮喘大鼠的炎性效应分子

抗胸腺细胞血清性肾炎模型大鼠肾小球中C5b-9的沉积及NO、TNFα含量分析

探讨抗胸腺细胞血清性肾炎 (ATSN)大鼠肾小球内C5b -9复合物的沉积与某些炎症介质和细胞因子如 :一氧化氮 (NO)和肿瘤坏死因子α(TNFα)的含量情况。方法 :大鼠一次性静脉注射抗胸腺细胞抗血清(ATS)建立ATSN模型 ,定期对ATSN大鼠肾小球中的补体C5b -9复合物进行免疫组化染色定位、显微图像扫描半定量分析 ;并对有C5b -9包绕的肾小球系膜细胞 (MC)进行计数。测定ATSN大鼠肾中诱生型NO合酶 (iNOS)mRNA的表达、尿液中NO的代谢产物 (NO-2 /NO-3 )及TNFα的排泄量。结果 :ATSN模型大鼠肾小球MC先溶解坏死后继发增生 ,病变早期 (溶解时相 )补体C5b -9复合物主要定位于肾小球系膜区及MC表面 ;随着病程的进展 ,被C5b -9包绕的MC逐渐减少 ,病程初期ATSN大鼠肾小球MC有明显的iNOSmRNA表达 ,尿液中NO-2 /NO-3 和TNFα的排泄量也明显增加。在ATSN病变的增生阶段 (一般 7d后 ) ,上述指标的变化逐渐趋缓。结论 :ATSN模型大鼠肾小球中MC逐渐溶解与补体C5b -9沉积及NO和TNFα的合成与释放有一定关

新生小鼠皮肤成纤维细胞的分离培养与鉴定

目的:建立一种简单易行的自新生小鼠皮肤分离培养成纤维细胞的方法,并对分离细胞进行鉴定。方法:无菌取新生Balb/c小鼠背部皮肤,剪碎呈1 mm2大小,组织块均匀放置于培养皿并以DMEM(含10%胎牛血清)培养基对组织块进行培养;以胰蛋白酶消化分离细胞-重新贴壁法对分离培养细胞进行纯化;以NIH3T3细胞为对照,免疫荧光、流式细胞术、Western blot检测波形蛋白表达情况以对培养的成纤维细胞进行鉴定。结果:新生小鼠背部皮肤组织培养3 d时可见细胞呈细长梭形或呈多角形,组织培养5 d后可见大量细胞自组织块游离生长,组织培养7 d后可见细胞呈单层漩涡状排列或纵横交错,贴壁细胞团呈放射状生长。免疫荧光、流式细胞术、Western blot检测发现分离细胞和NIH3T3细胞均表达波形蛋白;流式细胞术证实分离的成纤维细胞波形蛋白表达阳性率和平均荧光密度分别为13.33%和9.89,而NIH3T3细胞波形蛋白阳性率和平均荧光密度分别为28.11%和14.16。结论:分离培养的细胞具有成纤维细胞的形态学特征,并表达成纤维细胞的特征分子波形蛋白。以组织块直接培养法成功自新生小鼠皮肤分离培养成纤维细胞,为建立肿瘤体外模拟微环境提供实验材料和研究基础

补体C5b-9复合物刺激大鼠肾小球系膜细胞合成NO的机制探讨

探讨人C5b - 9复合物刺激大鼠肾小球系膜细胞 (MC)合成一氧化氮 (NO)的机制。方法 :用人C5b - 9复合物刺激培养的大鼠肾小球MC诱生肿瘤坏死因子α(TNFα)和白细胞介素 1β(IL - 1β) ,并用抗TNFα或抗IL- 1β单克隆抗体进行处理。在上述基础上 ,分析处理 3h、6h及 2 4h时与NO升高有关的某些指标的变化。 结果 :经C5b - 9复合物刺激 6、2 4h后的MC (C5b - 9组 )产生TNFα明显高于对照组 ,并能被TNFα单抗逆转。用C5b - 9复合物刺激MC未见IL - 1β的产生。另用C5b - 9刺激 3h时可见MC表达iNOSmRNA ,而在刺激 6h和 2 4h时 ,MCiNOSmRNA表达 ,MC内cGMP含量及培养上清液中NO-3/NO-2 含量均显著高于对照组。不过 ,C5b - 9刺激时加用TNFα单抗处理 ,这些指标在 6h、2 4h时均较C5b - 9组低。结论 :C5b - 9复合物早期 ( 3h)能诱导MC表达iNOSmRNA ,而 6h后NO的升高则与MC释放的TNFα作用有关

Function of Helper T Cells in the Memory CTL-mediated Anti-tumor Immunity

　To investigate the role of CD4 + helper T (Th) cells in the memory CTL2mediated anti2tumor immunity , the RAG21 gene knock out mice were adoptively transferred with OT21 cells to generate the memory CTL , the C57BLP6 mice im2 munized with the epitope peptide of OVA specific Th cells and with different adjuvants were adoptively transferred with these memory2CTLs , and then the animals were challenged with tumor cells EG7. It was found that although the simple immuniza2 tion of mice with the epitope peptide of the OVA specific Th cells could generate more effect CTL , but this effect was not so strong enough to resist completely the challenges with tumor cells. Nevertheless , the memory CTL2mediated anti2tumor im2 mune effect required the helps of Th1 and Th2 cells. The cross2regulation between Th1 and Th2 cells seemed to be beneficial for the host to generate more effector CTL for mounting an efficient anti2tumor response. It concluded that the interaction be2 tween Th1 and Th2 cells might be more important than the single subset of Th cells in the memory CTL2mediated anti2tumor immune response. More attention should be paid in this regard for the future studies

HBV整合的致癌性研究

HBV的4个亚基因产物中,HBx具有反式激活、介导细胞凋亡作用,HBs具有反式激活因子的作用。肝细胞癌(HCC)的发生与HBV的整合及整合后染色体重排有关。为探讨HBV整合及HBx、HBs亚基因在HCC发生中的可能作用,我们制备了HBV亚基因探针,并以此对肝细胞癌中HBV整合及亚基因转录进行了研究,以期为阐明HBV感染后HCC发生机制提供一定的实验资料和依据。本研究中,首先以BamHⅠ、BglⅡ酶切扩增回收的HBVDNA ,回收其HBV亚基因HBx、HBc、HBs、PreSDNA片段,以地高辛甙元随机引物法标记成敏感性与特异性俱佳的HBV亚基因探针,再以HBV探针点杂交检测HCC标本中HBVDNA的阳性率,对阳性的标本,继以Southern转膜杂交检测其整合情况,最后取HBVDNA阳性的HCC标本,按经典方法抽提其mRNA ,分别以HBV亚基因探针Northern转膜杂交检测亚基因的表达率。结果显示:4 4例HCC标本中,75 %的标本显示有HBVDNA的存在;Southern杂交分析,HBV纯整合型HCC为6 3.6 % ,混合型HCC为36 .4 % ,未见单纯游离型HCC标本存在;17例HBVDNA阳性..

T_H细胞在记忆性CTL介导的肿瘤抑制中的作用研究

观察记忆性CTL的抑瘤作用是否需要抗原特异性TH 细胞的辅助。方法　表达OVAT细胞表位SIINFEKL特异性TCR的T细胞转输RAG- - 小鼠,经相应T细胞表位多肽刺激后产生记忆性CTL ,将此记忆性CTL转输已产生特异性和非特异性TH 细胞的C5 7BL 6小鼠体内并接种肿瘤细胞EG7。结果　经T细胞表位多肽免疫后,SIINFEKL特异性TCRT细胞成功在RAG- - 小鼠体内增殖并分化为记忆性CTL ;抗原特异性TH 细胞可辅助产生较多效应性CTL但并没有完全的肿瘤抑制作用;记忆性CTL的完全抑瘤活性需要抗原特异性TH 细胞的辅助。结论　机体对肿瘤的长期完全杀伤作用不但需要肿瘤特异性抗原诱导产生的记忆性CTL ,而且需要特异性TH 细胞的辅助,肿瘤疫苗的设计必须包括特异性的CTL表位多肽和辅助性TH 细胞多肽

Requirement of the phosphatidylinositol 3-kinase/Akt signaling pathway for the effect of nicotine on interleukin-1beta-induced chondrocyte apoptosis in a rat model of osteoarthritis

National Natural Science Foundation of China [81072015]; Natural Science Foundation of Fujian, China [2010D007]; Medical Innovation Foundation of Fujian, China [2011-CXB-36]; Xiamen Science and Technology Key program grant, Fujian, ChinaChondrocyte apoptosis is mainly responsible for the progressive degeneration of cartilage in osteoarthritis (OA). Interleukin-1beta (IL-1 beta) was widely used as a modulating and chondrocyte apoptosis-inducing agent. Nicotine is able to confer resistance to apoptosis and promote cell survival in some cell lines, but its regulatory mechanism is ambiguous. We aimed to investigate the effect of nicotine on IL-1 beta-induced chondrocyte apoptosis and the mechanism underlying how nicotine antagonizes IL-1 beta-induced apoptosis of rat chondrocytes. Chondrocytes isolated from newborn rat joints were exposed to IL-1 beta. The cell viability was analyzed by the MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide) assay, and the apoptotic cells were counted with DAPI staining. The levels of Akt, phosphorylated-Akt (p-Akt) and downstream protein targets of Akt were detected by western blotting. The results showed that nicotine neutralized the effect of IL-1 beta on chondrocytes by activating PI3K/Akt signaling pathways, including the PI3K/Akt/Bcl-2 pathway, to block IL-1 beta-induced cell apoptosis and the PI3K/Akt/p70S6K (p70S6 kinase)/S6 pathway for promoting protein synthesis, modulating its downstream effectors such as TIMP-1 and MMP-13. Activation of the PI3K/Akt pathway is, in part, required for the effect of nicotine on IL-1 beta-induced chondrocyte apoptosis in a rat model of osteoarthritis. (C) 2012 Elsevier Inc. All rights reserved

人参皂甙Rg3抗小鼠Lewis肺癌的机制研究

目的以小鼠Lewis肺癌为肿瘤模型探讨人参皂甙Rg3抗肿瘤机制。方法以肺癌细胞系LLC荷瘤C57/BL小鼠建立小鼠肺癌模型,随机分为人参皂甙Rg3组、阳性药顺铂组和模型组,分别给予人参皂甙Rg3、顺铂和生理盐水;同时设立空白对照组。以肿瘤质量、抑瘤率观察人参皂甙Rg3的抗肿瘤效果;以流式细胞术测定脾脏CD4+T细胞、CD8+T细胞数量及比值;以Elispot技术检测机体肿瘤抗原特异性CTL的诱生情况;以肝脏指数、脾脏指数、胸腺指数判定人参皂甙Rg3的毒副作用。结果人参皂甙Rg3组抑瘤率高于顺铂组,差异具有统计学意义(P<0.05)。生理盐水组小鼠脾脏CD4+T细胞、CD8+T细胞百分率比正常小鼠低,而人参皂甙Rg3组和顺铂组高于生理盐水组,差异具有统计学意义(P<0.05)。人参皂甙Rg3组肿瘤特异性IFN-γ斑点数明显增多,与生理盐水组相比具有统计学差异(P<0.05),顺铂组脾脏无肿瘤特异性IFN-γ斑点出现。和模型组相比较,人参皂甙Rg3组小鼠肝脏、脾脏、胸腺指数无明显差异,而顺铂组的肝脏、脾脏、胸腺指数低于人参皂甙Rg3组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 LLC细胞荷瘤小鼠具有明显的免疫抑制现象,人参皂甙Rg3可显著增加脾脏CD4+T细胞、CD8+T细胞阳性率并促进肿瘤特异性CTL细胞诱生,人参皂甙Rg3无肝脏、胸腺、脾脏毒性

普乐可复防治大鼠抗肾小球基底膜肾炎的实验研究

观察普乐可复 (FK5 0 6 )防治大鼠抗肾小球基底膜 (GBM)肾炎的疗效。方法 :复制大鼠抗GBM肾炎模型。实验分 3组 :肾炎 +FK5 0 6组、肾炎对照组及正常对照组。大鼠一次性尾静脉注射抗GBM抗血清后 6h内皮下注射FK5 0 6注射液 (0 5mg·kg-1·d-1) ,至第 2 1d。对照组则给予等量的生理盐水。定期于第 4d、第 14d和第2 1d ,检测大鼠尿蛋白、血清肌酐和尿素氮水平 ,观察肾组织病理学改变 ,以及检测T淋巴细胞转化功能。结果 :肾炎对照组大鼠注射抗血清后于第 4d即出现异常蛋白尿 ,血清肌酐和尿素氮亦持续上升 ;肾小球内可见细胞数增加和新月体形成 ,肾小管内大量蛋白管型 ,GBM呈不规则增厚 ,足突大片融合 ;T淋巴细胞转化功能异常。而肾炎 +FK5 0 6组大鼠上述病变均明显较轻。结论 :FK5 0 6能够明显改善大鼠抗GBM肾炎的肾功能